Способ выращивания растений кукурузы in viтrо

(51)5 А 01 Н АНИЕ ИЗОБРЕТЕ и се- аней Изобрет гии и сельск лекции и растений, и ускоренного линий и во получения гологовности,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(56) Спрэг Г.Ф. Кукуруза и ее улучшение. -М,: Изд-во иностр. лит., 1957, с. 264-289.бгееп С.ЕРЬрз КЛ . Рапт оепегабопагою тзые сомге о 1 псае, - Сгор, Зс 1, 1975,15, р, 417-421.М 9 ое А, Вареа: Ог 9 апо 9 епезз апбЗоватс ЕтЬгуо 9 епезз и Тззце СоТогез о 1Ягдептпе Маге (Ееа тауз ). - . РаптРоузо., 1985, ч. 121, р. 119-122. ение относится к биотех ому хозяйству, в частност культивированию тк может быть использован создания стерильных ана сстановителей фертиль мозиготного материала. Известен способ почвенной культуры кукурузы, который включает посев зрелыми семенами и выращивание растений до полной спелости зерна. Установлено, что уразличных линий и гибридов кукурузы период от опыления до полного созревания зерна различен и составляет в среднем 1,5 мес. Существующий способ не дает возможности сократить период вегетации за счет исключения фазы созревания семян,(54) СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ РАСТЕНИЙ КУКУРУЗЫ й ЧТВО(57) Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, в частности к селекции и культивированию тканей растений, и может быть использовано для ускоренного создания исходного материала кукурузы. Целью изобретения является ускорение получения растений, Изобретение состоит в том, что незрелые 14-18-дневные зародыши кукурузы размером 4,5-5 мм помещают на модифицированную среду Мурасиге - Скуга щитком к среде и культивируют для получения фертильных растений. 2 табл. Сократить период выращивания возможно путем получения растений из изолированных незрелых зародышей на специальных питательных средах. Известны способы посева кукурузы незрелыми зародышами на искусственную питательную среду с целью получения каллусной ткани, в связи с чем зародыши высаживаются на питательную среду щитком вверх. При этом длина используемых для культивирования зародышей составляет 1,0-1,5 мм. В этом случае в области щитка уже через 2 - 7 сут начинается процесс каллусообразования, но развитие зиготического проростка ингибируется, Способ не позволяет получить нормальные зиготические проростки, Наиболее близким является способ получения регенерантов кукурузы путем соматическо 16958550,250,83 27,8 37,3 го эмбриогенеза, Однако данный способ не решает задачу ускорения селекционного процесса,Цель изобретения - ускорение получения растений.Способ состоит в том, что для выращивания растений кукурузыи чтго используют 14 - 18-дневные. незрелые зародыши длиной 4,5 - 5 мм, которые располагают на искусственной питательной среде щитком вниз.П р и м е р 1. На 14 день после опыления на растении кукурузы, не обламьвая початок, выделяют 2 - 3 зерновки, из которых извлекают зародыши и определяют их длину. Если длина зародыша не достигла 4,5-5 мм, початок оставляют на растении и повторяют измерение на этом растении через 1-2 - 3-4 дня. В тот день, когда длина зародыша составит 4,5 - 5 мм, початок обламывают, раэновки отделяют от стержня и стерилизуют в растворе диоцида в течение 30 мин. Затем промывают 5 раз стерильной дистиллированной водой, Зародыши извлекают из зерновок в стерильных условиях с помощью пинцета и глазного скальпеля. Микробиологической иглой зародыши переносят на питательную среду в пробирки длиной 20 см, располагая их щитком к среде. Пробирки с зародышами помещают в камеры искусственного климата с температурой 27 С, Первые два дня культивирование проводят в темноте, а затем на свету при 16-часовом фотопериоде.