Способ очистки аллергена

СОЮЗ СО 8 ЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 71749 А 51)5 А 61 КЗ ОСУДАРСТВЕЙНЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(57) Использование; изобретение относитсяк медицине и может быть использовано впроизеодстве пыльцевых аллергенов для Изобретение относится к медицине и может быть использовано в производстве пыльцевых аллергенов для диагностики и лечения поллинозов.Известен способ получения пыльцевых аллергенов, включающий механическую очистку пыльцы от примесей, обезжиривание в эфире с последующим экстрагированием. центрифугированием и стерилизующей фильтрацией.Чистота препарата, получаемого при использовании этого способа, зависит от степени удаления примесей из пыльцы и ее обезжиривания.Однако данный способ не обеспечивает очистку целевого продукта от пигментов (цветность 0,75 - 1,3 ед. экстинции). Это приводит к появлению ложноположительных реакций и снижает специфичность иммунотерапевтического действия.Цель изобретения - повышение степени очистки целевого продукта от пигментов. 2диагностики и лечения поллинозов и касается способа очистки аллергена; Целью изобретения является повышение степени очистки целевого продукта от пигментов. Сущность изобретения заключается в отделении примесей от пыльцы, ее обезжиривании эфиром, отмывании водой, центрифугировании и стерилизующей фильтрации надосадочной жидкости, Положительный эффект заключается в практически полном исчезновении цветности целевого продукта. 3 табл. Указанная цель достигается тем, что в предлагаемом способе пыльцевые зерна после обеэжириваиИя отмывают водой,Существенным отличием предлагаемого способа получения от известного является то, что предлагаемое изобретение почти полностью исключает цветность в готовом препарате (0,02-0.05 ед. экст.) за счет отмывки пыльцевых зерен после обезжиривания водой до визуального отсутствия в ней пигментов,П р и м е р, 10 г пыльцы (например, амброзии) очищенной от механических примесей, помещают в емкость, обезжиривают этиловым эфиром; высушивают при комнатной температуре, затем заливают дистиллированной водой в соотношении г/мл 1:100 и отмывают пыльцу до визуального отсутствия пигментов в промывной жидкости, Затем пыльцу вновь высушивают и из расчета на 3 г пыльцы добавляют 100 мл раствора Эванса-Кокка, и экстрагируют в течение 72 часов на магнитной мешалке при 4-60 С,известном и е лагаемом Белковый азот мг/мл Цветность ед, экст, 0,1от светло-желтого до коричневого стерилец специфичен не токсичец0,10,02 - 0,05 СтерильностьСпецифичностьТоксичность стерилен специфичен це токсиченстерилец специфичен не токсичен Полученную взвесь цецтрифугируютпри 5000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость фильтруот через бумажный фильтр, а затем черезстерилизующие мембраны, стандартизируют до 0 100 .ф.0,020 мг/мл азата белка поКьельдалю, разливают во флаконы и укупаривают,Контроль полученного аллергена осуществляют ца стерильность, токсичность, 10специфичность и цветцость",Токсичность препарату проверяют вопытах на белых Мышах и свинках. Стерильность определяют посевом на питательнуюсреду, Специфическую активность аллергеца проверяют в кожных тестах на больныхсенсибилизировацных пыльцой поллицозов. Цветность определяют визуально..При этом получаат прозрачный, бесцветный препарат (цветность - 0,03 ед. экстинции), содержащий 0,1 мг/мл азота белкапо Кьел ьдэл ю.Сравнительная характеристика препаратов,полученнь 1 х по известному и предлагаемомуспособам,представлена втабл,1-3. 25(Средние данные 10 серий).Из табл.1 видно, что предложенныйспособ получения пыльцевых аллергеновпозволяет почти полностью удалить пигменты, Об этом свидетельствует, низкая степень цветцости (0,02 - 0,05 ед. экстицции) уочищецць 1 х аллергенов по сравнециа сцветностыо (0,75 - 1,3 ед, экстинции) у неочищенных. 8 то же время очистка препаратане изменяет показателей специфичности, 35токсичности, стерильности, содержаниябелкового азота, которые. соответствуют.требованиям фармакопеи., Как видно из табл.2, при кожном тестировании. (прик-тест) аллергенами, полученными по известному и предлагаемому способам, активность реакций це отличается.Как видно.из табл,З, уровень содержания антител у животных, иммунизированных аллергеном, приготовленным по предлагаемому способу ца уровне, а в некоторых случаях и выше, чем кроликов иммунизированных коммерческим аллергецам,. Предлагаемый способ, по сравнению с известным, Обеспечивает следующие преимущества:дает возможность получить стандартный препарат очищенный от пигментов цветцость 0,02-0,05 ед, экстинций, что в конечном итоге повышает эффективность диагностики: достоверность анализа, умецьшается показатель ложных реакций и лечение поллинозов; более специфическая стимуляция иммунной системы).В настоящее время в НПО "Аллерген" царабатываются серил аллергена для оформления изменения к регламенту производ.ства на ныльцевые аллергецы. Формула изобретения Способ очистки аллергена, включаю-. щий механическое отделение примесей от пыльцы, ее обезжиривание эфиром, центрифугирование, стерилизующую Фильтрацию надосадочцой жидкости, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения степени очистки целевого продукта от пигментов, пыльцу после обезжиривация отмывают водой. Аллерген амброзийный) подученный по способ:1771749 Таблица 2Сравнительная характеристика кожных реакций аллергенов Рез льтаты кожных еак ий алле генов амб оэийных и иготовленных по способам: известном и е лагаемом средний диаметр волы я,ммсредний диаметр волы я,ммактивность (в крестах) активность (в крестах) Таблица 3 Сравнительная характеристика иммуногенности аллергенов, выявленной в РНГА по титру антител у иммунизированных животных (кроликов)ь Б.РайкисМоргентал Карре Состави ехред М Реда кто.Филь Подписноео изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС35, Раушская наб., 4(5 аз 3794ВНИИПИ Го Тиражтвенного комите 113035, Москва изводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 7,5 7,5 8,5 6,0 7,0 10,0 7,0 7,0 9,0 4,58,0 7,0 8,0 6,5 7,0 12,0 12,0 7,5 9,0 5,0