Способ определения вилтоустойчивостихлопчатника

Своз Советски нСоциалистическихРеспубзтик и 816440 К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22)Заявлено 11.10.79 (21) 2854687/30-15 с присоединением заявкиА 01 Н 1/04 ЗЪеударстненный комитет СССР ло делам изобретений и открытий(53)УДК 632.938 (088.8) Опубликовано 30.03.81 Бюллетень12 Дата опубликования описания 30.03.81и К. М. Богданов, А, С. Дариев, Ю, Г. Козлов, Х. 3. Турсунов и К. А. Яновский(72) Авторы изобретения Институт кибернетики с вычислительным центромАН Узбекской ССР и Институт экспериментальнойбиологии растений АН Узбекской ССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИЛТОУСТОЙЧИВОСТИ ХЛОПЧАТНИКА Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к селекции хлопчач ника,. и может быть использовано для от бора вилтоустойчивых. сортов и форм хлопчатника.Известен способ определения устойчи.5 вости растений хлопчатника к вилту, при котором проводят гибридизацию молекулярной ДНК, выделенной из хлопчатника с меченой .ОНК-С, выделенной из гриба вертициллозного вилта, и по степени гибридизации судят о степени вилтоустой-чивости Я и 12 .Недостатком этого способа является то, что выделение ДНК проводят из. про ростков в раннем возрасте, когда устойчивость всех исследованных хлопчатников не проявляется должным образом, Генетически детерминированным признаком вилтоустойчивости обладают все сорта хлопчатника, проявление же свойств устойчивости зависит от условий окружающей среды и от фазы развития растений. В связи с этим уменьшается достоверность определения устойчивости хлопчатника поданному способу.Известен также способ определения устойчивости хлопчатника к вилту, основанный на подсчете микросклероциальных скоплений в сосудисть.волокнистых пучках ксилемы инокулированных суспензий гриба, проростков хлопчатника 3 .Недостатком способа является то, что при инокуляции не учитывается доза гриба, т.е, инфекционная нагрузка вилта, от которого прямым образом зависит количество микросклероциальных скоплений, принятое за показатель степени устойчивости. Следовательно, достоверное определение вилтоустойчивости данным способом должно производиться 3-5 раз, что замедляет процесс установления и отборавилтоустойчивых сортов хлопчатника,Бель изобретения - ускорение опреде;- ления вилтоустойчивости хлопчатника и по-, вышение достоверности способа в целом.Поставленная пель достигается тем, что .готовят микротомные срезы стеблей,816440 чество строк тив - 60"; гис тограммы ся не только 50 55 измеряют их оптическую плотность в каждой точке и по величине оптической ппот ности судят о вилтоустойчивости хлопчат ника.Способ осуществляется следующим образом.Из стеблей хлопчатников в зоне корневой шейки приготавливают микротомные срезы толщиной в 100 мкм и проводят общую окраску водным раствором сафра О ,нино, затем их наклеивают на предметное стекло смесью глицерий-желатин. Приготовленные таким образом препараты сканируют под микроскопомфПРОТВАф, на котором можно измерить 15 оптическую ппотность в каждой точке исследуемого образца. Попученные данные усредняют и строят гистограммы распределений оптических плотностей. , Распопожению этих гистограмм по оси абсцисс, .т.е. степени уменьшения оптических плот- ностей, соответствует уменьшение степени вилтоустойчивости., Спедовательно, при построении гистограмм распредэления оптических плотностей исследуемых хлопчатников можно выдепить три зо ны: зону бопьщих, средних и малыхнлотностей; которые отражают соответствующие степени вилтоустойчивости, Таким образом, строятгистограммы исследуемых хпончатников и по расположению их в какой-либо из трех вышеуказанных зон судят о степени устойчивости хпопчатника к вилту.П р и м е р . В фазе бутонизации-цветения, когда признак устойчивости всех хлопчатников проявляется максимально, готовят срезы из стеблей следующих хлопчатников: ,дОГБ 01 цщ Б 5 Р п)ВХсОпОГП ЧОР. ЙЮГ 05 О Ю - дикая высокоустойчивая форма, Ташкент 1 - относительно устой 40 чивый (средняя устойчивость) промышленный сорт," Узбекистан- новый перспективный сорт, устойчивость к винту окончательно не установлена;С АОфгэ 16- дикий вид из пустынь Австралии, изучается впервые; С- неустойчивый сорт.Готовят по три среза с одного расте- ния, а с каждого сорта и вида берут по три растения. У всех полученных срезов на установке "ПРОТВА" измеряют оптические плотности и по усредненным результатам строят гистограммы распредепения оптических плотностей каждого из исследуемых хлопчатников. Оптические плотности измеряют ири следукнпем режиме; диаметр зонда с 3 5 - 0,5 мкм; шаг сканированияП= 0,5 мкм;длина строки д х - 20 отсчетов коли 40 - 16 отсчетов; обьекокуляр - 10. ПолученныеМхлопчатников отличают по их значению оптических ппотностей, но и по виду распредепения.На графике представлены гистограммы исследованных хлопчатников, которые дляудобства строились не по значениям оптических плотностей, а по значениям коэффициентов пропускания. В зону большихплотностей (аб), т.е. в зону высокой устойчивости, вошла гистограмма эысокоустойчивой формы хлопчатника ГпЕЧСОМВ,Гистограммы относительно устойчивогосорта Ташкенти неустойчивого сортаСвошли соответственно в зонысредних (бв) и малых (вг) ппотностей.Судя по графику устойчивость новогосорта Узбекистан. близка к устойчивости сорта Ташкент, а дикий видС,01 цйРО 1 Е является неустойчивым каки сорт С. Результаты подщерждаются и экспериментами на вилтовомфоне. Использование предлагаемого способа для опенки степени вилтоустойчивости хлопчатника обеспечивает следующие преимущества по сравнению с другими способами,Повышается точность и достоверность оценки устойчивости хлопчатника к вилту за счет определения устойчивости в фазе бутонизации-цветения, когда устойчивость всех хлопчатников проявляеч- ся максимально, что значительно ускоряет отбор вилтоустойчивых сортов хлопчатника для промьгщпенного сева. Кроме того, дает возможность опредепить устойчивость диких форм хлопчатника, что в свою очередь ускоряет вовлечение диких вилтоустойчивых хлопчатников в практику селекционной работы. Формула изобр ет ения Способ определения виптоустойчивости хлопчатника, включающий выращивание проростков хлопчатника и отбор исследуемых образцов, о т л и ч а ю - щ и й с я темчто, с цепью ускорения определения и повышения точности, готовят микротомные срезы стеблей, измеряют их оптическую плотность в каждой точке и по величине оптической плотности судят о вилтоустойчивости,Составитель М., МирзаевРедакто М. Лысого ова . Техред И.Асталош Корректор . В,Синиц ПодписноеСР 1072/2 ТиражВНИИПИ Государственного ССпо делам изобретений и113035, Москв . Ж; Рау бч д 4/5филиал ППП Патентф, г. Ужгород, ул. Проектная,Зак 5Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Авторское свидетельство СССРй 511917 е кл. А 01 Н 1/02 ф 1976. б2. Авторское свидетельс 1 во СССР.М 506623, кл.101821/20, 1976.(прототип).3. Авторское свидетельс ео СССРМ 193023, кл. О 01 О 1/16, 1966. 700комитетаоткрытийшскаи на