Способ определения кожно-резорбтивного действия химических веществ

)5 6 01 й 33/48 ФВУ Еааа ажен ности ле токсиче тв при аппааа ожу еде аэы ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ К АВТОРСКОМУ СВИ(71) Харьковский медицинский институт(72) В.И.Жуков, В,М, Кривоносов, Л.А.Бондаренко, В.И.Мацкивский и О.В,Зайцева (56) Лазарев Н.В, и др. К методике сравнительного изучения проникновения органических веществ через кожу; - : Русский физиол. журн 1931, т, 14, кл, 2, с. 284-289. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЖНО-РЕЗОРБТИВНОГО ДЕЙСТВИЯ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ. (57) Изобретение относится к токсикологии.и может быть использовано для определения резорбтивного действия химических ве-ществ. Цель - повышение чувствительности пособа, Сущность заключается в том, что ,2 мл сыворотки крови или мочи лабораторых животных, которым предварительно наИзобретение относится к медицине, в частности к токсикологии, и может быть использовано для определения кожно-резорбтивного действия химических веществ.Кожно-резорбтивное действие можно оценить не только по гибели животных, но и по изменению суммационно-порогового показателя и весу животных,При изучении всасывания через кожу различных амико- и натросоединений бензольного ряда можно регистрировал на кимографе дыхание и рефлекторное отдергивание конечности в ответ на раздражение индукционным током, Учет времени появления изменений дыхания и двигательных"рЕ" носились на кожу растворы изучаемых веществ, вносят в кювету и помещают торцом над ФЭУв светонепроницаемуюкамеру медицинского хемиламинометра, термостатируют при 37 С. Затем включают установку, измеряют спонтанное свечение в течение 1-2 мин и добавляют.к сыворотке крови 0,5;-ный раствор перекиси водорода. Вспышку сверхслабого свечения регистрируют автоматическим потенциометром в течение 3-5 мин. По интенсивности вспышки и изменению формы кривой свечения сыворотки крови и мочи опытных и контрольных животных определяют эффективность проникания, степень и характер токсического действия химического вещества. Предлагаемый способ является высокочувствительным и по интенсивности свечения дает возможность определить степень проникания и характер токсического действия химических веществ,акций, а также степень их вырпозволяют сделать выводы о сиского действия различйых вещесликации их на кожу;Однако данный метод не является высокочувствительным, обнаруженные измнения проявляются при поступленииорганизм большого количества веществчто сказывается на точности определенипороговых и подпороговых доз,При изучении всасывания через кряда фосфорорганических веществ опрляют угнетение активности холинэстерв крови и других тканях,1755199 последствия их влияния; отсутствует точность в определении порога кожно-резорбтивного действия.О кожно-резорбтивном действии судят и по обнаружению веществ или продуктов их распада в вцдыхаемом воздухе.Существенные изменения или задержка веществ в организме делают этот метод мало пригодным для изучения кожно-резорбтивного действия,5 10 Наиболее близок к предлагаемому метод определения кожно-резорбтивного действия по количеству веществ или продуктов их распада, обнаруживаемых в биологической жидкости. Метод дает возможность оп 15 ределить вещество или продукты его распада в крови и является достаточно точным и эффективным.Основнйм недостатком известного ме 20 тода является его низкая чувствительность Метод не учитывает скорость выведения химических веществ из организма, их кумуляцию в отдельных органах и тканях, а также превращение этих веществ,Цель изобретения - повышение чувствительности определения эффекта проникания токсических веществ через кожу. В этих условиях определяется степень и характер токсического действия, состояние свободнорадиального перекисного окисления липидов, биомембран, антиоксидантной системы, процессов биоэнергетики, адаптации и дезадаптации, пороговые и подпороговые дозы,Поставленная цель достигается тем, что согласно известному способу определения эффекта проникания химических соединений через кожу, степень и характер токсического действия устанавливают путем определения максимума интенсивности сверхслабого свечения сыворотки крови и мочи, обработанныхперекисью водорода 0,5-ный раствор), опытных и контрольных животных. По изменению интенсивности свечения крови опытных животных судят об эффекте проникания веществ через кожу. П р и м е р 1, Изучен эффект проникания через кожу группы веществ органического синтеза (простые полиэфиры марок Л,503, 1502, 2502, 703); полиэтиленоксида Мм 400; полиоксипропилентриола М.м. 500; полиоксиэтиленоксипропилендиола М,м, 1500 и 2500; триглицидилового эфира полиоксип 55 ропилентриола М.