Штамм а-18-продуцент 5 -экзонуклеазы

ОП ИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Сощиалистических Республик(23) Приоритет Государственный комитет СССР оо делам изобретений и открытийОпубликовано 300980. Бюллетень 119 36 Дата опубликования описания 03. 10. 80Изобретение относится к Ферментной отрасли микробиологической про- " мышленности и может быть использовано для получения 5 -мононуклеотидов,при меняемых в пищевой промышленности для улучшения вкусовых качеств готового продукта и в медицине.Известен штамм актиномицета Аст.1- лощусеа сое 11 со 1 ог А, продуцирую О щий внеклеточную 5 -экзонуклеазу. Этот штамм характеризуется уровнем биосинтеза внеклеточной 5-экзонуклеазы при культивировании глубинным способом на среде, содержащей осахаренные пшеничную муку и крахмал,соли в пределах 100 ед/мл Щ .Целью изобретения является получение штамма актиномицета Аст 1 повусев сое 11 со 1 ог А, отвечающего треО бованиям Ферментного производства, т.е, обладающего повышенной способностью к биосинтезу 5 -экзонуклеазы.Штамм Асй 1 лоаусеь сое 11 соог Аполучен в результате многократ ного рассева исходного штамма Асс 1 поаусеа сое 1 1 со 1 ог А. Полученный штамм Ас 1 ломусеа сое 11 со 1 ог Аподвергали проверке на Ферментативную активность при хранении и пересевах на агаризованной питательнойсреде,Полученный штамм имеет следующиеморфологическую и Физиологическуюхарактеристики.М о р Ф о л о г и я, Твердая среда,содер-жащая осахаренные оС-амилазой пшеничную муку и растворимый крахмал,соли. Мицелий имеет вид очень тонкихразветвленных гиф. Стенки клетокмицелия прямые, Ширина клеток мицелия варьирует от 0,71 до 0,93 мкм,Спороносцы спиральные, с 1-3 завитками, нередко с примитивными спиралями, расположены моноподиально, одиночно. Споры овальные, шаровидные, сгладкой оболочкой,К у л ь т у р а л ь н о-Ф и з и ологические признаки,При выращивании на твердой питательной среде колонии штамма Аст,1 пощусеа сое 11 со 1 ог Анеправильнойокруглой Формы, поверхность бугристая, выпуклая, края неровные(рваные),. воздушный мнцелий отсутствует. Коло"нии частично окрашены в темно-розовый т;вет, Диаметр гигантской колониина 10-е сутки роста 10-12 мм. Нижняяповерхность колонии гладкая, средане буреет, пигмент в среду не выделяется.На агаризированной среде Чапека с3% сахарозы рост слабый, растет тон%ой, почти прозрачной пленкой. Колонии круглые, поверхность ровная,воздушный мицелий слабо развит -светло-розового цвета, диаметр колонии6 мм.На крахмал-аммиачной среде ростслабый, тонкой пленкой, среда не окрашена, диаметр колонии 3 мм.На МПА образует небольшие колониинеправильной Формы диаметром 8 мм,растет в виде тонкой морщинистойпленки, в центре колонии слегка выступающей над поверхностью угара, краяколонии неровные, воздушный мицелийскудный, не окрашенный, среда не буреет.На сусло-агаре растет хорошо в виде мощной пленки(морщинистой)кремового цвета, воздушный мицелий отсутст-вует, колонии круглые, края волнис-тые, диаметр 15 мм..На картофельно-пептонном агарерост хороший, колонии в виде морщинистой пленки, окрашенный в красновато-розовый цвет, края колонии волнистые, диаметр 7 им, воздушный мицелийскудный, белого цвета.На синтетической среде растет хорошо в виде небольших колоний(диаметр 6-7 мм),колонии гладкие, в центре слегка морщинистые, края неровные,колонии бесцветные или слегка розовые.На ломтике моркови рост слабый эместе укола; на ломтике картофелярост слабый в верхней части столбикав виде морщинистой пленки кремово"го цэета.Мясо-пептонную желатину не разжижает.Молоко хорошо пептонизирует на10-е сутки.Нитраты не восстанавливает,Отношение к углеводам. Крахмалгидролизует, сахара потребляет сподкислением среды.Отношение к температуре. При 20 Срост хороший, сплошной пленкой,желтого цвета, у верхнего края косякаскудный воздушный мицелий белого цвета.При ЗООС рост такой яе, мицелиймесФами окрашен в красный цвет. При37 С рост хороший в нижней части косяка в виде Морщинистой пленки. При50 С рост отсутствует.оФСпособ получейия Асс 1 пощусев сое 11 со 1 ог Асостоит в подготовкематериала для селекционной работы,в выделении моноконидиальных культур,изучении их естественной изменчивос-ти по признаку образования Ферментаи отбору лучших штаммов, служившихзатем исходными культурами для проведения последующихэкспериментов. Дальнейший этап исследования состоял в подборе питательной среды.Были проверены среды с различным содержанием пшеничной муки и растворимого крахмала,. пшеничную муку и раст"воримый крахмал осахаривали с 4 -амилазой(0,5 го.