Способ получения растений-регенерантов ячменя, устойчивых к гельминтоспориозу

(я)5 А 01 Н 4/00, 1 ЛЬСТВУ К АВТОРСКОМУ СВ НИЙ-РЕ-ИВЫХ К сто Ляльл 1 ив 0,0 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(56) Авторское свидетельство СССРМ 1323046, кл, А 01 Н 1/04, 1984. Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и может быть использовано в селекционной практике при создании устойчивых к фитопатогенам грибов - возбудителей болезней сортов элаковцх культур, в частности ячменя.Целью изобретения является повышение устойчивости растений-регенерантов к патогену,Способ предусматривает выращивание каллусной ткани на среде Мурасиге и Скуга, содержащей селективный агент, с последующим получением регенерантов, при этом в качестве селективного агента используют токсин гриба Не п)1 птозрогоп) зат 1 чцп).Способ осуществляется следующим образом,В качестве эксплантатов, которые высаживают на каллусогенную среду Мурасиге и Скуга в пробирки с различными концентра 2(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕ ГЕНЕРАНТОВ ЯЧМЕНЯ, УСТОЙЧ ГЕЛЬМИНТОСПОРИОЗУ(57) Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и может быть использовано в селекционной практике при создании сортов элаковых культур, устойчивых к гельминтоспориоэу. Цельюузобретения является повышение устойчивости растений-регенерантов к патогену. Способ состоит в том, что получают регенеранты из каллуса, выращиваемого на питательной среде Мурасиге-Скуга в присутствии селектинного агента-токсина гриба Н.Бабчое, 3 табл. циями простерилизованного при помощи бактериального фильтра токсинов гриба Н.забчце, используют незрелые зародыши ярового ячменя сортов Добрый и Дина. Пе ред вцсадкой эксплантаты стерилизовали в С 5 ф, раствора хлорамина 15 мин, Экспланта- ф ты вносят в среду М 1 с токсином гриба ъ Н.зат 1 чцщ следующего состава: О Маточный раствор В 1, г; О, МН 4 МОз 8,25 КМОз 9,5 М 9304 7 Н 20 185 МпЯ 04 5 Н 20 0,12 Еп 4 ЯО 4 4 Н 20 0,043 Со 504 5 Н 20 0,000125 Доводят до 500 мл дистиллированной водой, откуда берут 100 мл. Маточный раствор М 2, г: КН 2 ОРО 4 0,8 НзВОз 31Ю 0,00415 йа 2 Мо 04 2 Н 20 0,00125 (растворяют отдельно а 10 мл подогретой Н 20 и берут 1 мл/л)СоО 2 6 Н 20 0,000125 (растворяют от дельно в 100 мп, откуда берут 1 мл/л),Доводят до 500 мл дистиллированной водой и берут 100 мл.Витамины, г:Глицин 0,07 10 Витамин В 1 0,005 Витамин Вб 0,005 Витамин РР 0,005 Растворяют в 100 мл дистиллированной Н 20, откуда берут 10 мл. 152,4 Дихлорфеноксиуксуснаякислота 0,002 г Хелат железа 10 мл Сахароза 25 г Агар 7 г СаС 12 0,332 г 20 Все компоненты смешивают и доводят до объема 1 л дистиллированной водой.Образовавшийся каллус пересаживают на среду 1 Ф 2 такого же состава, но без токсина. Затем культивирование выжиаше го каллуса ведут на органоченной среде М 3 следующего состава:Раствор ЬЬ 1 100 мл Раствор В 2 100 мл Хелат железа 10 мл 30 Витамины 10 мл Гидролизат дрожжевой ,1,0 г СаС 2 0,332 г ИУК (индолилуксусная кислота) 0,0005 г 35 Кинетин 0,01 г Гиберелловая кислота 0,05 г Сахароза 15 г Агар 7 г и доводят до 1 л.дистиллированной Н 20. 40Эксплантатц культивируют на средах М 1 и 2 при освещенности 5 - 6 тыс. лк, при Т - 26 С и 16-часовом фотопериоде, а на среде М 3 при Т -15+ 17 ОС, освещенности 10-15 тцс; лк, при фотопериоде 16 ч в тече ние 25-30 дней на каждой среде. Полученные регенерантц в фазе 2-3 листьев высаживают в горшки со стерильным песком, затем в почвосмесь: дерновая зем ля - песок - торф 1;1;1 и устанавливают в вегетационную камеру (Т = 2-4 С) на 56-60 дней,После яровизации и депонирования растений-регенерантов семена от них испытывают на устойчивость к гельминтоспориозу.П р и м е р 1. Выборку доз для введения токсина в 1 каллусогенную селективную среду определяют эмпирически. Для этого первоначально устанавливают процент ингибирования корней однодневных проростков семян ячменя токсином гриба (табл, 1),Исходя из концентрации, которая ингибирует не менее ЗОО, роста центрального корня, подбирают дозы дпя введения в се-: лективную каллусогенную среду, Дозы подбирают эмперически примерно в 20 - 25 раз меньше найденной на проростках. Регенерационная способность каллусов ячменя приведена в табл. 2.П р и м е р 2, Полученные из выживших на селективной среде с токсином гриба каллусов регенеранты после выращивания на инфекционном фоне дают урожайность по сравнению с контролем в 1,6 раза выше.Использование предлагаемого способа получения растений-регенерантов ячменя, устойчивых к токсину гриба Н.за чцгп, обеспечивает по сравнению с известным способом следующие преимущества:применение а качестве селективного фактора токсина гриба более экономично, он не содержит сопутствующих примесей, воздействие которых на каллус проявляется при использОвании культурального фильтрата;введение в питательную среду Мурасига и Скуга определенных доз токсина гриба позволяет вести отбор регенерантов из минимального количества выживших каллусов.Формула изобретения Способ получения растений-регенерантоа ячменя, устойчивых к гельминтоспориозу, включающий выращивание каппусвой ткани на среде Уурасиге-Скуга в присутствии селективного агента с последующим получением регенерантов, о т л и ч а ю щ ий с я тем, что, с целью повышения устойчивости растений-регенерантов к патогену, в качестве селективного агента используют токсин гриба Невптозрогйп за 11 чат.1701196 Таблица 1 Воздействия фитотоксинов гриба Н,затЬцгп на длину корней однодневных проростков ячменяТаблица 2 Регенерационная способность сортообразцов ячменя на селективной среде с токсином аблиц Показатели продуктивности при выращивании на инфекционном фоне семян, полученн от устойчивых к фитотоксинам гриба Н. забчцт растений-регенерантовТираж Подписноеосударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5