Способ фаготипирования холерных вибрионов

Союз Советсккк Сфцналксткчвсаа Реса убпннОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СЗМДВЧвЗЪСЧтаУ(5) М, Кл. С 12 К 7/О асудаВстаекей кемктетСовета МкккстВа СССВф делю кзсбВетекки вткриткй) СПОСОБ ФАГОТИПИРОВАН ЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ Ростовский-на-Дону гос научно-исспедовательск Изобретесще относится к области медияимской макробнопогии,Известен способ типирования холерныхвибриоиовэакиюча 0 шийся в том, что исследуемый материал дифференцируют по биотинам, Однако известный способ необеспечзеает воэможности типирования боаее широкого круга обьектов,С цеаью обеспечения возможности тинироватитя более широкого круга, обьектовинкубапию проводят в присутствии фагов1,П.1 У группы Мукерджи и вибриофаг 3900,455 и 7227,Иэ используемых шести фагов три пер- р вь 1 х взяты из коллекции Мукерджи, а три остапьных впервые выделены и хранятск в коллекции Противочумного института под теми же номерами. фаги 3900, 455 и 7227 выдепены иэ испражнений вибрионоситепей 20 в 1970, После пассажа на клоковой нелизогенной культурен,еИои 75 и через организм морской свинки в сочетании с действием УФ-пучей и селекцией прозрачных негативных копоний получены стабильные 25 вирулентные клоны этих фагов, которые и. включены в типирукнций набор.Все фаги нового набора разных серотипов, что обеспечивает стабильность диапазона их действия.Типируютций фаг (1 группа Мукерджи относятся к Т серотипу холерных фагов по отечественной классификации; фаг 2 (Пгруппа Мукерджи) относится ко П серотипуВ фаг 3 (1 У группа Мукерджи) - к ХУ; фаг 4 (3900) - к УП; фаг 5 (455) - к 1 Х; фаг 6 (7227) - к УШ, Все фаги обпа дают специфическим диапазоном действия на холерные вибрионы.Предлагаемым способом типировалось 99,65% исследуемых штаммов обоих биоти пов,Фаготипирование проводят без цредварнтепьной идентификации исследуемого штамма до биотнпа. Идентификацию фаготипа осутцествпяют по единой схеме, вместо двух раздельных цо Мукерджи (см,таблицу).Для фвгов 1-3 штаммом-хозяином является Ч,СЬокегаа 145, апя фагов 4-6- ,7,ейои 75550850 Идентификация фаготипов по Дрожевкиной-Арутюнову Штаммы хранятся в филиале ГИСК им,Л А, Тарасевича.Фаготивироввние осуществляется следусощим образом,Иэ 3часовой бульонной культуры ти 5пируемого штамма холерного вибриона готовят газон двухслойным методом. Чашкиподсушивают, после чего на поверхностьвторого слоя накосят шесть типирующихфвгов. Каждый фаг используют с единой концентрацией фаговых корпускул в 1 мл 1-510 . При типировании фвги наносятблибо штампом по методу В, Г. Середина ссотрудниками (1071) - при большом чис 1 Ьле штвммов, либо петлей диаметром 3-4 ммпри единичных исследованиях. После нанесения фага чашки с посевами переворачивают и инкубируют в термостате при 37 С,11 р и м е р 1, Исследуемый материал - четыре штамма холерных вибрионов %6417, 6451, 6470 и 6401 - засевают на чашке Петри известным способом и инкубируют с перечисленнымио выше шестью типирующими фагами при 37 С в течение 12 ч. В посевах штаммов 6417, 6470 и 6401 зона лизиса проявляется при контакте с 4,5 и 6 фагами. В посеве штамма 6451 зона лиэиса проявляется при контакте с 4 и 6 фагвми.В остальных случаях лизис не был обнаружен, Нв основании полученных данных исследу мые вибрионы штаммов 6417,Учет результатов производят через 12-18 ч, Степень лизиса определяют по четырехбалльиой системе:нв месте нанесения фага четкая зона лизиса без вторичного роста;на месте нанесения фага четкая эона лизиса с единичными колониями вторичного роста;на месте нанесения фага видна зона лиэиса с вторичным ростом;+ едва, заметный след лизиса на месте нанесения фага;отсутствие лизиса,Продолжительной считается реакция оцениваемая не. ниже, чем на . Идентификацию фаготипа осуществляют по приведенной выше таблице,6470 и 6401 отнесеуа к феготипу 2, аштамма 6451 к аготипу 1 (см, таблицу50фаготипироввния Дрожевкиной-Арутюнова),Предложенный способ фаготипированияулавливает более тонкие щтаммовые различия, что позволяет выявить большее число фвготипов,55 Выявление большогочисла фаготипов среди циркулирующих вибрионов позволяет более полно испольэовать способ фаготипирования при эпидемиологическом анализе для выявления источника инфекции.550850 Составитель С, МалютинаТехред Н. Андрейчук Корректор А, Кравченко Редактор Е, Хорина Заказ 3801/46 Гираж 541 Подп исноеЦНИИГИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская набд, 4/5 Филиал ППП Патечтф, г, Ужгород, ул, Проектная, 4 формула иэобретения Способ фаготипироваиия холерных вибрионов путем инкубации исследуемого материала с индикаторными фагами и оценки б результатов по сочетанию наличия и отсуз ствия литических реакцийо т л и ч а юш и й с я тем, что, с целью обеспечения воэможности типирования более широкогокруга объектов, инкубацию проводят в присутствии фагов 1, П, 1 Ч группы Мукерджии вибриофаг 3900,455 и 7227. Источники информации, принятые во вниманив при экспертиэе;