-амилазы ГЗХ на 40 г муки или крахмала), добавляли соли вразличных концентрациях, В результате была подобрана оптимальная питательная среда следующего состава,%:мука пшеничная, прогидролиэованная-амилазой, 2, растворимый крахмал,прогидролизованный с-амилаэой, 2,сульфат аммония 0,6, мел 0,6, калийхлористый 0,1, агар-агар 2. Культи 13 вирование штамма Асг 1 пооусев сое 11 со 1 ог Ав глубинных условиях проводили на жидкой питательной среде того же состава, только без агара,Рост штамма на укаэанной среде в усто ловиях глубинного культивирования накачалке при 180 об/мин и температуре28-30 С очень интенсивный, имеетвид густой кашеобразной массы. Макси-.мальное образование Фермейта наблюдается после 72-х часов роста. Показатели общей нуклеазной активности,определяемой спектрофотометрическимметодомпо изменению поглощения кис-лоторастворимых продуктов распадаРНК(6 мг/мм),составляет 200 ед/млфильтрата культуральной хидкости,Показатели активности исходного штамма не превышают 100 ед/мл,Таким образом; предлагаемый штаммАс 1 попусев сое 11 со 1 ог Апозволя"35 ет получить внеклеточную 5 -экэонуклеазу микробного происхождения,используемую в пищевой промышленностидля улучшения вкусовых качеств продуктов и для медицины, а также для40 получения 5-мононуклеотидов. Активность штамма Ас 11 ооеусев сое 11 со 1 огА, продуцирующего внеклеточную5 -экэонуклеазу; по сравнению с исходным штаммом Ас 1 попусев сое 11 со 1 ог4 Ав 2-3 раза выше и составляет 200.250 ед/мл.П р и м е р . Для получения препа,рата 5-экзонуклеазы штамм Асе 1 ооаусевсое 11 со 1 ог А"18 выращивают при темпе ратуре 30 С при аэрации 1 объем воздуха на 1 объем среды в течение 48 ч, Ак"тивность 5 -экэонуклеазы 400 ед/мл.Фильтруют, в полученном Фильтратедоводят рй до 5,5, добавляют М 1 С 1 ев качестве стабилйзатора и осаждают55 фермент 2,5 объемами ацетона.Получают препарат 5-экзонуклеаэуГ 10 Х активностьв 1 40 тыс.ед/г. Выходпрепарата с 1 и -8000 г.Использование предлагаемогодо штамма Асс 1 поеусев сое 11 со 1 ог А даст возможность получать высокоактивный внеклеточный Фермент при глу"бинном культивировании и тем самыминтенсифйцировать процесс производства.767204 Составитель И. ПриваловаРедактор Н. Спиридонова Техред Н,Граб Корректор М. Демчик Заказ 7 36/24 Тираж 522 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, 7(-35, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП"Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,4 формула изобретенияШтамм Асвощусев соесоог А,18 -продуцент У-зкзонуклеаэы.Хранится в коллекциикультурмикроорганиз,мов Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селекции,содержащая осахаренные -амилаэой пшеничную муку и крахмал, соли.Мицелий имеет вид очень тонких раз-ветвленных гиФ. Стенки клеток мицелия прямые. Ширина клеток мицелияварьирует от 0,71 до 0,93 мкм. Спороносцы спиральные, с 1-3 завитками,нередко с примитивными спиралями,расположенными моноподиально, одиночные. Споры овальные, шаровидные, сгладкой оболочкой,Культурально в физиологические признаки,На твердой Питательной среде колонии неправильной окоуглой Формы,края неоовные, воздушный мицелий сла"бый, колонии сеоого или розовато-красноватого цвета. Диаметр гигантскойколонии на 10-е сутки роста 10-12 мм.Среда ие буреет, пигмент в среду невыделяется.На агариэованной среде Чапека с3 сахароэы ростслабый, растет тонкой, почти прозрачной пленкой. Коло:нии круглые, поверхность ровная,воздушный мицелий слабо развит - светло-розового цвета, диаметр колонии6-7 вишь.На крахмал-аммиачной среде ростслабый, тонкой пленкой, среда не окрашена, диаметр колонии 3-4 мм.На МПА образует небольшие колониинеправильной Формы диаметром 7-8 мм,растет в виде тонкой морщинистойпленки, в центре колонии слегка выс.тупающей над поверхностью агара.Края,.колонии неровные, воздушный мицелийскудный, неокрашенный, среда не буреет.Яа сусло-агаре растет хорошо ввиде мощной морщинистой пленки кремового цвета. Воздушный мицелий отсутствует, колонии круглые, краяволнистые, диаметр 12-15 мм.На картоФельно-пептонном агарерост хороший, колонии в виде морщи.нистой пленки, окрашенные в красно О вато-розоватый цвет, Края колонииволнистые, диаметр 6-7 мм, воздушный мнцелий скудный, белого цвета.На синтетической среде растет хо- рошо в виде небольших колоний диаметром 6-7 мм. Колонии гладкие, вцентре слегка морщинистые, края неровные, колонии бесцветные или слегка розоватые.На ломтике моркови рост слабыйв месте укола, На ломтике картоФелярост слабый в верхней части столбика в видеморщинистой пленки кремового цвета.Мясо-пептонную желатину не разжижает.Молоко хорошо пептониэируетна10-е сутки.Нитраты не восстанавливает.:Оптимальная температура роста 371 С.,Рост хороший в нижней части кссяка в 30 виде морщинистой пленки.При 50 С рост отсутствует.Отношение к углеводам. Крахмалгидролиэует, сахара употребляет сподкислением среды.35 Ак "ивность штамма Асповусезсоесоог Асоставляет 200250 ед/мл Фильтрата культуральной жидкостиИсточники инФормации,40 принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССРВ 203837, кл, С 12 О 13/06, 1966