Культивирование осуществляют на среде, 1 л которой имеет следующий состав, мг: Макросоли и микросолипо Мурасиге и Скугу:Аммоний азотно-кислыйКалий азотно-кислыйКальций хлористый 2-водныйМагний серно-кислый 7-водныйКалий фосфорно-кислыйоднозамещенныйБорная. кислотаМарганец серно-кислый4-водныйКобальт хлористый 6-водныйМедь серно-кислая 5-воднаяЦинк серно-кислый 7-водныйНатрий молибденово-кислый2-водныйКалий йодистыйЖелезо серно-кислое7-водноеНатриевая сольэтилендиаминтетрауксуснойкислоты.2-водная 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Тиамин гидрохлоридПиридоксин гидрохлоридНикотиновая кислотаПантотенэт кальцияГлицинСахароза, гАктивированный уголь, гАгар, грН =5,8Приведенный состав питательной среды отличается от состава среды МурасигеСкуга содержанием агара. Снижение содержания агара до 4 г/л позволяет извлекать растения из пробирок, не травмируя корневую систему.Через,7 дней проростки из незрелых зародышей образуют 3 - 4 листа и хорошо развитую корневую систему, В таком состоянии растения извлекают из пробирок, тщательно отмывают корневую систему от среды. Проростки пересаживают в почву.П р и м е р ы 2 и 3 осуществляют аналогично примеру 1, исследуют при этом возможность использования зародышей другого размера и возраста (проростки у линии кукурузы ГК 26). Результаты представлены в табл 1 и 2,Использование зародышей меньше 4,5 - 5 мм нецелесообразно, так как такие зародыши медленно прорастают и образуют проростки с более низким значением числа листьев и корней, длины побега, сухой массы побега и корневой системы табл.1). Поэтому для изолирования и посадки необходимо отбирать зародыши длиной 4,5 - 5 мм, При этом образуется около 80 - 100% нормальных проростков. Использование зародышей крупнее 5 мм, хоть и позволяет получать более мощные проростки, но уменьшает эффект зкономии времени нэ созреваниисемян,Оптимальная длина зародыша 4,5-5 мм при обычных условиях выращивания растений в зависимости от генотипа имеет место с 14 по 18 день после опыления. Так, у изученной нами среднеспелой гибридной комбинации А 111 Т х ДК 92/61 (Ез) около 90% зародышей на початке относились к классу длины 4,5-5 ммначуырнадцатый день, у раннеспелой линии Р 2- на шестнадцатый, а у позднеспелой линии В 73 - на восемнадцатый день после опыления,Использование зародышей моложе 14 дней при их длине менее 4,5 мм нецелесообразно, так как такие зародыши медленно. прорастают и образуют проростки с низким значением числа листьев и корней, длины побега, сухой массы побега и корневой системы (табл,2), Применение зародышей старше 18 дней, хоть и имеющих длину более 51695855 Формула изобретения Способ выращивания растений кукурузы и чтго, включающий эксплантацию незрелых 14-18-дневных зародышей на модифицированную питательную среду Му расиге-Скуга и последующее культивирование, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения получения растений, экспланти- руют зародыши размером 4,5-5 мм и при помещении на питательную среду их ориен тируют щитком к среде,Таблица 1 ие с одиноковой буквой недостоверно различаются при Р = 0 а блица 2 Составитель В.Демкин Редактор Е,Папп Техред М.Моргентал Корректор В.Гирнякказ 4246 ТиражПодписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ 113035, Москва; Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул, Гагарин мм и позволяющих получать мощные проростки, уменьшает эффект зкономии времени на созревании семян, Поэтому для изолиро-вания и посадки необходимо отбирать за-.родыши длиной 4,5-5 мм, что обычно имеет 5 место на 14 - 18 день после опыления. При этом образуется около 80-100 нормальных проростков.Использование изобретения позволяет сократить период выращивания растений кукурузы за счет исключения фазы созревания семян на 20-30 дней в зависимости от генотипа. Это даст возможность, например; сократить весь цикл перевода линий на цитоплазматическую мужскую стерильность