Способ сортовой идентификации зерна и муки пшеницы

Союз Советских Социалистических Заеспубяик.(22) Заявлено о 1 ю.72.с присоединением зая 1827284 51) М Гвсударатаеиньй иемитетВеаата: йтиииатроа СССРиа делам изебретенийоткрыт 016, 01 Нблнковао 25 т.ть. Бюллетеньи (53а опубликования описания 28,04,76 Г. Кокарев, И, И, Гаврилюк и И. К, Губарев 2) Авторы изобретения дена Ленина научно- иеследовательский инстнуАтеиневвдства им; И. И. Вавилова(1) Заявит СНОСОВ СОРТОВОЙ ИБЕЙХИФИКАЙИИ ЗЕ И МУХИ ЛЮЕНИЦЫствляют следующимлиадина навеску муки изилн 1/3 зндосперма зали М мочевины, Экстрагиектрофорезу в нолиакИзобретение относится к сельскому хозяйству, а)именно к биохимии растений, н может быть использовано для определения сортовой идентификации зер.на и муки пшеницы,Известный способ сортовой идентификации зерна бн:муки пшеницы, заключающийся в получении злект.рофоретйческого спектра глиадина в полиакриламндном геле, не позволяет осуществить. точную идентификацию электрофоретических компонентов глиадина, без чего нельзя прочесть электрофоретическнй Юспектр и составить точную белковую характернсти.ку сорта.Цель изобретения . точное и быстрое определениесорта,Для этого по предлагаемому способу электрофо 1 ареграмму глиадийов определяемого сорта сопостав.ляют с электрофоретнческим спектром смеси глн.адинов типйчных представителей геномов А, В н Лпшеницы, по которому составляют формулу глиа.дина определяемого сорта и сортовую принадлеж. 20Ность его оценивают по каталогу сортовых формул,составленному также по эталонному спектру смесиглиадннов,Ра чертеже изображена структурспектра. 25 Йредлагаемьтй способ есущеобразом,Для выделения белка годного исследуемого зернавают пятикратним ебьемомруемый белок подвергают злрнламидном геле.Иолучеиную электрофореграмму глнадинов определяемого сорта сопоставляют с электрофоретическим спектром смеси тлидинов,Для юлучеиня эталонного злектрофоретическо.го спектра отбирают наиболее типичных нредстави.гелей источников геномов пшеницы, а именно полинии генома А.Т,1 оеоФ,ьс тгпт К 27141 (номеркаталога ВИР), по линии генома ВАе. аеИойевК.197, по лйнии генома Д-Ае. а(рач,ао аа К 109Берут по 100 )белка от каждого из этих образцов,смешивают и проводят электрофорез в полиакрил.амндном геле.Все электрофоретические компоненты сгруппнпонаны по фракциям ск, )а, з и ш, которыерасололожены в направлении от катода к старту. Впределах каждой фракции в том же направлениизанумерованы лозицнн компонентов. Максимальноечисло позиций для указанных фракций равно соот. ,507271 глиапина, При наличии спектров разного типа сос.тавляют соответствуюшие им формулы глиадина иопределяют процент их зерен в образце,При идентификации неизвестного образца сначалабопределяют его принадлежность к виду пшеницы(твердая или мягкая) по наличию или отсутствиюв а .глиадинах компонентов 8 и 9. Затем по каталогу сортовых формул соответственно твердых илимягких пшениц устанавливают сортовую принадлеж.И 1ность основной массы зерна и примесей других сортов, если таковые имеются,Для ускорения оценки образцов анализ ведут вдва этапа, На первом этапе в анализ берут 12-24 зер.на (одна закладка в аппарат) . Если спектры глиади.на по зернам однородны и совпадают со спектромсуммарного образца, то необходимость анализа остальных 80.82 зерен отпадает.Для быстрой оценки сортовой принадлежностизерна ведется только суммарный анализ образца.По такому же принципуестественно, определяют1 сортовую принадлежность муки.Предлагаемый способ достаточно быстрый и тре.бует для анализа всего лишь треть эндослерма. Кроме того, позволяет при необходимости определятьналичие в образцах примеси других сортов с точф 1 ностью до одного зерна на 100 зерен анализируемого образца,Ниже приведены примеры определения сортовойпринадлежности неизвестного образца зерна или ЗО муки (Х 1) и определение сортовой чистоты зерна(Я 2).П р и м е р 1. Полученные электрофоретическиеспектры глиадина неизвестных образцов зерна и мукирасшифровывают и записывают в виде формул, 3 которые приведены в табл. 1.