398603

-ФЮЬ - бивал и о тека М,398603 Союз Советских Социалистических РеспубликОП ИСАНИ ЕИЗОБРЕТЕН ИяК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(32) Приорптст Оп 5 блпковано 27.09.73. Бюллетень М 38 О ),1. Кл. С 12 с 1 13110 Государственный комитетСовета Министров СССРоа делам изобретенийи открытий 5;Г) УДК 663.14 (088.8) Дата опубликовавя описания 23.12.74(72) Авторы изобретения Р. В, Фениксова, А. С. Тихомирова, Н. А. Загустина,А. К. Куликова и Г. Г, Тронина Ордена Ленина институт биохимии им. А. Н. Бахи(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТАСоевая мукаЛимонная кислота.ЧДЗО 41(Спри рН равштм 2,0 - -6,0. 10 - 50 5 - 30 1 - 5 2 - -20 0,1-0,5 0,1 - 1,0 Изобретение относится к дикробеогОги еокой промышленности, точнее к прокзводству фермеетеых препаратов из культур микроорганизмов, в частности к способам полу 1 ееия ферментзеого препарата Р-галактозидазы.Известен способ получения ферментного препарата )3-галактозедазы путем выращивания на питательной среде прндуцируОщ 4 х ее плесневых грибов в глубинных условиях.Для еОвышени 5 активности р-галактозедазы предлагается в качестве продуцирующих микроорганизмов попользовать род А 11 егпага. Из рода А 11 егпа а может быть использован вид 1 епз, а из вида 1 епез - штамм 123. Данные микроорганизмы можно выращивать на питательной среде в присутствии соевой муки, лимоеной кислоты и необходимых минеральных солей ори рН ее равном 2,0 - 6,0.В качестве продуцента Р-галактозидазы предлагается плесневый гриб АИегпага епшз, выращиваемый па среде следующего состаВа, г/.1: Эта среда обеспе:пвает более высоки уровень биосинтеза (З-галактозидазы, на биосинтез особенно влияет начальная велочина рН среды. Прп культивпрованин на данной среде этого гриба 98 о р-галактозидазы переходит в к 1 льтрнсо кидкость, То наблюдаегс 51 только пя средекази 1 е 10 ГО состава 11 зея 111 те,1 ьнО ОО легчает дальнейшее выделение препарата )-гасЯктозчдазы. При добавлении в данную среду 2 - 1 О 4 галактозы образование фермента увеличивается на 20 - 30%. Оптимум рН р-галактоздазы данного продуцента равен 4,2; пр 5 и рН 5 сохраняется 80 оо активности, при рН 5,4 - 704 активеости. Это имеет значение 1 б для применения фермента в хлебопечеппп, таккак рН теста Олпзокк 5.3-Галястозидязя,используетс 51 для ицролпза лактозы молопых продуктов до глюкозы илактозы.20 Прп п 1 дролизе слаборастворнмый, несладкий, несбряживяезы 1 хлебопекярнми дронсжя зги, иногда 11 е усвяивяощ 1 Йся животным организмом дисахарид - лактоза,превращается в растворимую, более сладкую, сбражива 2 а е з у о, 5 еов я иВ а О 1 цюс 51 смесь з Оя Осяхядпдов.На этом основано лрактпеческое применение р-галактозидазы из различных продуцептов в хлебопеченин, в кондитерской промышленности, в тех отраслях пищевой прозышленности, 30 которые св 5 Заы с угплизацией побоеных про398603 310,50,5 ХН 4 МОзК,НР 04Мо 804 7 НзОКС 1гр рН рат ом 443 3 - 10 лг10 - 501 - 100,1 - 1,00,1 - 1,00,1 в 1,0 Куиурузньш экспрактЛакт 1 озаХНЛОзИа,НР 04МР 804КС 10 15 Среда1 10 - 50 5 - 30 1 - 5 2 - 20 0,1 - 0,5 0,1 - 1,0 Соевая мукаЛимонная иислота(ХН 4),804КНзР 04М 804КС 1рН=4,6. 50 10 лл30 г 65 дуктов переработки молока и с консервированием молока, в животиоводстве, в ветеринарии и в медицине.Примеры культивирования А 1 егпапа тепшз - продуцента р-галактозидазы. 5Посевньгм материалом служит 7-суточная культура грибов, выращенная при 28 С на агаризованной среде следующего состава, г/л: прн рН равном 5,0 - 8,0,ДалЬнейшее глубиыное культивированиегриба производипся в течение 2 - 5 суток при28 С па средах следующего состава, г/л; 20 Мицелий отделяется от иультуральиой жидкости, На 1 л кульгуралыной жидкости при культивирсваи;ги Л 11 егпапа накапливается до 2000 од:ниц з-галактозидазы. В культураль,ную жидкость переходит до 98% йсего синтезированного фермента,Активность з-гал актозидазы определяетс я колорюетрическп по появлению окрашенных молекул ортонитрофенола, оовобождающегося под дейспвнем фермента из бесцветиого ортопитро-феннл-з-Р-галактопиранозида прп рН равном 4,2. Среда 245В среду1 добавляют 2 - 10 г/л галактозыпри этом выход фермента увеличивается на 20 30 О/о, по сравнению со средой1,Выход р-галактозидазы для Л(еп 1 ага -160 единиц на 1 г кулыпуральной иидкости и40 едппгнц остается в мицелии, выросшем в 601 л среды,Среда 4Кукурузный экстрактЛактоза Выход р-галактозидазы для А 1 егпага на 1 л культуральной жидгкосли 500 единиц и 600 единиц остаетоя в,мицелии.