Штамм хламидий снlамydiа рsiттасi, используемый для изготовления биопрепаратов для диагностики и профилактики хламидиоза песцов

(5)5 А 61 ОБРЕТЕ АН ИДЕТЕЛ ЬСТВУ СКОМ К г(088 8) ие комплекотооых них в РСК сВопросы виСН .АМ ОДЛЯ ИЗГО ДЛЯ ДИЛИЛАКТИК рной м ла- ской(с Ч тахла ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Всесоюзный научно-исследователь кий ветеринарный институт(56) Червонский В.Н. Выявленментсвязывающих антител у недов птиц и млекопитающиантигеном вируса орнитоза, -русологии, 1960, М 1, с.80.Червонский В.Н., Попов О,М. Антиген для РСК при орнитозе-пситакозе. - Вопросы вирусологии, 1959, М 1, с.68,(54) ШТАММ ХЛАМИДИЙ А РЯТТАС. ИСПОЛЬЗУЕМЫЙТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ГНОСТИКИ И ПРОФ И ХЛАМИДИОЗА ПЕСЦОВ.(57) Изобретение относится к ветеринэ микробиологии, в частности к средства бораторной диагностики и специфиче профилактики, Целью изобретения является штамм СЫагпуба рэИэс ПП, обладающий высокой антигенной и иммуногенной активностью, что позволяет его использоИзобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к средствам лабораторной диагностики и специфической профилактики,Цель изобретения - штамм Спал)убэ рэпас ПП, обладающий высокой энти- генной и иммуногенной активностью, что позволяет его испольэовать для изготовления биологических препаратов для диагностики хламидиозов серологическими реакциями (РСК. РНГА, ИФА, РИА и др,), а вать для изготовления биопрепаратов для диагностики хламидиозов серологическими реакциями(РСК, РНГА, ИФА, РИА и др.), а также для специфической профилактики хламидийных инфекций. Штамм ППвпервые выделен от абортировавшей самки песца, адаптирован к размножению в желточном мешке куриных эмбрионов (КЭ), вызывает их гибель на 4-10-й день после заражения, Для КЭ инфекционный титр составляет 10 - 10 ЭЛДм/0,3 мл. Штамм нетоксичен, патогенен для песцов, норок и лабораторных животных (белых мышей и морских свинок), Антиген иэ штамма ППобладает выраженной активностью при изучении в реакциях связывания комплемента и энзиммеченых антител в сравнении с эталонным биофабричным хламидийным антигеном, изготовленным из штамма орнитоэа "Лори". Штамм обладает высокой иммуногеннойактивностью и вызывает невосприимчивость к заражению у 90-100; белых мышей через 14-20 дн после их иммунизации. Размеры возбудителя, его морфологические, тинкториальные, физиологические, иммуногенные и антигенные свойства подтверждают, что штамм ППотносится к бактериям рода СЫагпуба, виду СЬ эглус)а рэТтас. 2 табл,кже для специфической профилактикимидийных инфекций,Штамм выделен от абортировавшей самки песца в хозяйстве, где наблюдаются случаи абортов, мертворождений и слабо- рождений у клеточных пушных зверей, адаптирован к размножению в куриных эмбрионах (КЭ), прошел 31 пассаж при последовательном культивировании на желточной оболочке КЭ,Штамдепонирован в банке штаммов Всесоюзного научно-контрольного института ветеринарных препаратов и хранится под М 9 вколлекции специальной лаборатории штаммов Всесоюзного научно-исследовательского ветеринарного института (г, Казань).Штамм имеет следующие морфологические и физиологические характеристики.Элементарные тельца штамма имеютокруглую форму размером 200-300 им, пометоду Стемпа окрашиваются в красныйцвет. Возбудитель находится внутри и внеклеток, располагаясь одиночно или группами. В мазках-отпечатках из пареихиматозных органов (печень, селезенка, легкие)лабораторных животных (морских свинок,белых мышей) и норок, инфицированныхштаммом ПП, в реакции непрямой имму. нофлуоресценции обнаружены цитоплазматические включения в виде полиморфиыходиночных и множественных ярких желтоэеленых образований.