Способ криоконсервации спермы

союз советснихсоцидлистичеснихРЕаЪБЛИН АЙ 0 Г 5 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ АВТОРСКОМ И ЯТЕЙ скохозяйственных животных и птиц.Целью изобретения является повыше-,ние выживаемости и оплоротворяющейспособности семени. Способ заключается в использовании в качестве криопротектора соединения, которое относится к классу М-ацилэтаноламинов;М-пальмитоилэтаноламина и/или И-стеароилэтаноламина, который предварительно смешивают с липофильным компонентом защитной среды в соотношении 1:1000. Затем полученную смесьвводят в разбавленную сперму из расчета 50-100 мкг на 1 млрд спермиев,Выживаемость спермиев достигает85 ч, а оплодотворяющая способность спермы 64,8, 1 з,п,ф-лы,2 табл,(21) 4221514 5(72) Н.М.Гулая,соцкий, Д.А.Мель 2 м.А.В.Паллаохозяйстими и и лков, М.В.Выи Ф.В,Иванен.Л ич ед- ене 36 с. ЕРМЫ ельско лот льдля лечения острых ре болеваний вирусной прСпособ осуществляю спираторных заироды.т следующим образом.10 мг ПЭА и/или СЭА растворяют при тщательном перемешивании в 10000 мг липофильного компонента за- щитной средь 1. Свежеотобранную сперму оценивают согласно известному базо-, вому способу и в зависимости от концентрации спермиев в нее вводят защитную среду, а затем добавляют криопротекторную смесь 50-100 мкг на 1 млрд спермиев и перемешивают, эквилибруют при 0-(+5) в течениео4-5 ч и замораживают в парах жидкого азота до температуры (-196) С,П р и м е р . 1. Приготовляют криопротекторную смесь для 20 проб,судАРственный нОмитетО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЬГГИЯМРИ ГКНТ СССР(56) Инструкция по организацтехнологии работы станций и приятий по искусственному ос нии животных. М; Колос, 198 (54) СПОСОБ КРИОКОНСЕРВАЦИИ(57) Изобретение относится к му хозяйству, в частности к гии искусственного осеменени Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к техноло ,гии искусственного осеменения сельскохозяйственных животных и птиц,Цепью изобретения является повышение выживаемости и оплодотворяющей способности семени.Способ заключается в использовании в качестве криопротектора соединения, которое относится,к классу И-ацилэтаноламиноя: М-пальмитоилэтаноламина (ПЭА) и/или М-стеароилэтаноламина (СЭ 4), представляющих собой поверхностн -активные вещества.фармокологическое действие этих препаратов изучено, например, ПЭР ,как фармацевтический препарат им.пульсин применяется в Чехословакии1690736 А10 10 мг ПЭА смешивают с 10000 мг яичного желтка (в соотношении 1:1000).Цельную сперму разбавляют в защитной среде из расчета 10 млн активных спермиев в одной оттаянной спермодозе при следующем составе среды:Лактоза, г 11,5Желток куриных яиц,20,0Глицерин, мл 5 ф 0Спермосан - 3 тьс.ер. 50,0Вода дистиллированная, мл 100,0В разбавленную сперму вводят смесьс криопротектором из расчета 75 мгсмеси на 1 млрд спермиев. Затем обработанную сперму охлаждают в холоодильнике до 5 С в течение 5 ч (эквилибрация) и замораживают в виде гра нул на Фторопластовой пластине в парах жидкого азота. Замороженную сперОму хранят в жидком азоте при (-196) С,Одновременно параллельные пробы техже эякулянтов обрабатывают по базовому способу, которые служат кбнтролем.Биологическую полноценность спермы, обработанной базовым и предлагаемым способами, оценивают по показателям подвижности и выживаемости спер-,миев согласно ГОСТУ 20909,ч. Результаты проведенных исследованийизложены в табл,1.П р и м е р ы2-6, Сначала приготовляют криопротекторную смесь ПЭАи/или СЭА в глицерине (1;1000) в следующих количествах на 1 млрд спермиевпример 2, 50 мг смеси (50 мкг ПЭА 40в 50 мг глицерина),пример 3, 75 мг смеси (75 мкг ПЭАв 75 мг глицерина);пример Й. 75 мг смеси (75 мкг СЭАв 75 мг глицерина);45пример 5. 