Кульпурально-морфологическая характеристыка Л 1(егпапа 1 епцз на 10 сутками роста.Гриб о пнесен к роду А(егпага порядка Моп 11 а 1 ез вемейству Регпап(1 асеас,На синтетической среде Чапека с сахарозой и ХаИОз колошении диаметром 70 - 80 лл с равным краем, зональность слабо выражена, серые к центру оливково-серые, с выпуклой центральной частью. Воздушный мицелий от белого до оливково-серого, войлочнсвидный, спорообразование скудное. Обратная сторона колоний бурого цвета, Пигменпа нет.На оусло-агаре (сусло 5 ло Баллингу) коло. пии диаметром 70 - 80 лл с,равными краями, выпуклые, круглые, с ровной поверхностью. Воздушный мицелий обильный, белый, ватообразный. Обратная сторона колоний бурая. Пигмента нет,На среде с куку 1 зузным экстрактом и лактозой, г/л: Колонии диаметром 70 - 80 лл с равным краем, оируглые, выпузклые, зональность слабо выражена. Воздушный мицелий оначала белыййвойлочно видный, з атем,сероватый, обил ьный, Обратная сторона колоний бурая. Пигмента нет. А 1 егпапа 1 епшз характердзуепся на пинием спор, образующих мало разветвленные,цепочки. Верхушечная сидора образует, как правило, одну единственную спору. Содержание мелких 1 паровидных апор на конце цепочкц от 20 до 40%, Л 11 егпапа 1 епцз образует споры,коричневые, гладкие или бородавчатые с простыми но. сикамп 1 и сравнительно небольшими размерами. Споры состоят обычно нз довольно ограни;енного количества клеточек, разделение продольной перегородки зачастую сокращается до 1 - 2, поперечной - до 3 - 5. А 11 егпапа (епшв - сопрофит, имеющий патогенность, сравчимую с патогенностью Л. сЬаг 1 агшп 1. з 1 егпр 1 гу 1 шш и более высокую, чем А, сопвог 11 ае и Л. с 1 паг 1 агцгп, А(егпапа (епцз находят на листьях, плодах и корнях большого количества растений. Размеры спор колеблютоя в зависимости от субстрата или растения-хозяина и лежат в пределах 24 - 23 - 22 - 21 - 20 - 19 Х 12398603 1 рс дмст изобретения Составитель Г, Субботнна Техред Е, Борисова Редактор Л, Струве Еорреьтор О Тюрина Закав 3670 Изд, М 1520 Тираж 456 Подписное Ж 111 ИП 11 1 осударствсииого комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открь 1 тий Москва, Ж, Раугиская наб., д. 4/5Обл. тии. Кос;ромского уиравлеииа иадательств, полиграфии и книжной торгоила- 11 - 10 - 9 - 8 р, длина,носика колеблется от 3,1 до 7,6 р.Физиолого-биохимичеосие,признаии, Культура А 11 егпапа 1 епц 1 з растет при 20 - 35 С, оптимальная температура 27 - 30 С, растет при рН 2,6 - 8,0, оптимальный рН для роста составляет 3,0 - 5,0. Гидрголиаует лактозу и другие галактозидазы. Использует в качестве единственных источников углерода: лактозу, галактозу, глюкозу, малцпозу, сахарозу, арабинозу, трегалозу, целлобиозу, фруктозу, маннозу. Азот используег 1 ся в разных формах: аммонийный, нитратный. Более интенсивный рост культуры наблюдается на азотно-гсислом ахгмонви, на двухзамещенном фосфорно-кислом аммонии, Наиболее интенсивный рост наблюдается на сусло-агаре, среде чапека и на дру.гих средах, описанных выше. 1. Способ полу,ения ферментного препаратар-галактозидазы путем выращивания на пита.5 тельной среде продуцирующих ее плесневыхгрибов в глубинных условиях, отличающийся тем, что, с целью повышения акнпвности р-галактозидазы, в качестве продуцирующих микроорганизмов используют род А 11 егпаг 1 а.1 О 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что пзрода используют вид 1 епц 1 з.3. Слособ по пп. 1 и 2, отличающийся тем,что из вида 1 епшз иопользуют штамм 123.4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что 15 данные микроорганизмы выращивают на питательной среде в присутствии соевой муки, лихгонной кислоты и необходимых минеральных солей прп рН ее равном 2,0 - 6,0.