Способ отбора вилтоустойчивых форм хлопчатника

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИА ЛИСТ ИЧЕСНРЕСПУБЛИН 19) Я 51)4 А 01 Н 1/О ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ной реакции. Для отбора нилтоуст чиньх форм хлопчатника проросткиг ращваот в темноте при 26-27 С в чение недели, после чего наносят помощью капилляра 7-10 капель (О индуктора фитоалексинов, ньщелен из мицелия вирулентной расы гриб Другую часть проростков поднерга воздействию сначала 0,1 Е супрессо фитоалексинов, выделенного из то расы возбудителя болезни, затем го же самого индуктора фитоалекс После этого рассчитывают количес ное содержание фитоалексинов в о группах, а об устойчивости судят разности между показателями соде жания фитоалексинов при индукции супрессииК устойчивым относят раэцы, у которых данная величина +5 мкг/г сырой ткани, к восприимч ным - ниже -5 мкг/г и толерантным в пределах от -5 до +5 мкг/г. ой- вы- тес,13) льнойР нь Зельцер ют устойчирастем. Метод ИП, 1975(54) СПОСОБ ОТБО ФОРМ ХЛОПЧАТНИКА (57) Изобретение му хозяйству и м я к сельско использова относит жет быт вьппе иных фо ь изобр и возмо но в селекции вилтоустои а. Целцесса сортов хлопчат корение ой защитсть выявления спе ли. Полученн ростки уклад пластинки на ел ьсхло вано вения на от друго липкой лент й в дан ртицил" под семядольн вой шейки. 1 а капилляра нан элиситора на другой (от 7 котиль). Зате широкий сосуд териала ующи и одна плас ой на расст висали в со и хлопчатнири 26-27 С ваю еде" ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Институт экспериментбиологии растений АН УэС(56) Оценка и селекция навость сельскохозяйственныхний к болезням и вредителческие указания, М,; ВАСХс. 39-43. Изобретение относится к с му хозяйству, преимущественно водства, и может быть использ селекции хлопчатника для полу устойчивого к распространенно ное время расе возбудителя не лезного вилта селекционного м Цель изобретения - ускоренцесса и возможность выявленияфической защитной реакции,Способ осуществляется следобразом.Проростк ка выран темноте и н тече е этиолиронанные провают на стеклянныерасстоянии 1-1,5 см оди закрепляют с помощьюили пластилина в местах ыми листьями и у корнегипокотили с помощьюосят капли раствора (0,17.)расстоянии 1 см одна от до 10 капель на 1 гипом пластинки помещают вна подставки так, чтоинка находилась над друянии 2-3 см, а корешки уд, на дно которого на 3 15072 Ь ливали воду. Сверху корешки покрывают смоченной водой ватой, Сосуд с пластинками прикрывают сверху темной тканью и оставляют ца сутки ири темо5 пературе 20-22 С. Затем проростки снимают с пластинок, отделяют гииокотили от корней и семядольных листьев, промывают сначала проточной водопроводной, а потом дистиллированной водой, обсушивают фильтровальной бумагой, взвешивают, нарезают на мелкие кусочки (по 2-3 мм) и заливают хлороформом из расчета на 1 объем гииокотилей 3 объема хлороформа. Залитые 15 хлороформом кусочки гипокотилей вколбочках с притертыми пробками осе тавляют на сутки в холодильнике +ч С, затем отфильтровывают хлороформныеэкстракты на стеклянных фильтрах Гу ча 9 1 или 2, промывая кусочки чистым хлороформом. Хлороформные экстракты с помощью водоструйного насоса упаривают досуха и растворяют в 2-3 мл хлороформа (в зависимости от количества взятых для анализа гипокотилей; так, на 3 г гипокотилей брали 2 ми хлороформа) и с помощью капилляра наносят на тонкослойные пластинки 81 цГо 1 БЧч по 0,1 ми в ият цо, Пластинки помещают в хроматографические камеры с притертыми стеклянными крышками, на дно которых наливают растворитель метанол - бензол (1:9) в количестве 10 мл. После одно кратного пропускания растворителя через пластинку ее высушивают, опрыскивают с помощью пульверизатора раствором флороглюцина (флороглюцин 2 г, 9 Ь -ный этиловый спирт 10 мп, концентрированная НС 1 5 мл), При этом фитоалексины окрашиваются в малиновый цвет, В качестве метчика может служить чистый фитоалекеиц хлопчатника - изогемигоссипол. Другие 5 сопутствующие изогемигоссиполу флюроглюцин - положительные вещества обозначаются суммарно как "госсиполэквивалент".Проявленные пятна фитоалексицов50 соскабливают скальпелем с хромато 1 - рамм в пробирки на 5 ми с притертыми пробками, заливают 3 ми раствора бецзол - метанол (9: 1) и помещают на 1 ч в темное место.Оптическую плотность элюатов определяют на ФЭК с синим светофильтром, кювета 0,5 см. Количественное содержание фитоалексицов определяют по калибровочному графику, составленному дпя чистого раствора изогемигоссииола. Количество фцтоалексицов в пятне пересчитывают ца 1 г сырых гипокотилей, В качестве контроля вместо элиситсра ца гциокотцлц наносятдистиллированную воду, а схроматограммы соскабливают участки без окрашенныхпятен и делают поправку на контроль.