Способ оценки качества спермы

/02 5 ц 5 А 61 НИЕ ИЗОБ О ЕТЕ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЪСТВ(71) Украинский научно-исследовательский институт разведения и искусственного осеменения крупного рогатого скота(56) Инструкция по организации и технологии работы станций и предприятий по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, - М 1981.Авторское свидетельство СССР ЬЬ 974270, кл. А 61 О 7/02, 1976.(54) СПОСОБО ЦЕН КИ КАЧ ЕСТВА СПЕРМЫ (57) Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, а именно к обьективным способам оценки качества спермы. Целью изобретеИзобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, а именно к обьективным способам оценки качества спермы, и может быть ши-. роко использовано на племпредприятиях и станциях искусственного осеменения животных.Цель изобретения - повышение точности и сокращение времени оценки качества спермы,Способ осуществляют следующим образом.Предварительно разбавленную спЕрму в кювете освещают лучом лазера. Рассеянный на спермиях лазерный свЕт,. ния является повышение точности и сокращение времени оценки. Рассеянный на спермиях лазерный свет, имеющий доплеровский сдвиг по частоте, регистрируют фотоприемником, выход которого соединен с входом прибора для измерения корреляционных характеристик. В результате накопления и обработки сигнала коррелятор строит корреляционную функцию рассеянного света, которая содержит информацию о скоростях, частотах вращения головки и проценте подвижных клеток. Концентрация спермиев определяется по величине среднеквадратичных флуктуаций тока фотоприемника, соответствующих флуктуации количества частиц в зоне наблюдения. Цифровая информация о форме корреляционной функции поступает на ЭВМ. Результат обсчета выдается в виде цифр, таблиц или графиков. 1 з,п.ф-лы, 2 табл,имеющий доплеровский сдвиг по частоте, (Д регистрируют фотоприемником, выход ко- а торого соединен с входом прибора для из- р мерения корреляционных характеристик (коррелятор). В результате накопления и обработки сигнала коррелятор строит корреляционную функцию рассеянного света, которая содержит информацию о скоростях, частотах вращения головки и проценте по- а движных клеток. Концентрация спермиев определяется по величине среднеквадратичных флуктуаций тока фотоприемника, отвечающим флуктуации количества частиц в зоне наблюдения, Цифровая информация о форме корреляционной функции поступает на ЭВМ, которая производит необходимыевычисления и выдает. результат обсчета ввиде цифр, таблиц или графиков,П р и м е р. Оценку качества проводятна сперме быкаЖучок (инц. М 5638), замороженной в гранулах и хранившейся в 5жидком азоте при -196 С согласно действующей инструкции. Оттаивание гранулосуществляют при 40 С в подогретом 2,9 ном растворе лимонно-кислого трехзамещенного пятиводного натрия. Оттаянного 10сперму помещают в термостат при 38 С.Оценку качества спермы проводят сразу жепосле оттаивания, а затем через каждый час- до полной гибели,Для оценки предлагаемым способом 15образец оттаянной спермы разбавляют в 20раэ и в кювете облучают лазерным светом(633 нм), Рассеянный на 16 свет попадаетна фотоприемник (ФЭУ), фототок от ФЭУусиливают и подают на коррелятор, управление которым происходит в автоматическом режиме от микроЭВМ, По завершенииоперации съема корреляционной функцииданные попадают в оперативную памятьмикроЭВМ, готовые для дальнейшей обработки, Вычисление параметров качестваспермы проводят по методу наименьшихквадратов, достоверность полученных данных оценивают по критерию Фишера. Всеподгонки для приведенного опыта имеют 30достоверность выше 99,9. Качество спермы оценивают по следующим показателям:подвижность выражают по 10-балльнойшкале; концентрация, млн. спермиев в грануле или млн. спермиев в 1 мл оттаянной 35спермы; скорость прямолинейного движения спермиев (трансляционная), мкм/с;скорость движения спермиев по спирали(спиральная), мкм/с; частота вращения головки спермиев, ГЦ. 40Параллельно с оценкой спермы предлагаемым способом проводят сравнительныеизмерения по известному методу, При этомрегистрируют спектр рассеянного лазерного света; данные визуальной оценки подвижности сопоставляют с полуширинойполученного спектра, выраженной в герцах,В качестве базового способа оценкикачества спермы используют способыоценки концентрации и подвижности, применяемые в практике искусственного осеменения согласно действующейинструкции. Концентрацию определяютпри помощи счетной камеры Горяева по-.сле предварительного разбавления в специзльных меланжерах,вцражают в млн,спермиев в грануле или млн. спермиев в 1мл оттаянной спермы, Подвижность опредвляют визуально- в раздавлвнной каплеспермы под микроскопом в проходящем свете при увеличении в 100-180 раз с использованием нагревательного столика при.40-41 ОС и выражают в баллах (по 10-балльной шкале).Результаты сравнительной оценки подвижности оттаянной спермы представлены в табл.1.Данные табл.1 свидетельствуют о том, что показатели подвижности, определяемые предлагаемым способом, более точно соответствуют данным ГОСТа (базовый способ) в сравнении с известным способом. Преимуществом предлагаемого способа в сравнении с базовым является более высокая точность измерений, а также объективность метода. Время измерения одного образца спермы предлагаемым способом составляет 32 с, известным способом 10 мин а базовым: для определения подвижности - 2,5 мин концентрации - 10 мин. Кроме того, эа эти же 32 с при измерении предлагаемым способом получают дополнительную информацию о качестве спермы, которое не определяется одновременно при оценке известным способом. Эти данные представлены в табл.2.Приведенные в табл.2 результаты свидетельствуют о преимуществе предлагаемого способа оценки качества спермы в сравнении с известными. Это проявляется в повышенной скорости сьема информации: так, предлагаемым способом она составляет 32 с, по известному 10 мин, т.е. скорость измерений повышается в 20 раз. Кроме того, более высокая точность .предлагаемого способа, что объясняется значительным снижением зашумленности корреляционной функции рассеянного света в сравнении с его спектром, регистрируемым в соответствии с известным способом, и подтверждается данными табл,1, свидетельствующими об отсутствии линейной зависимости между данными известного базового способов. При этом, большая полнота получаемой цифровой информации, т.е. в более широкие функциональные возможности оценки качества спермы, Так, помимо подвижности, одновременно получают информацию о концентрации спермы, и рямолинейной и спиральной скоростях движения спермиев, частот вращения головки (табл.2), а также распределении спермиев по скоростям их движения, а это позволяет более строго подойти к суждению о биологической полноценности оцениваемой спермы, что, в конечном счете, повысит эффективность искусственного осемене- ния.1731207 Таблица 1 Таб оставитель А. Филипповехред М.Моргентал тор: А. Ро Дерба Реда кт Заказ 1527 Тираж: Подпи ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и от 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/оеытиям при ГКНТ СССР Ужгород, ул. Гагарина, 101,оизводственно-издательский комбинат "Патент Формула изобретения 1Способ оценки качества спермы, включающий ее отбор, разбавление, облучение лучом лазера при длине волны 633 нм, измерение рассеянного света и последующую оценку качества спермы, о тл ич а ющ и й с я тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени оценки качества спермы, после облучения спермы лучом лазера регистрируют и измеряют флуктуации рассеянного света, определяют корреляционную функцию рассеянного света ипо ней определяют скорость движения и5 число подвижных спермиев, по которым судят о качестве спермы,2. Способ по п,1, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что облучение спермы лучом лазераосуществляют при 38,0 +О,ВС,10