Штамм хорошо культивируется в зпителиальных клетках желточных оболочек КЭ,вызывая их гибель на 4-10-й день после заражения в зависимости от дозы вводимогоинфекционного материала. Для КЭ инфекционный титр составляет 10 - 10-5 -бЭЛДьо/0,3 мл.Штамм устойчив к действию стрептомицина, чувствителен к действию антибиотиков тетрациклинового ряда, в меньшейстепени - пенициллина,Штамм СЫаглус 1 а рзатас ВГНКИ М 9(ПП) нетоксичен, патогенен для песцов инорок. Характеристика патогенности штамма для лабораторных животных представлена в табл.3,П р и м е р 1 . Исходным материаломдля получения специфического хламидийного антигена служит 20;ь-ная взвесь, приготовленная на 0,2 М фосфатно-буферномрастворе(рН 7,2) из 20 желточных оболочекКЭ, инфицированных штаммом ПП. Очистку и концентрацию возбудителя хламидиоза производят путем центрифугированиядифференциального и в ступенчатом градиенте сахарозы, Затем элементарные тельцаобрабатывают смесью. содержащей додецилсульфат натрия (ДСН) и зтилмеркаптаи(ЭМ) в конечной концентрации 0,1 и 1(, со 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 ответственно, Непрореагировавшие ДНС и ЭМ удаляют, диалиэуя суспенэию против 0,15 М хлористого калия в течение 48 ч. Получено 20 мл аитигена, который в РСК имеет титр 1;128.П р и м е р 2, Для изучения иммуногенных свойств штамма очищенный и сконцентрированный, как указано в примере 1, инфекционный материал, содержащий 30 мг/мл белка ииактивироваиный 0,4 ф,-ным (в конечной концентрации) формалином в течение,5 сут при 37 С вводят белым мышам виутрибрюшииио в дозе 0,5 мл. В качестве контроля используют иеиммунизированных белых мышей. По истечении 20 дн опытных и контрольных белых мышей заражают интраназально 10 -ной взвесью желточных оболочек КЭ, инфицированных штаммом ПП,-5,5с инфекционным титром 10 , ЭЛДю/0,3 мл в дозе 0,05 мл. В результате опыта выявлено, что однократное виутрибрюшинное введение ииактивированиых хламидий штамма ППзащищает 95% белых мышей от интранаэального заражения этим же штаммом,П р и м е р 3 . Штамм обладает выраженной антигенной активностью, которую изучают в реакции связывания комплемента путем сравнения титров антител в гипер- ",муииых сыворотках морских свинок, полученмх к штаммам хламидий; ППи Лори", а также антигеиов иэ этих штаммов. Характеристика аитигенности указанного штамма в сравнении со штаммом "Лори" представлена в табл,2,Приведенные данные показывают, что по антигеииой активности при исследовании с томологической сывороткой штамм ППпревосходит штамм орнитоза "Лори" в 64 раза, а с имунной орнитозной сывороткой в 5 раз уступает эталонному штамму, Аитиген иэ штамма ППвыявляет специфические хламидийные антитела в реакции энзиммечеиных антител в сыворотках крови больных, переболевших и экспериментально зараженных лабораторных животных и пушных зверей в титрах 1:10 - 1:10240.Формула изобретения Штамм хламидий СЫатуса рзцас ВГНКИ М 9, исполь;,уемый для изготовления биопрепаратов для диагностики и профилактики хламидиоза песцов,Тит антител пои иссле овании с внтигеном из щтамма ВГНКИ М 9 ПП"Лори" П р и м е ч а н и е .обратная величина титров антител,Составитель В. РомановаТехред М.Моргентал Корректор М, Максимишинец Редактор А. Козориз Заказ 2600 Тираж /4/3 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035. Москва. Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 ПП"Ло и" 640 4