Способ определения активности амилазы надмембранного слоя энтероцитов экспериментального животного
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 1753422
Автор: Королев
Текст
ф СО)03 СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУГ;ЛИК Эм С 01 И 33/6 РЕТЕНИЯК АВТОРСКОУУпвоитяп .лаю вл а являа био- ых на т,е, ве пронтам иссле ше рмен- ного ОЩИИ орга ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЭОЬРЕТЕН)ЛЯМ И ОТКРЫТИЯМпри Гкнт ссср ОБЖИГАНИЕ К(71) Гродненский государственный медицинский институт(56) Уголев Н, М, и др, Распределение адсорбированных и собственных кишечных ферментов между клетками слизистой тонкОЙкишки и отделенным от них аникальным гликокаликсам. ДАН, 1978, т. 241, )ч. 2, с, 491494.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АМИЛАЗЫ НАДМЕМБРАННОГОСЛОЯ ЭНТЕРОЦИТОВ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГОО Я(ИВОТНОГО(57) Изобретение относится к области зкспериментальной гастрознтерологии, Цельюизобретения является приближение к физиИзобретение относится к экспериментальной гастрознтеролопли и может использоваться для прижизненного определения активности ферментов,адсорбированных в надмембранном слое знтероцитов (Н СЭ) лаббратарных животных,Известен способ изучения мембранного пищеварения, предусматривающий определение ферментативной активности НСЭ. Способ вкл)очается биопсию слизистой оболочки тонкой кишки,ТК), помещение биаптата в охлажденный раствор Рингера при рН среды 7,0-7,4, десорбци)о адсорбированных на поверхности слизистой оболочки ТК ферментов (а-амилазы) с получением фрак- . ции О 1, О 2 и Оз фермента (соответственно легко, трудно десорбируемая амилаза), центрифугирование полученных фракций, йнкуалогическим условиям. Способ включает введение в просвет сегмента тонкой кишки подогретого 3;-ного раствора агар-агара, извлечение агаровой реплики после ее застывания, взвешивание, гомогенизацию, инкубацию образцов с субстратОм и фото- метрическае определение ферментативной активности по степени гидролиза субстрата, Исследуемь)й сегмент тапкой кишки заполняют раствором агар-а гара с предварительно добавленным в него дозированным количеством субстрата, после чего сегмент оставляют в бр)ошной полости на время инкубации субстрата с ферментами надмембранного слоя знтероцитов, а определение ферментативной активности последнега осуществляют без дополнительного процесса инкубации вне организма, 1 табл,субстратом (0,100-ный растечение 30 мин при темпеи фотометрическае ивности фермента по убыбацию фракции створ крахмала) вратуре 38 СОпределение актли субстрата.Недостатками известного способются необходимость 3-кратного смывптата для десорбции адсорбированнповерхности слизистой оболочки ТКНСЭ, ферментов, а также праведеницесса инкубации субстрата с фермевне организма, что снижает точностьдования,Наиболее близким техническимнием является способ определения фетатив ной активности апикалгликокаликса знтероцитов, включавведение в просвет изолированного о20 25 А Гивцость амилазь) оце )ивалась в мг гидро 45 Г)изо)за)Ного крахмала на 1 кг агдровой реГ 0 низма сегмента ТК подогретого раствораЗгзр-агара в Биде золя, извлечение дгдровойреплики после ее здстывация, взвешивание,гомогециздцию, инкубацию гомогената ссубстратом и фотометрическос опредепе 5ние фермецтзти)зной активцости по убылисубстрата.