м, 700 на 150 морских свинках методом регистрации сверхслабого свечения сыворотки крови после нанесения Определение активности холинэстеразы не является интегральнцм тестом, он специфичен при воздействии фосфорорганических соединений, и это ограничивает его применение при изучении кожно-резорбтивного действия других веществ.О кожно-резорбтивном действии вещества можно судить по нарастанию титра антител, реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) в модификации Л.А,Дуевой и Р.В,Беру, реакции Уанье с лизатом цельной крови(ЛЦК) в модификации Н.В,Русакова, методу Ерне в модификации Н,Н.Клемпарской иН.В.Русакова,Несмотря на то, что указанные тесты позволяют определять проникновение микроколичества веществ в организм, они имеют и существенные недостатки: длительность проведения эксперимента составляет не. менее 3 недель (период наступления сенсибилизации и образование достаточного количества антител); трудоемкость и значительные материальные затраты, Метод можно использовать только в том случае, если вещества, проникая через кожу, способны вызывать сенсибилизацию организма, что исключает его универсальность и ограничивает использование,Известен метод определения кожно-резорбтивного эффектахимическихсоединений с помощью изучения газообмена через кожу,Недостатком этого метода является то, что мелкие лабораторные животные не пригодны для этого эксперимента. Метод требует наличия камеры, которая предусматривает помещение в нее всего животного, кромеголовы, Определять кожно-резорбтивное действие можно только тех веществ, которые обладают большой летучестью, Чувствительность данного метода зависит от степени резорбции веществ через кожу.Известен также способ определения кожно-резорбтивного действия по клинической картине, вызываемой исследуемым веществом: смертельный исход, время .появления и степень выраженности призна: ков интоксикации, изменение процента прироста массытела, коэффициейтов массы 5 внутренйих органов, физиологических, биохимических, морфологических тестов и др.К недостаткам такого способа относятся трудремкость, большие материальные затраты и длительйость постановкй"эксперимента; токсический эффект часто проявляетсятолько при поступлейии больших количеств вещества через кожу, хотя известно, что микроколичества способны вызывать аллергизацию организма и отдаленные 25 30 35 40 45 накожных аппликаций, Использовали 20 О- ные растворы веществ, На протяжении эксперимента регистрировали как развитие1755199 Составитель И.МелемукаТехред М.Моргентал . КорРектор Н.Тупица Редактор А,Огар Заказ 2890 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж; Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 местного, так и признаки общерезорбтив- сутки опыта, тогда как с помощью других ного эффектов, тестов эффект проникания удалось устаноОпытные животные по внешнему виду и вить только на 30-е сутки,поведению не отличались от контрольной Опыт подтверждает высокую чувствигруппы. На 10-е и 20-е сутки исследовали 5 тельность предлагаемого способа при изусодержание гемоглобина, эритроцитов, Н- чении кожно-резорбтивного действия групп, активность каталаэы, пероксидазй, химическихвеществ.Поинтенсивностисвецерулоплазмина, холинэстеразы; щелочной чения можно судить о степени проникания фосфатазы, аланиновой и аспарагиновой и характере токсического действия вещесттрансаминаэ в крови (наиболее чувстви ва.тельные тесты при воздействии простых полиэфиров). Изменения поэтимтестам были ф о р мул а изобретения обнаружены только на 30-е сутки опыта всравнении с контролем.: ., ". Способ определения кожно-резорбтивВ ходе опыта исследовали интенсив ного действия химических веществ на органость сверхслабого свечениясыворотки. - низм животного путем нанесения крови опытных животных, которая была по- исследуемых веществ на кожус последуювышена по сравнению с контролем уже на щим исследованием биологической жидко-е, 20-е. 30-е сутки опыта (555 +10 опыт, сти, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью 490+ 20 контроль - 10-е сутки; 989+16 кон повышения чувствительности способа. сытроль - . 20-е сутки; 1720 +55 опыт, 485 +23 воротку крови и мочу животного обрабатыконтроль - 30-е сутки). Отмечено увеличе- вают 0,5-ным раствором перекиси ьие интенсивности сверхслабого свечения водорода, измеряют интенсивность сверх- сыворотки крави в зависимости о 1 дозы и . слабого свечения сыворотки крови и мочи времени эффекта, Кожно-резорбтивное 25 до и после обработки и по изменению индействие простых полиэфиров с помощьютенсивности сверхслабого свечения опреспособа регистрации интенсивности сверх- . деляют кожно-резорбтивное действие слабого свечения было обнаружено на 1 О-е химических веществ.