Способ консервирования микроорганизмов

(ч)5 С 12 М 1 ЕТЕНИЯ пептон 0,8, гоого растворерованной воде лавированием асфасованный ри 105 +2 С охлаждают до натрия 2,5; тио товят путем и ния компонент (рН 7.2) и стер при 120 С в теч во флаконы об катион ит К БП очевина 0,8; следовательн в в дистилли лизуют авток ние 20 мин, Р звоженный и 2 (Ма+-форма) ду следую; глутамат ОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗО АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС(71) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии (72) В,В,Мищенко, А.А,Ильин и В.С,Тарумов (53) 576.8,093,3(088,8)(56) Методы общей бактериологии/Под ред, Ф. Герхардта и др, Т.1, М,: Мир, 1983, с.512 - 534.Парини О,В, и др. Исследование выживаемости и физиологической активности некоторых штаммов дрожжей после длительного хранения в силикагеле. - Микробиология, Т.41, 1972. с,164-167. Изобретение относится к микроби гии, в частности к способам хранения роорганизмов в обезвоженном состоян может быть использовано в микробио ческой промышленности.Поставленная цель достигается тем, что консервирование микроорганизмов осуществляют путем суспендирования культуры в защитной среде с последующим контактносорбционным обезвоживанием и досушиванием при комнатной температуре, причем в качестве защитной среды используют смесь, содержащую, мас.00: сахароза 25-30; глутамат натрия 2,5-3; тиомочевина 0,8 - 1,: пептон 0,8 - 1,3 и дистиллированную воду. контактно-сорбционное обезвоживание целевого продукта проводят охлажденной до -18+22) С смолой КБПпри массовом соотношении 6,5 - 7,5:1 соответственно, а досушивание осуществляют в течение 65- 72 ч.сре П р и м е р 1. Защитную го состава, мас,00, сахароз(54) СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ(57) Сущность изобретения; культуру микроорганизмов суспендируют в защитной среде, содержащей. мас,;: сахароза 25-30; глутамат натрия 2,5 - 3; тиомочевина 0,8 - 1,2; пептон 0,8-1,3; дистиллированная вода, Взвесь смешивают в массовом соотношении 6,5 - 7,5:1 с охлажденной до -18+22)С смолой КБП, досушивают в течение 65- 72 ч. В процессе хранения повышается жизнеспособность культур. 1 табл,-18 С.Используемые культуры микроорганизмов. выросшие на соответствующей плотной питательной среде преимущественно до стационарной фазы роста, смывают 5,0- сантиметровой средой. Стабилизированную культуру вносят по 0,2 см" во флаконы, содержащие сорбент в соотношении 1;6,5. Флаконы после внесения культуры выдерживают при температуре внешней среды (20 - 2) С в течение 65 ч, Подготовку контактно-обезвоженных культур проводят в стерильных условиях, Через два года хранения контактно-обезвоженные препараты регидратируют 15,0 см охлажденного до 4 С бульоном на основе серно-кислотного гид 1730138ролизата рыбокостной муки. Высевом десятикратных разведений регидратированнойкультуры определяют процент жизнеспособных клеток,В таблице показано влияние различных 5соотношений катионита КБП(Ма -форма) и суспензий клеток на их выживаемостьпри хранении в течение двух лет,Из данных, представленных в таблице,видно, что изменение соотношения суспензии клеток и сорбента влаги приводит кухудшению качества сушки и снижению выживаемости микроорганизмов,П р и м е р 2. Процесс контактно-сорбционного обезвоживания культуры вакцинного штамма туляремийного микробаосуществляют аналогично примеру 1, но вопытах используют защитную среду следующего состава. мас.о : сахароза 30: глутамат натрия 3,0, тиомочевина 1,2: пептон 1,3: 20вода остальное, и варьируют температурой сорбента от плюс 22 3 С до минус30.ф.2 С,Суспению клеток вносят на охлажденную до -22 С смолу КБПпри массовом 25соотношении 1;7,5, и для досушивания выдерживают при комнатной температуре72 ч.Результаты опытов свидетельствуют отом, что использование предлагаемого состава защитной среды и температуры охлаждения сорбента до минус 20 + 2 Ссущественно повышает выживаемость клеток в процессе контактно-сорбционногообезвоживания. 35П р и м е р 3, Культуру Я.сцсегЮбзнаг. зза 1 епепКо выращивают на плотной питательной среде в чашках Петри до стационарной фазы. Смывают 5,0 см защитнойсреды, содержащей. мас.о : сахароза 30,0; 40глутамат натрия 3,0; тиомочевина 1,2; пептон 1,3, вода остальное, Высушенный допостоянного веса катионит КБП(Каформа) расфасовывают по 1,4 г в пенициллиновые флаконы, Флаконы с сорбентом 45стерилизуют и досушивают в течениечетырех часов в сухожаровом шкафупри (110 .2)С, Силикагель, расфасованный по 4,0 г в пенициллиновые флаконы.обезвоживают при 180"С в течение 2 ч, Перед использованием флаконы с сорбентом влаги охлаждают до температурыминус (20 +2)С в камере бытового холодильника. Стерильной пипеткой стабилизированную защитной средой культуру клеток 55по 0,2 см вносят на поверхность сорбента. Флаконы закрывают резиновыми пробками и фиксируют путем закатки алюминиевыми колпачками.Для досушивания клеток до оптимальной остаточной влажности образцы препаратов выдерживают при комнатной температуре в течение 3 сут, Препараты хранят при температуре 4 или -20 С. Через 24 мес хранения проводят контроль жизнеспособности культур. Для этого препарат регидратируют 15,0 см мясопептонного бульона и встряхивают в течение 1 - 2 мин, поле чего делают посев десорбцированных клеток на плотную питательную среду в чашках Петри, После инкубирования подсчитывают число колоний. Через 24 мес хранения выживаемость культур, хранящихся на катионите КБП(йа -форма) составля+ет 16,8 живых микробных клеток для температуры -20 С, и 9,3 о - для температуры 4 - 6 С, Выживаемость культур, хранящихся на силикагеле (известный способ, при температуреС менее 1 , а при температуре 4-6 С жизнеспособность культур потеряна.Преимущество предлагаемого способа заключается в том. что она обеспечивает высокий уровень жизнеспособности культур в процессе хранения и позволяет хранить штаммы с различными плазмидами, так как в процессе хранения стабильно сохраняются селективные маркеры устойчивости к антибиотикам. Кроме того, предлагаемый способ по сравнению с известными характеризуется простотой и доступностью осуществления, расширением спектра микробных культур, подлежащих хранению.Формула изобретения Способ консервирования микроорганизмов путем суспендирования культуры в защитной среде с последующим контактносорбционным обезвоживанием и досушиванием при комнатной температуре, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения сохраняемости микроорганизмов, в качестве защитной среды используют смесь, содержащую. мас. : сахароза 25 - 30; глутамат натрия 2,5 - 3; тиомочевина 0,8 - 1,2; пептон 0,8 - 1,3 и дистиллированная вода, контактно-сорбционное обезвоживание целевого продукта проводят охлажденной до -18 - (-22)С смолой КБПпри массовом соотношении 6,5 - 7,5:1 соответственно, а досушивание осуществляют в течение 65 - 72 ч,1730138 2 Составитель А,ИльинТехред М.Моргентал Корректор Н,Рев едактор М.Петрова одственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 10 П Заказ 1488 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5