Способ определения скорости рассасывания пересаженного трансплантата

Союз СфввтскинСоциапистичесиикРеспублик ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 881616(22) Заявлено 170479 (21) 2787781/28-13с присоединением заявки РЙ(51)М. Кл. 6 О 1 й 33/50 Рфудеретееннык комнтет СССР но делам нэаеретеннй н открытнй(53) УДК 616.089.843(088 8) ДфЧж.,С,Н.Румянцев, Т.ИЗамыслова, В.И.Савельев,и Р.В,РосковЛенинградский научно-исследовательский инсТитут вакцини сывороток и Ленинградский научно-исследовательскийинститут травматологии и ортопедии им. Р,Р.Вредена(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СКОРОСТИ РАССАСЫВАНИЯ ПЕРЕСАЖЕННОГО ТРАНСПЛАНТАТА Изобретение относится к медицийе ,и может быть использовано для определения качества консервации биологических трансплантатов из соединительной ткани.Наиболее близким к изобретению является способ определения скорости рассасывания пересаженного трансплантата путем пересадки его животным, выявления замещения трансплантата тканью реципиента, и определения скорости рассасывания трансплантата по величине этого замещения 111Однако известный способ является сложным и трудоемким.Целью изобретения является ускорение и упрощение способа.Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения скорости рассасывания пересаженного трансплантата, последний инкубируют при рН 7,2 и температуре 37 С в физио ологическом растворе, содержащем 0,1% коллагеназы и 0,08% СаС 1, далее определяют содержание аминокислот в инкубационной среде и по ихколичеству - скорость рассасыванияпересаженного трансплантата. П р и м е р. Проводят определение скорости рассасывания образцов ткани сухожилий, консарвированвых заморажи" ванием, в парафине, в силиконовом каучуке (СКТН 1 и формалине, При этом контролируемые образцы сухожилий в навесках по 50 мг помещают в 10 пробирок (по две пробирки на образец, законсерВированный аналогичным способом), с добавлением в каждую из них по 5 мп физиологического раствора, содержащего, 0,1 г коллагеназы и 78,8 мг СаС 1 а. Для доведения рН раствора до 7,2 в него добавляют бикарбо" нат натрия. Образцы выдерживают в указаноном растворе в течение 48 ч при 37 С, после чего проводят визуальное и биохимическое определение интенсивности их рассасывания.881616 Интенсивностьрассасывания Количество микромолей аминокислот ( биохимическая оценка) Целостность образца визуальная оценка Способ консерва- ции Образец,Ю 3400 Высокая Полное рассасывание 1 СКТН Частичное рассасывание Средняя 2700 Замораживание 2450 То ке То же 3 В парафине4 В формалине Низкая 90 Целостность сохранена Формула изобретенияРезультаты исследования контролируемых образцов приведены в таблице.При визуальной оценке исследуютстепень целлостности исследуемыхобразцов по сравнению с замороженным,При биохимической оценке исследуемыхобразцов определяют содержание аминокислот в инкубационной среде. Дляэтого из пробирок берут выемки по0,2 мл надосадочную жидкость), ккоторым добавляют по 1 мл 47.-ногораствора нингидрина, содержащего на1 мл 0,2 М. цитратного буфера (рН=5,0)160 мг СаС 1 2 НО. Смесь подогреваютв течение 20 мин в кипящей водянойбане. После охлаждения до комнатнойтемпературы, в каждую пробирку добавляют па 5 мл пропанола и исследуют на спектрофотометре СФпри570 нМ. При этом количество микромолей аминокислот определяют по стандарту лизина,Из таблицы видно, что трансплантат, консервированный в СКТН, под действием физиологического раствора, содержащего коллагеназу, полностью рассасывается, а в инкубационной среде содержится большое количество аминокислот. В организме реципиента под взаимодействием ферментных систем трансплантат рассасывается быстрее, К 3-6 месяцам на месте трансплантата образуется сухожилистоподобСпособ определения скорости рассасывания пересаженного транспланный регенерат. Однако регенерат былвдвое тоньше и менее прочный по сравнению с исходным трансплантатом.Трансплантат, консервированный врастворе формалина, почти не рассасывается и сохраняет свою целостность.При трансплантации в организме реципиента, его рассасывание проходитв течение 9-12 месяцев. Транспланта-,10 ты, консервированные замораживаниеми в парафине, рассасываются синхронно. При этом интенсивность рассасывания средняя,В организме реципиента эти транс 15 плантаты подвергались процессам рассасывания и замещения новой коллагеновой тканью, протекающим такжесинхронно. В результате к 3-6 месяцам на месте трансплантата образовывался полноценный регенерат ткани,по структуре и физическим свойствамблизкий к нативному сухожилию.Использование изобретения позволяет исключить применение лабораторныхживотных, пересадку им образцов ткани и длительные гистологическиеисследования. Кроме того, изобретениепозволяет резко сократить трудоемкость и длительность процесса, атакже производить количественныйанализ степени и скорости лизированияткани под,цействием ферментной системы 55 тата, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью ускорения и упрощенияспособа, трансплантат инкубируютпри рН 7,2 и 37"С в физиологическом% Заказ 9962/67 Тираж 910 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 растворе, содержащем О,Х коллагеназы и 0,082 СаС 1, далее определяютсодержание аминокислот в инкубационной среде и по их количеству - скорость рассасывания пересаженногоТрансплантата. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе