Способ определения обсемененности желчи энтеробактериями

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 20 АЗ ц 5 60 ТЕНИ ПИСАНПАТЕНТУ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТВЕДОМСТВО СССР(71) Астраханский государственный медицинский институт им. А.В.Луначарского(56) Методические рекомендации по применению унифицированных микробиологических методов исследования вклинико-диагностических лабораториях -М., 1985, с, 125.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБСЕМЕНЕННОСТИ ЖЕЛЧИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЯМИ Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологической диагностике заболеваний человека, и может быть использовано для экспресс-идентификации энтеробактерий в желчи,Целью предлагаемого изобретения является повышение чувствительности способа, сокращение времени анализа и его упрощения,Поставленная цель достигается в изобретении тем, что перед исследованием желчь центрифуги руют и методом двойной иммунодиффузии выявляют наличие растворимых антигенов А саИ 9 е паз 1 есаИз и при их обнаружении определяют обсемененность желчи энтеробактериями.Желчный пузырь и желчные протоки при воспалительных заболеваниях билиарного тракта часто поражаются микроорганизмами, при этом в подавляющем большинстве случаев высевают различные(57) Изобретение относится к медицине, а именно к определению обсемененности желчи энтеробактериями. Цель изобретения - повышение чувствительности способа, сокращение времени анализа и его упрощении, Желчь получают с помощью дуоденального зондирования, центрифугируют ее, в иммунодиффуэии и использованием культуры алкалигенес Фекалис выявляют общие с ним растворимые антигены и при их обнаружении определяют обсемененность желчи энтеробактериями. По сравнению с прототипом увеличивается чувствительность способа, сокращается время анализа. 2 ил,энтеробактерии. Они представляют собой родственные микроорганизмы и имеют в своем составе общие антигены, по наличию которых возможна сероидентификацич бактерий данного семейства. Е.МонцевичютеЭрингене (Метод ускоренной оценки иммунного статуса человека, - Вильнюс, 1986) для определения в сыворотке крови антител разработала тест-систему общего антигена энтеробактерий, в качестве которой используется водно-солевой экстракт льтуры АсаН 9 епез 1 есаНа и кроличья антисыворотка к нему, полученная на 6-е сутки после однократной внутривенной иммунизации.Способ определения пбсемененности желчи энтеробактериями осуществляется следующим образом, Желчь получают с помощью дуоденального зондирования отдельно по порциям или во время операции на желчном пузыре, Полученные пробы цен 1816320трифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин и с надосадком центрифугата ставят реакцию двойной иммунодиффузии в геле общепринятым методом по прилагаемой схеме (фиг.1),Схема постановки реакции двойной иммунодиффузии в геле для выявления в желчи общего антигена энтеробактерийА- антисыворотка к водносолевомузкстракту культуры алкалигенес фекалис1 - буфер2 - водно-солевой экстракт культуры алкалигенес фекалис3 - исследуемая желчьТаким образом, лунки 1 являются отрицательным контролем, а 2- положительным контролем, где всегда должна Формироваться линия преципитации.Стекла инкубируют в течение 24 ч при 37 С и учитывают результаты. При положительном результате как и в положительном контроле между центральной лункой и лункой 3, где находится исследуемый материал, формируется идентичная линия преципитации. При отсутствии в исследуемом образце желчи общего антигена энтеробактерий линия преципитации не формируется, что свидетельствует об отсутствии в материале энтеробактерий (фиг.2).Результаты выявления общего антигена знтеробактерий в желчи с помощью реакции двойной иммунодиффузии в геле на фиг.2.Предлагаемый споеоб был успешно апробирован на кафедрах микробиологии, детских болезней с детскими инфекциями лечебного факультета, терапии 1, терапии 3 и общей хирургии Астраханского государственного медицинского института им. А.В.