Способ получения сухих вирусных препаратов

(53)5 С 12 й 7/00 ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(71) Всесоюзный научно-исследовательскийинститут молекулярной биологии Научнопроизводственного объединения "Вектор"(56) Долинова К,Е. Основы технологии сухихбиопрепаратов, М.: Медицина, 1969,с, 202.Тутова З.ГКуц П.С, Сушка продуктовмикробиологического производства. М,. Агропромиздат, 1987, с, 192, 261,Изобретение относится к технологииполучения и хранения сухих вирусных препаратов и может быть использовано в медицинской и микробиологической промышленности,Целью изобретения является упрощение технологии получения препарата с сохранением его биоактивности придлительном хранении при положительныхтемпературах,Это достигается следующей совокупностью существенных признаков, Способвключает расфасовку в емкости жидкоговирусного материала с компонентами защитной среды, лиофилизацию материала встерильных условиях до получения препарата в виде таблеток. Кроме того, в емкостивводят порции обезвоженного сорбейта ввиде слоев, нанесенных на открытые поверхности таблеток сухого вирусного материала с последующей герметизацией этихемкостей для хранения при положительных Й 2, 1818344 А 1 2(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУХИХ ВИРУСНЫХ ПРЕПАРАТОВ(57) Использование: медицинская и микро. биологическая промышленность, Сущность изобретения: жидкий вирусный материал фасуют в емкости с последующей его лиофи.лизацией в камере в присутствии сорбента до получения препарата в виде таблеток. На таблетки сухого материала наносят слой обезвоженного сорбента с последующей герметизацией емкостей, В качестве сорбента используют зерна ионита КБП 2 в Иа-форме с сорбционной емкостью, превышающей количество остаточной влаги в препарате. 1 з,п. ф-лы, 2 табл. температурах, В качестве сорбента используют зерна ионита КБП 2 в )ча-форме с сорбционной емкостью, превышающей количество остаточной влаги в препарате Способ реализован следующим образом,В суспензии, например вируса Венесуэльского энцефаломиелита лошадей (штамм ТС), растворяют при перемешивании Ф стабилизирующйе добавки (глюкозу, саха- ф розу, аминоуксусную кислоту, сыворотку крупного рогатого скота). Жидкий материал фасуют по 0,5 мл в пенициллиновые флако- ф ны, которые устанавливают на полках сублиматора ) 6 А,5 (ГДР) и проводят лиофилизацию по стандартному режиму.Остаточная влажность лиофилизированн ых таблеток вирусного материала, определенная стандартным методом выдерживания образцов пои 105 С до постоянного веса, составляет 4,01,5; Определение биоактивности (биотитра) образцов проводят постандартной методике на монослое культуры фибропластов куриных эмбрионов (ФЭ К). Биотитр образцов выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ) на 1 мл вируссодержащей суспензии. Все операции по получению лиофилизированного материала и определению его характеристик широко используются в вирусологической практике, Флаконы с лиофилизированным материалом делят на две части - контрольную и экспериментальную партии, Во флаконы экспериментальной партии (перед 5 10 герметизацией) в стерильных условиях вводят порции обезвоженного сорбента в виде слоев, нанесенных на открытые поверхно сти таблеток сухого вирусного материала. Сорбционная емкость сорбента превышает количество остаточной влаги в препарате. В качестве сорбентов могут быть использованы цеолиты или ионнообменные смолы, на пример йа форма катионита КБП 2, имеющего влагоемкость 110 г воды на 100 г сорбента и насыпную плотность 1,0 г/см . Катионит КБП 2 удобен для реализации способа, поскольку состоит из частиц сфе рической формы размером менее 0,1 см, имеющих значительную механическую прочность и большую сорбционную емкость, Для покрытия одной таблетки препарата в пенициллиновом флаконе катионитом КБ 4 П 2 в йа форме достаточно 0,5 г этого сор- бента, Далее емкости с контрольными и экспериментальными образцами герметично закупоривают и испытывают на сохранение биоактивности вируса ВЭЛ при 35 температурах 20 С и 37 С в одинаковых условиях в течение длительного времени, В процессе хранения проводят анализ экспериментальных и контрольных образцов материала на биоактивность методом бляш кообразующих единиц (БОЕ), Причем перед растворением таблеток во флаконах экспериментальных партий (при определении биотитра) сорбент из флаконов удаляется.В табл.1 и 2 приведены эксперимен таяьные данные по сохранению биоактивности вируса ВЭЛ в контрольных и экспериментальных партиях лиофилиэированного материала при температурах хранения 37 С и 20 С. 50 Как видно из табл.1, биоактивность образцов экспериментальной партии после 1,5 месяцев хранения при 37 С составляет 5,79 БОЕ/мл при отсутствии даже остаточной биоактивности в контроле (опыт 6). Хранение экспериментальных образцов при 20 С ведет к снижению биоактивности на 0,6 1 д БОЕ/мл (т.е. в 3 раза) при снижении ее в контроле к 85 суткам на 3 ц БОЕ /мл (т.е, в 1000 раз) (и ример 10),Технико-экономическая эффективность предлагаемого способа состоит в упрощении технологии получения новых вирусных препаратов при оптимизации их компонентных составов и подборе режимов сушки. В результате реализации данного способа отпадает необходимость в дорогостоящем оборудовании в постоянном контроле за остаточной влажностью экспериментальных биопрепаратов, а также введения инертного газа в емкости или их вакуумирования перед герметизацией для увеличения срока хранения препарата, вследствие чего обеспечивается возможность получения и хранения новых препаратов в любых экспериментальных лабораториях,Формула изобретения 1, Способ получения сухих вирусных препаратов, включающий расфасовку в емкости жидкого вирусного материала с компонентами защитной среды, лиофилизацию материала в камере до получения препарата в виде таблеток и герметизацию емкостей для последующего хранения препарата; о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения технологии получения препарата с сохранением его биоактивности при длительном хра-. нении при положительных температурах, в емкости перед их герметизацией вводят сорбент воды в виде слоя, покрывающего поверхности таблеток лиофилизированного вирусного препарата, с сорбционной емкостью этого слоя, превышающей количество остаточной влаги в препарате,2, Способ по п 1, отл и ч а ю щи й с я тем, что в качестве сорбента воды используют зерна ионита КБП 2 в йа-форме, а соотношение исходного материала и ионита составляет не менее 1 мл:1 г при насыпной плотности ионита 1 г/см,1818344 Таблица 1Данные по сохранению биоактивности вируса ВЭЛ при температуре хранения 37 С Таблица 2Данные по сохранению биоактивности вируса ВЭЛ при температуре хранения 20 С Составитель В. Зелен Редактор О. Павлова Техред М.Моргентал Корректор П. Гереш Производственно-издательский комбинат "Патент л,Гагарина, 10 Заказ 1926 Тираж В НИ И ПИ Государствен ного комитета по и зоб 113035, Москва, Ж, РауПодписноетениям и открытиям при ГКНТ СССР кая наб., 4/5