Способ выявления летучих антибиотиков у грибов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 1835429 ИСА Е ИЗОБ ВИДЕТЕЛЬСТ Е К АВТОРСКО ражаю Р,ии п и,на со 88.ИХ АН иагвел ОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕЕДОМСТВО СССРОСПАТЕНТ СССР)(71) Украинская сельскохозяйственная адемия(56) Харченко С.Н, Микромицеты, пощие корма в условиях Украинской ССтоксичные свойства (экологические икладные аспекты), Автореф, дисиск.уч.степ.докт,биол.наук, Киев, 19(54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ЛЕТУЧТИБИОТИКОВ У ГРИБОВ(57) Использование: изыскание продуцтов антибиотиков и других биологически Изобретение относится к изысканию среди микроорганизмов п)зодуцентов антибиотиков и других биологически активных веществ и может быть использовано в сельском хозяйстве при разработке экспресс- методов обнаружения в кормовых субстратах летучих продуктов, образуемых токсическими плесневыми грибами.Целью изобретения является повышение эффективности способа выявления летучих антибиотиков грибов.Поставленная цель достигается тем, что грибной материал (мицелий, споры и другие элементы), полученный при культивировании грибов в течение 10-ти суток на плотных и жидких питательных средах (пивное сусЛо и среда Чапека) при температуре 26-28 С, тщательно измельчают в кашицу и в количестве 10-15 г помещают равномерным слоем на дно стеклянных сосудов (стаканы объемом 50 - 100 мл, чашки Петри и Коха и др.), Для получения фотоэффекта указанные емкости накрывают на расстоянии 2-10 см от грибной массы черной светонепроницае 51)5 С 12 0 1/04, С 07 6 11 С 12 М 1/14 тивных веществ среди микроорганизмов и может быть использовано в сельском хозяйстве при разработке экспресс-методов обнаружения в кормах токсинообразующих плесневых грибов, продуцирующих летучие антибиотики. Сущность изобретения: грибной материал и колонии микромицетов измельчают и помещают на дно емкости, которая на расстоянии 2 - 10 см от грибной массы накрывают светонепроницаемой бумагой с вырезанными в ней отверстиями, сверху накладывают фотобумагу или фото- пластину эмульсией вниз и экспонируют, после чего получают отпечатки воздействия летучих антибиотиков. 1 табл. мой бумагой с вырезанными в ней отверсти- ями в виде геометрических фигур. Затем сверху на светонепроницаемую бумагу накладывают фотобумагу или фотопластину эмульсией вниз, которые экспонируют над продуцентами ЛА в течение 5 - 60 мин в светозащищенном боксе или камере при ком., натной температуре (18-20 С).Эффект действия ЛА грибов на фотоматериал получают без обработки его проявителем или закрепителем. Результат воздействия ЛА на фотоэкран (т.е. фотобумагу или фотопластины) получают в виде позитивных отпечатков иэображений узоров, вырезанных отверстий в фотонепроницаемой бумаге,Влияние ЛА грибов на фотоэмульсию . является результатом химического взаимодействия между ЛА и эмульсионным слоем подобно реакции бромистого калия с серебром, входящего в состав фотоэмульсии. По нашим данным интенсивность изображения отпечатков на фотобумаге зависит от химического состава ЛА, вида, штамма. воэ1835429 Тест к льт ы Экспозиция воздействия ЛА на фото- эмульсию мин Виды грибов-продуцентов ЛАА, А, п 19 егИачоз оста, ф Угн етение 801010070 1009040 90 20 80 53060 100 58 100 раста гриба-подуцента, контакта ЛА с фотоэмульсионным слоем.Количественная и качественная оценка активности ЛА в каждом конкретном случае может служить показателем степени и продолжительности воздействия токсических микромицетов на контаминированные ими корма,"а также дать одно иэ разъяснений причин микостазиса кормовых субстратов, а также избирательности поражения кормов определенными видами грибов.