75 мг смеси (37,5 мкгПЭА+37,5 мкг СЭА в 75 мг глицерина)пример 6. 100. мг смеси (100 мкгСЭА в 100 мг глицерина).Цельную сперму разбавляют защитной средой из расчета 10 млн активныхспермиев в одной оттаянной спермодозепри следующем составе защитной среды:Лактоза, г 11,5Желток куриных яиц, мл 20,0Глицерин, мл 5,0Спермосан(3 тыс.ед,) 50,0 Вода, дистиллированная,мл 100,0 П р и м е р 7. Определяли биологическую полноценность спермы, полученной при применении предлагаемого способа, путем искусственного осеменения коров и телок на небольшом поголовье в колхозах "Зоря" и "Здобуток Яовтня" Житомирского района Житомирской области УССР. Контролем служила сперма быков-производителей, замороженная по базовому способу, Зависимость оплодотворяющей способности спермы от способа ее криоконсервации приведена в табл,2. Контроль оплодотворения осуществляли ректальным исследованием.Анализ полученных результатов свидетельствует о преимуществах новогоспособа по сравнению с известными,которые выражаются в более высокойбиологической полноценности спермы.Подвижность спермиев увеличиваетсяна 59,54 при статистически значимойразнице в сравнении со способомпрототипом. Значительно увеличиваетсяабсолютный показатель выживаемости(на 854) при одинаковом времени выживаемости спермиев,Кроме того, высокий процент оплодотворяемости коров (61,84) и телок(90,24) спермой быков-производителей, замороженной предлагаемым способом,против базового (18,7 и76,94 соответственно, табл.2) свидетельствует о биологической полноценности спермиев при обработке спермы животных предлагаемым способом.Формула изобретения1, Способ криоконсервации спермы, включающий разбавление спермы защитной средой, содержащей липофильный компонент и обработку криопротектором, эквилибрацию, замораживание в парах жидкого азота и оттаивание, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выживаемости и оплодотворяющей способности семени, в качестве криопротектора используют Б-пальмитоилэтаноламин и/или Н-стеароилэтаноламин, который предварительно смешивают с липоФильным компонентом защитной среды в соотноше- ;нии 1:1000, а затем полученную смесь вводят в разбавленную сперму1 Ь.) 0 736 из расчета 50- 100 мкг на 1.млрд спермиев,2. Способ по п.1, о т л и и а ащ и й с я тем, цто в кацестве липофильного компонента используют глицерин или яичный желток,Табли оВыживаемость при 38 СВремя, ч Абсолютная Способобработки Пример Подвижность, балл Количествоэякулятов Ь) 1в 15 2п=20 3и 20 а 20 5и 20 6п=20 П р и м е ч а н и е, Введение смеси в количестве 10-40 мкг на 1 млрд спермиевувеличивает абсолютную выживаемость всего на 30-403, а .введение 200-500 мкг - не увеличивает ее более чем)на 60-631. 35 Табли ца 2 Способ обработки спермы Осемененоголов Оплодотворено от первого осемененияголов 35 64,8 37 90,2 37 48,7 90 76,9 54 41 76 117 Предлагаемый коровытелки Базовый коровытелки Составитель И.Марченко Редактор И,Васильева Техред А,КравчукКорректор И,Самборская Заказ 4619 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская иаб., д. 4/5 фПроизводственно-издательский комбинат "Патент", г.укгород, ул, Гагарина,10 ПредлагаемыйБазовыйПовышение,ПредлагаемыйБазовыйПовь 1 шение9.ПредлагаемыйБазовыйПовышение, 3ПредлагаемыйБазовыйПовышение,ПредлагаемыйБазовыйПовышение,ПредлагаемыйБазовыйПовышение, 3 8, 26-0, 119 4,66+0,124 77,25 6,82+0,168 4,66+0,124 4 Ь,35 8,23+0,207 4,66+0,124 76, Ь,1 Я,08+О,68 4,66+0,124 73,39 8,37+0,194 4,66+0,124 79,61 6,17+0,113 4,66+0,124 32,40