Способ выделения ферментного комплекса

фоас,",с,ияоИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 03,1077 (21) 2528511/28-13 (51) М. КЛ2 С 12 Р 13/10 с присоединением заявки М 9 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(23) Приоритет Опубликовано 150480. Бюллетень Мй 14- Дата опубликования описания 150480(72) Авторы изобретения Институт биохимии иМ, А.В,Палладина(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ФЕР 1 лЕНТНОГО КОМПЛЕКСА Изобретение относится к технологии получения Ферментных препаратов ,из микробиологического сырья и можетбыть использовано в Ферментной проьиыленности, а получаемый комплекс - 5для.лечения заболеваний печени и желудочно-кишечного тракта.Известен способ получения Ферментного комплекса с протелоитическойи амилолитической активностью, вклю Ччающийдвухступенчатое глубинное культивированиеплесневыгрибов Азрегп 111 цз огугае 3-9-15 на питательной среде с добавками карабоната и бикарбоната натрия в количестве 1,5-2 с по следующим отделением мицелия от культуральной жидкости, которую послеФильтрации и сгущения используют в пищевой промышленности для улучшениякачества мяса и ускорения брожения 2 Отеста 1 .Однако получаемый технический препарат-концентрат культуральной жидкости, имеющий протеолитическую активность 20 ед/мл, амилолитическую 2550 ед/мл, недостаточно очищен и непригоден для медицинских целей,Наиболее близким к изобретению потехнической сущности является спОсобполучения Ферментного комплексагриба 30 2Азрегд 111 рз огугае 8 Р, культивируемого при глубинном выращивании в контролируемых условиях 2,Способ включает концентрированиефильтрата культуральной жидкости путем вымораживания до содержания сухихвеществ бВ, осаждение Ферментов этанолом при рН 4,8-5,2 и сушку методомсублимацииФерментный комплекс, полученныйпо этому способу, содержит в основномкислую протеиназу и обладает слабойамилолитической активностью, При этомон загрязнен значительными количествами высокомолекулярных органическихвеществ, что делает непригодным этоткомплекс для применения в медицине.Целью изобретения является интенсиФикация процесса, повышение качества целевого продукта и обеспечениевозможности использования его в качестве лечебного 1 препарата,Поставленная цель достигается тем,что в способе выделения Ферментногокомплекса с протеолитической и амилолитической активностью",из концейтрата культуральной жидкости плесневогогриба Азрегд 111 цз огугае, предусматривающем осаждение комплекса этанолом и сушку, перед сушкой осажденный727 б 81 Ферментный комплекс растворяют в во- ряют в 32 л ледяной (0-2 С) воды,оде при 1-2 С и доводят рН раствора до доводят рН раствора до 6,9-7,0 при6,9-7,0, после чего ферментный комп-осторожном добавлении 2 М растворалекс осаждают из раствора сульфатом едкого натра, после чего прибавляютаммония 0,75-0,80 насыщения с после- равный объем 32 л) 0,25 М уксуснодующим диализом водного раствора Фер- кислого кальция Выпавшие взвешен 5%ментного комплекса против 0,005 М раст- ные примеси отделяют центрифугиро вора уксуснокислого кальция. ванием и в надосадбчную жидкостьпри этом сушку Ферментного комп- . добавляют сухой .сульфат аммония -лекса осуществляют лиофилизацией. 54,5 кг до 0,75 насыщения, При этОмСущность изобретения поясняется осаждают ферментные белки, которыепримером выполнения способа выделе- .через 1,5 ч отделяют центрифугирония Ферментного комплекса с проте- ванием йри 7000 об/мин, Осадок растолитической и амилолитической актив- воряют в ледяной воде и диализуютно стью, против 0,0050 раствора уксуснокислоП р и м е р. Исходным сырьем для го кальция при 4 С до исчезновениявыделения ферментного комплекса слу реакции на сульфат-ион. Полученныйжат технические препараты типа-Раствор ферментов сушат лиофилиза 1Амилоризин П 10 х или Амилоризин цией. Поскольку полученный ферментР 10 х из плесневого гриба Азрег-. ный комплекс предназначен для медид 111 пз огугае. цины, то к нему добавляют сахарозу10 кг сырья обрабатывают семикрат в соотношении 1:7,.которая одновреным количеством воды при комнатной менно стабилизирует препарат и разтемпературе и перемешиванйй в тече- бавляет его для ,гого, чтобы амилоние 2 ч дляэкстракции Ферментов,литическая активность препарата былаК 70 л экстракта при 2 С добавляют порядка 10000 ед/г и протеолитическаяо162 л охлажденного до 7 С этанола д 220 ед/г препарата,до конечной концентрации 75 для Характеристика и выход очищенногоодновременного осаждения протеазы Ферментного комплекса из исходногои амилаэы, Выпавший осадок раство- сырья представлены в таблице. Амилолйтйческая Протеолйтическая активность активнос Препарат Выход,по весуна 1 ксырья В отисходной Ъ отходи ой д 70 6200 ье ИсходноеОчищенныйамилазы и омплекс ротеазы 44-50 2 05000 Медицинск из компле 100000 20-3 й препаратса 70-320 4212 Получейййй очищенный ферментныйкомплекс с протеолитической и амилолитической активностью предназначендля компенсации .Ферментов кишечника,При изготовлении из него лечебнойФорьи лиофилизированный комплекс сдобавкой сахароэы помещают в желатиновые капсулы, дважды покрйтые5-ным раствором ацетофталатцеллюлозы. такое покрытие обеспечиваетсохранность капсул в желудочном сокеболее 2 ч, а в кишечнике они растворяются в течение 20 мин,Клинические и лабораторные исодедования Фармакологических свойств полученного .Ферментного комплекса подтверждают его нетоксичность и соответствие требованиям, предъявляемым,к лечебным Препаратам.Формула изобретения;1. Способ выделения Ферментногокомплекса с протеолитической и амилолитической активностью из концентрата культуральной жидкости плесневого гриба Азрегд 111 аэ огугае, предусматривающий его осаждение этано-,лом и сушку, о т л и ч а ю щ и й е я тем, что, с целью интенсификации процесса, повышения качества целевого продукта и возможности использования его в качестве лечебного препарата, перед сушкой,осажденный ферментный комплекс растворяют в воде 55 при 1-20 С и доводят рН раствора до6,9-7,0, после чего ферментный комп:лекс осаждают из раствора сульфатом .аммония 0,75-0,80 насыщения с последующим диализом водного раствора 0,ферментного комплекса против 0,005 Мраствора уксуснокислого кальция,2. Способ по п,1 о т л и ч а ю -щ и й с я тем, что сушку ферментного комплекса осуществляют лиофили зацйей.Заказ 1076/26 Тираж 522 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП фПатентф, г.ужгород, ул,Проектная,4 Источники инФормации,принятые во внимание при экспертизе.Авторское свидетельство СССРР 320528, кл, С 12 П 13/10, 1969. 2. Веселов И.Я., Воронов В.И.и Ильина ОП. Получения ФерМентног.комплекса гриба Азрегд 111 из огугае 8 Г . Микробиологическая промышленность., вып.7 (103), 1973, с.22-.25.