Недостатком известного способа явля 8 ТСЯ ТО, ЧТО ОНО ПРОВОДИТСЯ На ИЗОЛИРО)ЭД)1 цом от организма сегмента ТК, Вследствиечего процесс инкубдции субстрата с ферме 53 тами )э)СЭ осув)ествляется вне оргацлз.ма, что снижает до определенной степенирезультаты исследования,Цель изобретения - пр)лбликение к фиЗИОЛОГИЧВСК)ЛМ УСЛОВИЯМ.Способ осуществпяОт следующим образом,Животное после предварительного голОДания нз протяжег)1)и 14-1 б и аркот)лз 1 руют известным способом, фиксируютбрюшком кверху, Производят средиццу)олапаротомио. В операционную рану вь)водят сегмент ТК, На концах сегмента нздсекз)0 стонку ТК и )Р 4 эез Обрззовавшиес 51отде, стия осуществляют промывание полости сегмента охлажденным изотони)ескмраствором хлорида ндтри 51 (И) ХН). Дистдльный конец с 8 Гмонтз к)1 шки здкОывдОт лиГатурой., которую проводят через 3. бессосудистую зону брыжейки, Через тверстие в проксимдпьном отделе сег)лент спОмОщью шгрицд здполця 10 т пОДОГэет 1 э 1 глДо 42 С-ны)л расгвоэом дпа)0-згара спредварительно добавленным Б него дозированным количеством субстрата, после чеГо СВГМЕНТ ЗЗТЯГИБЗ)0ДРУГОЙ Л)ЛГДТУЭОЙ,также проведенной через бессосудистуозону брыжейки, Заполнен).)ьл сегглент ТКпогружают )э бровэну)о полость ца Бремя 4лнкубации субстрата с ферментами НСЗ,Края Опе")ационнол рзиы сближз)от заклмами и Обкладывд)от салфетками, смоченными в теплом )ЛРХН, По истечениинеобходимого времени инкубации Злсследуемый сеГмент извлека 10 т Б Опе)эдцио)3 цу 30рану, разрезают ВдОль, извлека 10 т аГдрову)Ореплику, Бзвешива)от и гомогенизиру от еев охлажденном )ЛРХ)-1, в который с цельюпрекращения гидр, лиза субстрата добавляют 10%-иый раствор трихлоруксусной кислоты. Гомогенат реплики центрифугируютпри 5000 об/ми)-1 на протяжении 10 мин, Внадосадочной жидкости фотометрическиопределяют ферментативную активность по 5степени гидролиза субстрата.Г р и м 8 р, 33 Опыт берут крысу-сам 333массОЙ 180 Г. В целях стандартизации успоВий зксп 8 рим 8 нта испсльзуОт жиВОтное после предварительногс голодания на протяжении 16 ч (без лишения воды). Зксперимо:)т проводят в утренние часы лекду 9 и 10 часами). Животного нд)экот)лз лру)от путем Бцутрибр)ошицного введени 51 натрия тиопентала (50 мг/кг мдссь тела), фиксиру)от б 10 шком кверху л Г 00)лзвод 51 г сэед)л 1- ну)о лапзротомикэ, 8 операционную рану, огстуг)л 5 см от 12-перстцой ки)пки, Выводят сеГМОНГ 3 К Длиной д см, Пэот)ле 1 ОГ 1 ОГ)03 ныР концы сегмента надсекакэт, через образодавшиеся отгерстия промыва)от сегмент 4,0 мл охлажденного (+4 С) ИРХЯ, Дис гдльцьил конец сегмента ки)зэки закрывают лигатурой, котору)о проводят;еред бессосудистую зону брыжейки, Через отверстие Б прокслмальца отделе сегмент с помощьЮ шприца заполняот подогретым до 42"С 3%-ным раствором агар-агара с и редвдри.гепьцо добавленным В него доз 3 лрованцым копичеством субс. рата,0,1 г растворимого крахмала на 100 ад раствора зГзра, сг)есь тщательно перемошивд)от с помощью магнитной меиалки). Проксимсальньил конец сегмента кишкл закрыва)от лфлгатурой, провеценцой через бессосудистую зону брыжейки 1 з расстгЯции 2 см От Дистзльцо на 510 женцой Г 131 гдтуры, Заполненный сегмент погружзОг Б бр)ошцу)о полос гь ),а 15 мин (Б эемя инкубац)Л)Л Субетрата С фЕрМЕНТаМИ НСГГ), Края операционной раны сбллкз)от и обкпадыва)от салфетками, смо,енными в теплом 34 РХН. Через 15 мин после заполнения сеглецд поспег)ний р,.