Способ количественной оценки реакции высвобождения тромбоцитов

абор крови произ атической венопу широким просвет ения жгута) в сил вободным током (б водят после малокции короткой игм (желательно без конированную поез шприца). В силиГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИРЕАКЦИИ ВЫСВОБОЖДЕНИЯ ТРОМБОЦИТОВ(57) Изобретение относится к медицине, вчастности к исследованию гемостаза, и моИзобретение относитсяименно к гемостазу, и можетвано для исследования фусостояния тромбоцитов пртромбоцитопатий.тромбозомов, системных васкулитов, ф ративных заболеваний.Цель изобретения - ускорение и расширение информативности способа путем выявления нарушений функционального состояния тромбоцитов,Способ осуществляют следующим ображет быть использовано для исследования функциональной активности тромбоцитов. Целью изобретения является ускорение и расширение информативности способа за счет выявления нарушений функционального состояния тромбоцитов, Способ осуществляется путем охлаждения плазмы в течение 45 мин с последующим центрифугированием при 3000 об/мин в течение 5 - .7 мин. По отношению произведения количества тромбоцитов в 1 мм плазмы здорового на коэффициент экстинкции больного к произведению количества тромбоцитов в 1 мм больного на коэффициент экстинкции здорового расчитывают степень агрегэции тромбоцитов,конированную пробирку предварительно наливают стабилизатор 3,8-ный раствор цитрата натрия) 1 мл, набирают кровь до + метки 10 мл и аккуратным покачиванием О перемешивают со стабилизатором. Богатую тромбоцитами плазму получают центрифугированием в течение 5 мин при 1000 об/мин на центрифуге ЗУХЛ 4.2 ОПн (больных эритремией с гематокри-ф том свыше 0,55 л/л - в течение 10 ф мин при 1500 об/мин). Беруте центри Вай фужные пробирки (пластиковые) по 0,5 мл богатой тромбоцитами плазмы больного и здорового человека (контроль), предварительно определив количество тромбоцитов в 1 мм плазмы, и ставят при температуре + 4 С в холодильную камеру на 45 мин. После этого плазму цен 1649447трифугируют и ри 3000 об/мин на центрифуге ЗУХЛ 4,2 ОПн в течение 5-7 мин. Затем к0,8 мл богатой тромбоцитами плазме здорового человека добавляют 0,4 мл полученнойпри центрифугировании исследуемой плазмы больного и определяют оптическуюплотность смеси (ОП 1) на фотоэлектрокалориметре КФК-УХЛ 4.2, Затем плазму перемешивают на магнитной мешалке ММ 3 Мпри 600 об/мин в течение 3 мин и вновьопоеделяют оптическую плотность смеси(ОП 2), Коэффициент экстинкции рассчитываОП 1 - ОП 2ют по Формуле -- Кб . Затем исследование повторяют с охлажденнойи отцентрифугированной плазмой здоровогочеловека (контроль) и рассчитывают коэфОП 1 - ОП 2фициент экстинкции КкПолученные значения подставльчот в ФорТК Кбмулу 100 оь и сравнивают с норТбКкмой, составляющей 70 - 120 О/ Е слиполученный результат больше 12 ОО/О, то убольного реакция высвобождения тромбоцитов повышена, если менее 70 О/ь, то - снижена,Расширение возможностей предлагаемого способа заключается в том, что в отличие от способа-прототипа он выявляетснижение и отсутствие реакции высвобождения тромбоцитов, которые встречаются убольных с кровоточивостью и включены вбольшую группу тромбоцитопатий.В таблице приведены результаты сравнительного анализа данных реакции высвобождения тромбоцитов по способу-прототипу ипредлагаемому способу.Способ-прототип не выявляет нарушений функционального состояния тромбоцитов, сопровождающихся снижением илиотсутствием реакции высвобождения тромбоцитов(исследования 3, 5, 7),По способу-прототипу у здоровых людей (контроль) спонтанной индуцированнойхолодом реакции высвобождения тромбоцитов не происходит, причем 0-2 О, - ошибка метода за счет разрешающейвозможности фотоэлектрокалориметра.Способ-прототип выявляет олько повышение реакции высвобождения (исследования 2, 4), По данным предлагаемогоспособа размах показателей в этих исследованиях более значительный.Обоснование параметров способа,Одно центрифугирование без охлаждения реакции высвобождения тромбоцитовне вызывает. Сочетание охлаждения и центрифугирования по сравнению с прототи и при снижении и отсутствии реакции вы свобождения. Сочетание охлаждения продолж ител ь ностыб более 45 мин 10 15 20 25 30 40 45 50 55 пом вызвало более выраженную реакцию высвобождения тромбоцитов, что позволило давать оценку не только при усилении, но продолжительностью с центрифугированием продолжительностью более 7 мин на результаты исследования не влияло. Охлаждение менее 45 мин с центрифугированием менее 5 мин вызывали недостаточную реакцию высвобождения тромбоцитов. Режим центрифугирования 3000 об/минвыбран с целью осаждения тромбоцитов и ихагрегатов после охлаждения богатой тромбоцитами плазмы, Центрифугирование при менее 3000 об/мин в течение 5 - 7 миндостаточного осаждения .