Аналогичные действия осуществляюти с гипокотилями тех же форм хлопчатника, предварительно замоченными в 0,17,-цом растворе супрессора, помещенными на сутки в темное место при 5 С, отмытыми от суирессора и помещенными ца стеклянные пластинки, Поразности между показателями содержания суммы фитоалексинов при индукции (цацесецие элиситора) и супрессип ицдуцировация (замочка в супрессоре и последующее нанесение элиситора) судят о степени восприимчивосили устойчивости данного сорта (вида, подвида, формы и т.д,) хлопчатника к той или иной расе патогенавертициллезного вилта, Если фитоалексццообразование под действием элиситора блокируется (подавляется) под действием суирессора, то это связано с восприимчивостью данной формы хлопчатника к данной расе патогенаИ наоборот, возрастание индукции фитоалексинообразования после воздействия супрессора свидетельствует об устойчивости данной формы хлопчатника к данной расе патогеца. Причем о степени устойчивости и восприимчивостисвидетельствует величина разницы между показателями супрессии и индукции,П р и м е р. Проводится отбор растений, устойчивых к расе 2 гриба возбудителя вертициллезного вилта хлопчатника, среди сортов, видов и гибридов хлопчатника, полученных методом дополнительного опылеция сортов С-ч 727 и 108-Ф пыльцой отдаленных форм. Полевая оценка на вилтоус- тойчивость к размножившейся в почве расе 2 патогеца проводится по срезу стебля у корневой шейки в 25-30-кратной повторности. Отмечаются устойчивые толерантные и восприимчивые к вилту растения по проценту заболевших в сильной и слабой степени и здоровых растений.Степень устойчивости сорта (вида, гибрида) хлопчатника к расе 2 определяют по разности между содержани1507264 6 ем фитоалексииов при воздействии супрессора и при индуцировании, Если эта величина отрицательная (ниже -5 мкг/г сырой ткани), то этот вид (сорт, гибрид) восприимчивым, если +5 и выше - устойчивым, если в пределах от -5 до +5, то толерантным к расе 2.П р и м е р 1. Под воздействием индуктора у растений гибрида Л(С+ звр шех 1 сапцщ) образуется 54,2 мкг/г сырдй ткани фитоалексииов, а под влиянием супрессора из расы 2 индукция возрастает до 76,5 мкг/г. Разница составляет 10 15 20+ 22,3 ) +5 - устойчивость к расе 2. 25 30 Это свидетельствует о восприимчивости этих растений к расе 2 гриба.-22,4-5 - восприимчивость к расе 2,35 П р и м е р 3. У растений семейства 3+Аиндуцируется 58,7 мкг/г фитоалексинова под влиянием супрес 40 сора эта величина составляет50,0 мкг/г 56,0 - 58,7 = -2,7+5 7 -2,7 ) -5. 50Этн данные подтверждаются полевыми опытами, где в примере 1 число 76,5 - 54,2 = 22,3 мкг/г,что свидетельствует об устойчивостиэтого гибрида к расе 2. П р и м е р 2. У растений семейства П (СС+ А) индуцируется 40 мкг/г фитоалексинов, а под влиянием супрессора индукция снижается до 13,6 мкг/г 13,6 - 40,0 = -22,4 мкг/г. Это свидетельствует о толерантности этого гибрида к этой расе здоровых растений составило 86,67, аостальные заболели в слабой степени(устойчивость). В примере 2 число за.болевших в сильной степени растенийсоставило 72,47, остальные заболелив слабоГг степени (восприимчивость).В примере 3 64,67 здоровых растений,а остальные в слабой степени (толерантность).ПредЛагаемый способ позволяет ускорить процесс оценки и отбора на вилтоустойчивость хлопчатника и выявить расовую специфичность защитных растений на вилт хлопчатника,Формула изобретения Способ отбора вилтоустойчивых форм хлопчатника, включающий выращивание хлопчатника, поиск и размножение вирулентной расы возбудителя данного заболевания, осуществление контакта растений с инфекционным материалом на ранних этапах развития, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения процесса и возможности выявления специфической защитной реакции, контакт осуществляют на стадии гипокотиля, в качестве инфекционного материала используют индуктор фитоалексинов, выделенный из мицелия вирулентной расы патогена, растения каждого изучаемого образца делят на две группы, одну из которых подвергают воздействию индуктора фитоалексинов, другую - последовательно, сначала супрессора фитоалексинов, выделенного из той же расы возбудителя болезни, затем того же самого индуктора фитоалексинов, после чего рассчитывают количественное содержание фитоалексинов в обеих группах, а об устойчивости судят по разности между показателями содержания суммы фитоалексинов при индукции без супрессора и при индукции с супрессором, при этом устойчивым считают образец, у которого зта величина выше +5 мкг/г сырой ткани, восприимчивым - ниже -5 мкг/г, толерантным - в пределах от -5 до +5 мкг/г.