зреадот Вдоль, извлекают д)арову)о ре 3)пику, гзвешивают ее и гомогенизируот в охлажденном ИРХН(3,0 мп), Б который с целЛо прекращения гидролизз субстрата добавля)от 1 мп 10%- ного раствора трихлоруксусной кислоть), Ромогецат реплики центрифугиру)от при 5000 обГмин на протяжении 10 мин, 2,0 мп цздосддочной жидкости используют дпя определения ферментативной активности Гэ:-амИЗГ)дзы по степени Гидролиза субстэата ппии Б 1 с,Предлагаемым способом осуществлено определение ферментативной активности НСЗ у 18 белых крыс-самцов массой 180-220 г, Ко)гтрольну)о группу кивотнь)х, у. которых определение указанного показзтеля проводили известным способом, состзвили 12 белых крыс-самцов аналогичноймассы тела,Обоснование Воспроизводимости (точности) способа определения представлено Б таблице,Анализ приведенного источника показывает: что зкспер)лмент по изВестному спо собу начинается с декапитации животных,1753422 Статистические показа вестныи ис ледованных живифметическое значеего арифметичесратическое отклонвариации Рх)различия1С ьюдента) еств атее а 237Ошибка среднСреднее квадКоэффициентДостоверностьпо итвцлю Составитель Л,КонюховаТехред М.Моргентал Корректор М,Шарои едактор Н,Химчук Тираж дарственного комитета и 113 О 35, Москва, ЖПодп изобретениям и о Раушская наб., каз 2166 ВНИИПИ сноекрытиям при ГКНТ5 изводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 1 все дальнейшие процедуры осуществляются вне организма, отрезок кишки, заполненный агаром, помещается на 15 мин, в ледяную банджо, а затем агаровая реплика извлекается и подвергается исследованию,5В предлагаемом же способе исследуемый сегмент кишки заполняют раствором агара непосредственно в брюшной полости, пои этом в агар предварительно добавляют дозированное количество субстрата и инку бацию субстрата с ферментом осуществляют в условиях живого организма.Таким образом, положительный эффект изобретения сосот в том, что процесс инкубации фермента с субстратом осуществ ляется в прижизненных условиях. Формула изобретенияСпособ определения активности амилазы надмембранного слоя энтероцитов экспериментального живбтного, включающий введение в просвет сегмента кишки подогретого раствора агар-агара, извлечение его после застывания, взвешивание, гомогенизацию, инкубацию обоазца с субстратом в течение 15 мин с последующим фотометрическим измерением ферментативной актив-ности, о тл и ч а ющи й ся тем, что, с целью приближения к физиологическим условиям, . сегмент кишки заполняют содержащим субстрат агар-агаром непосредственно в брюшной полости и проводят инкубацию в условиях организма животного.
СмотретьЗаявка
4794884, 26.02.1990
ГРОДНЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ
КОРОЛЕВ ПЕТР МАТВЕЕВИЧ
МПК / Метки
МПК: G01N 33/68
Метки: активности, амилазы, животного, надмембранного, слоя, экспериментального, энтероцитов
Опубликовано: 07.08.1992
Код ссылки
<a href="https://patents.su/3-1753422-sposob-opredeleniya-aktivnosti-amilazy-nadmembrannogo-sloya-ehnterocitov-ehksperimentalnogo-zhivotnogo.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ определения активности амилазы надмембранного слоя энтероцитов экспериментального животного</a>
Предыдущий патент: Способ определения иммуноглобулина j е при аллергических заболеваниях
Следующий патент: Реле скорости
Случайный патент: Протяжка для обработки поверхностей