тромбоцитов недает и плазма остается богатой тромбоцитами, что искажает конечный результат опыта,При центрифугировании более 3000 об/минохлажденные тромбоциты подвергаютсяразрушению, что приводит к значителтнойошибке предлагаемого метода.Статистические данные определениянормы для реакции высвобождения тромбоцитов,Количество случаев и = 50.х - х, х = 25 =965и50Ха 1 э 7П 3 - =- =19,5, где а=Х - Хп - 1 49 Х +/и =96,5+19,5 иди 77-116/ Авторами расширены пределы границ нормы за счет включения в них несущественных отклонений от 70 - 77 и от 116 - 120/.П р и м е р 1. Больной Г., 30 лет, поступил на обследование по поводу частых носовых кровотечений неясного генеза. Больному по описанной методике проведена количественная оценка реакции высвобождения тромбоцитов. Оптическая плотность 1 (ОП 1) оказалась равной 0,53, оптическая плотность 2 (ОП 2) 0,48, Оптическая плотность 1 на контроле (плазма здорового человека) равна 0,54, оптическая плотность 2 0,27. По формулеОП 1 - ОП 2ОП 1вычислены коэффициенты зкстинкции, которые у больного оказались равными 0,09, на контроле 0,5, Определено количество тромбоцитов в плазме больного и здорового, Количество тромбоцитов в плазме больного оказалось равным 213 109/л, здорового 305 10 /л. Эти значения под 9ставлены в формулу1649447 Результатпо способуи ототип Заключение Заключение Плазмабольных Результат по предлагаемом способ Ми/и 0% 10% 92% 150% З.С.О.Н. Норма Повышение Резкое снижение Резкое повышение Отсутствие Умеренное повышение,Умеренное снижениеНорма Но а 138% С,А,б 4 100 , 100 =25 КК Т 5 05 213Полученный результат позволил поставить диагноз: тромбоцитопатия с нарушением реакции высвобождения, объяснивший и ричину кровоточивости у данного больного,П р и м е р 2, Больной Л,З. поступил в краевой гематологический центр с частыми носовыми кровотечениями, синячковостью. Обследован в лаборатории гемостаза, Нарушений в свертывающей системе крови, а также нарушений агрегационной, адгеэивной функций не обнаружено. Патология в системе гемостаэа найдена только при использовании предлагаемого способа, Реакция высвобождения тромбоцитов составила 30%, что является резким снижением по сравнению с нормой (70 - 120%), Это позволило обьяснить причину кровоточивости у данного больного.П р и м е р 3. Больной А.Б. Диагноз; тромбоз глубоких вен голени. В свертывающей системе гемостаза выявлены незначительные нарушения. При исследовании функционального состояния тромбоцитов выявлено нерезкое повышение агрегационной функции тромбоцитов и резкое повышение реакции высвобождения тромбоцитов - 407% (норма 70 - 120%), что позволило найти звено в системе гемостаза, требующее певоочередной медикаментозной коррекции,П р и м е р 4. Больной О.М. Диагноз; острый миелобластный лейкоз (миелопролиферативное заболевание),У больного на фоне основного заболевания выявлены признаки тромбоваскулита. При обследовании реакция высвобождения тромбоцитов составила 150% норма 70120%), что подтвердило диагноз тромбоваскулита при данном заболевании и позволило провести соответствующее лечение,Изобретение позволяет оценить состояние5 тромбоцитов при тромбозах, ДВС-синдромах,системных васкулитах, миепопролиферативныхзаболеваниях, диагносцировать группу тромбоцитопатий, связанных с нарушением реакциивысвобождения, сократить время определения10 до 45 мин по сравнению с прототипом(2 ч),Способ может быть воспроизведен влюбой гемокоагулокологической лаборатории,15 Формула изобретенияСпособ количественной реакции высвобождения тромбоцитов путем получения обогащенной тромбоцитами плазмы больного и здорового человека, определения ко личества тромбоцитов в 1 мм плазмы,охлаждения полученных плазм при температуре+4 С, смешивания с неохлажденной обогащенной тромбоцитами плазмой здорового, измерения их оптической плотности 25 и расчета, отл и ч а ю щи йс я тем, что, сцелью ускорения и расширения информативности способа за счет выявления нарушений. функционального состояния тромбоцитов, охлаждение плазмы осущест вляют в течение 45 мин с последующим центрифугированием при 3000 об/мин в течение 5 - 7 мин и после измерения оптической плотности по отношению количества тромбоцитов в 1 мм плазмы здорового на 35 коэффициент экстинкции больного к произведению количества тромбоцитов в 1 мм больного на коэффициент экстинкции здорового, рассчитывают степень агрегации тромбоцитов.40