Луначарского на материале, полученном от 38 больных с заболеваниями билиарной системы в течение мая - августа 1988 года. Ниже приводятся результаты апробации,йП р и м е р 1. Задачей эксперимента являлось выяснение возможности выявлений в реакции двойной иммунодиффузии в геле с помощью кроличьей антисыворотки к водно-солевому экстракту Асацепез 1 есаз общего антигена у различных видов энтеробактерий, Были получены водно-соловые экстракты 24-часовых культур кишечной палочки, сальмонелл тифа, сальмонелл тифимуриум; шигелл флекснера и Зонне путем их дезинтеграции 7-ми кратным замораживанием с последующим оттаиванием и гомогенизацией со стеклянным порошком. Реакцию двойной иммунодиффузии ставили по предложенной схеме. но вместо исследуемого образца желчи в лунку 3 вносили экстракты энтеробактерий. Во всех случаях в опыте формировалась линия преципитации аналогичная таковой в положительном контроле. Таким образом, показана возможность выявления общего антигена в составе энтеробактерий (эшерихий, сальмонелл, шигелл) с помощью антисыворотки предлокеннай тест-системы,10 П р и м е р 2, Предпринята попыткаобнаружения общего антигена энтеробактерий в желчи после культивирования в ней культуры кишечной палочки. В желчь, в которой не обнаруживался с помощью предло Б женного способа общий антигенэнтеробактерий, вносили 1 миллиард микробнь 1 х клеток кишечной палочки штамма 0 И на 1 мл. Пробы инкубировали при 37 С в течение 24 ч, затем центрифугировали при 20 3000 об/мин в течение 30 минут и проводили тестирование в них общего антигена энтеробактерий в реакции двойной иммунодиффузии в геле по предложенной схеме, Исследуемые образцы давали поло жительный результат на наличие искомогоантигена. Таким образом, оказалось возможным выявление общего антигена энтеробактерий при наличии в желчи микроорганизмов данного семейства.30 П р и м е р 3. Проводили выявлениеобщего антигена энтеробактерий в желчи от трех больных с калькулезным холециститом, которую получали во время операции холецистоэктомии. Во всех исследуемых образ цах с помощью предлагаемого способа былобнаружен искомый антиген, Параллельное проведение бактериологического исследования с последующим осуществлением сероидентификации с помощью реакции 40 агглютинации показало, что у одного больного из желчи выделена культура сальмонелл тифа и у одного - кишечная палочка. То есть, общий антиген энтеробактерий определялся у 100 больных, а бактериологиче ские бактерии данного семействавыделялись у 66, 70 обследованнь 1 х лиц,П р и м е р.4. Было проведено выявлениеобщего антигена энтеробактерий в желчи 23больных детей в возрасте от 9 до 14 лет с Б 0 дискинезиями желчевыводящих путей, Материал для проведения исследований получали с помощью дуоденального зондирования отдельно по порциям А,В,С.Параллельно проводилось бактериологиче ское исследование желчи, с помощью которого выделено: в порции А у 4 больных (17,40) кишечная палочка и у 2 (8,70/,) стафилококки, в порции В у 7 человек (30,4 о ) кишечная палочка, в порции С у 2 (8,7 ) кишечная палочка, Общий антиген знтеро 1816320бактерий с помощью предлагаемого способа определялся в порции А у 4 больных (17,4 О), В - 20 (87 О), С - 14 (61 ),Полученные результаты свидетельствуют о том, что общий антиген энтеробактерий в реакции двойной иммунодиффузии выявляется в желчи значительно чаще, чем обнаруживаются энтеробактерии в данном исследуемом материале с помощью общепринятого бактериологического способа. При этом., результаты второго способа могут значительно зависеть от контаминации получаемой желчи микрофлорой во время ее забора. Возможно, такое происхождение имеют стафилококки, обнаруженные в порции А.П р и м е р 5. Провели определение наличия общего антигена энтеробактерий с помощью предлагаемого способа в порциях А, В и С желчи, полученных путем дуоденального зондирования у взрослых больных с холециститами. Положительные результаты имели место в порции А у 2 из 12 обследованных лиц (16,7), в порции В - 10 (83,3) и порции С(33,3,) больных, При этом, исследования проводились непосредственно в клинике и результаты анализов были получены уже через 24 часа после забора материала. Все это свидетельствует о том, что выявление в желчи общего антигена энтеробактерий с помощью предлагаемого способа значительно повышает чувстви тельность, при этом результаты не зависятот возможной контаминации исследуемого материала микробными клетками во время его получения, так как они перед проведекием анализа удаляются центрифугирова нием, существенно упрощаетсятестирование антигена и значительно сокращается время проведения исследования,15 Формула изобретенияСпособ определения обсемененностижелчи энтеробактериями, включающий забор желчи с последующим ее исследованием, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью 20 повышения чувствительности способа, сокращения времени анализа и его упрощения, перед исследованием желчь центрифугируют и методом двойной иммунодиффузии выявляют наличие раствори мых антигенов, сходных с антигенамиАса 1 депез 1 есаИз, и при их обнаружении определяют обсемененность желчи энтеробактериями.