Таблица 1 11 о 11 оОбряд. 246891011(1) 23489 1 4567 2 (1) (2) 567 3 (1) (2) 567 1234 123 1234 1234 124 14 345 (6) 7- ,3. 4 12567 1234 По наличию в со -глиадине компонентов 8 и 9 образцы 1, 2 и 3 отнесены к виду мягкой пшеницы и 60 по каталогу сортовых формул мягкой пшеницы идентифицированы соответственно как сорта Мироновская 808, Аврора и Кавказ, Вц 1 - глиадине образ.ца 4 компоненты 8 и 9 отсутствуют.По каталогу сор.товых формул твердой пшеницы образец идентифи.цирован как сорт Харьковская 46. Как видно иэ при.мера, предлагаемый способ позволяет различать иидентифипировать паже такие близкие по всем признакам сорта как Аврора и Кавказ.;П р и м с р . Для анализа взято 100 зерен за.91 3ветственно 7, 4, 4 и 12. Исходя из этого, спектр. 1эталон записывают в виде следующей формулы:4.1234567 ф 1234 1 1234 Ф 123456789101112. Отдельные компоненты этого спектра используют в качестве маркеров того или иного генома, Вчастности, компоненты 8 и 9 ю .глиадинов являют.ся маркерами генома Д.Сортовые формулы составляют путем сопостав.ления элекгрофоретических спектров глиадина определяемых образцов со спектром. эталоном. В сор.товую формулу вносятся номера тех компонентов,которые имеются в спектре глиадина определяемо.го сорта, Наличие в со -глиадинах компонентов8 и 9 характерно для всех сортов мягкой пшеницы.Они отсутствуют у сортов твердой пшеницы и служат надежным признаком различения твердых имягких пшениц. Сортовыми признаками являютсяраспределение компонентов по позициям и количественное соотношение их в пределах фракций. В сор.товых формулах номера интенсивных компонентовподчеркивают, слабых . берут в скобки. Возможнысдвоенные компоненты, Они обозначаются двумяточками над номером позиции,В случае невозможности идентификации какого.либо компонента путем совмещения спектров при.меняют метод белковых смесей или метод сплит.Для серийных анализов используют специально иэ.готовленные шаблоны спектра-эталона с коррекцией на изменение пути пробега компонентов в зависимости от условий электрофореза./Каталог сортовых формулсоставляютна основеанализа глиадина образцов оригинальных сортов. Наанализ берут 100 зерен. Идеальным является анализкаждого зерна. Если спектр глиадина всех зеренодинаков, то по нему составляют сортовую формулу соренного образца сорта Безостая 1. Проведен элект. рофоретический анализ глиадина каждого зерна.Выявлены три типа спектра, формулы которых при. ведены в табл. 2. Они соответствуют сортам Безо- стая 1, Аврора и Одесская. Как видно из таблицы, сортовая чистота образца составляет 94%, Образецсодержит 4% примеси зерна сорта Аврора и 2% - сорта Одесская.Из примера видно, что предлагаемый способ позволяет определять сортовую чистоту зерна в лабо.раторных условиях быстро, точно и в любое время года.Я 727Табл и да Формулы глиадина Число зерен Сорт Безостая 1 123 3689124 (1) 23458 12 1345689 1234 2567(3) 4567 1234 АврораОдесская 16 1234 В смеси глиадииов типичных представителей геномовА, В и Д пшеницы.2. Способпоп,1, отличающийся тем.что по электрофоретическому спектру смеси глиа.динов типичных представителей источников геномовсоставляют формулу глиадина определяемого сортаи сортовую принадлежность его оценивают по ката- .логу сортовых формул, составленному также поэталонному спектру смеси глиадинов. 1. Способ сортовой идентификации зерна и мукипшеницы по электрофореграммам глиадинов и полиакриламидномгеле, отличающийся тем,что, с целью точного и быстрого определения сорта,электрофореграмму глиадинов определяемого сортасопоставляют с электрофоретическим спектром 1 83 Ф 5 6 789 Ю /16,оставитевь трова И, Ковач Кооуектор А. Лакида 723 Подписноеударственного комитета Совета Министров СССР Редактор Т. ИвановаЗаказ 2118цни Техред Тираж ПИ Гос тенмй и открытийшскаи наб., д.4/5жгород, ул Гагарина и изобре-35, Рау 13035, Москва иинаи ППП "Па нт", г. Формула изобретения ХфыийУюУ Мо Фф 5 б 7