Нами, например, установлена особенность воздействия на фотоматериал ЛА грибов, характеризующихся дерматонекротическим действием. В частности, показано, что после контакта эмульсии фотобумаги (а также фотопластин) с ЛА, продуцируемыми ОепдгодосЫцв тохсов, ЯтасЬуЬотгуз а 1 тегпапз, Еозагов зроготг 1 сЫе 11 а, Р,дгавпеагогп, изображение геометрических фигур отмечалось через 5 - 60 мин, Интенсивность и четкость отпечатков зависела в первую очередь от видовой принадлежности и возраста грибаподуцента ЛА (при прочих равных условиях эксперимента),В качестве биологических индикаторов (а также контроля) на продукцию ЛА служили отобранные в процессе работы чувствительные к летучим антибиотикам тест-культуры гифомицетов (Азрегд 11 оз Йачцз А,п 19 ег. РепСИИцв сус 1 орцв) и некоторые бактериальные тесты (Загспа Лача, Е,соИ, Вас,зоЬтИ 1 з),По нашим данным, во время осеннезимнего (ноябрь-февраль) хранения кормов особо опасные токсинообразующие виды грибов Орохсов, Р,вагсепзИ и Я.атегпапз при формировании на сене, соломе, зернофураже типичных для них грибниц с органами спороношения, проявляли в этот период наиболее высокую степень дерматонекротического влияния на кожу кролика, которая коррелировала в свою очередь с высоким выходом ЛА, о чем свидетельствовали отчетливо выраженные отпечатки на фотобумаге, появление которых регистрировали через 5-10 мин после начала контакта фотоэмульсии с токсинообразующими грибами, а также ЯтасбуЬотгуз а 1 тегпапз 1012Я, айегпапз 902 ОепдгодосЫов юхсов 93О. тохсов 1914 уровень антигрибной и антибактериальнойактивности летучих фунгистатиков.Фотоэффект и антимикробная активность летучих антибиотиков грибов даны в5 таблице,Напротив, весной и летом (апрель-август) указанные в таблице грибы образуютна грубых кормах аспорогенные, с хорошоразвитым воздушным мицелием атоксиче 10 ские колонии, которые, как правило, характеризовались минимальной интенсивностьювыделения ЛА (экспозиция воздействия ЛАна фотоэкран 30 - 60 мин). При этом наблюдалась смена видового состава микофлоры кор 15 мовых субстратов: Я,а 1 тегпапз. и Олохсцвуступали место развитию грибов родовАзрегд 111 цз и Реп 1 с 1 И 1 ов, активно продуцирующих ЛА (экспозиция воздействия ЛА нафотоэмульсию 5 - 10 мин).20 Исходя из полученных данных, мы условно разделили токсинобразующие грибыпо фотоэффекту (учитывая экспозицию воздействия ЛА на фотоэмульсию) на три группы,Если фотоэффект отмечался через 5-1025 мин - гриб характеризуется остротоксическим, через 10 - 30 мин - среднетоксическим, через 30-60 мин - слаботоксическим,Разработанный нами способ выявленияЛА грибов с помощью фотоэмульсионных30 экранов может быть использован для определения наличия ЛА и установления продолжительности воздействия их на кормовойсубстрат и его микобиоту.Практическая значимость подобных35 разработок состоит в том, что они имеютзначительные преимущества перед органолептическим (часто субъективным) анализом, с помощью которого не всегда удаетсяустановить качество кормов.40, Формула изобретенияСпособ выявления летучих антибиотиков у грибов, основанный на применениифотоэмульсионных экранов, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения45 эффективности способа, фотоэмульсионныеэкраны помещают над измельченным грибным мицелием на расстоянии 2 - 10 см при18 - 20 С в течение 5 - 60 мин.1835429 Продолжение таблицы Составитель С. ХарченкоТехред М.Моргентал Корректор Л, Пилипенко ъ Редактор Т, Куркова Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 2977 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5