Способ получения l-лизина

(9) 0 51)5 С 12 Р 13/08 ОПИСАН ИЗОБ ЕТЕН АВТОРСКОМУ С ТЕЛЬСТВУ Изобретение отн ии и касается получе рганизмов незамен изина, который мож животноводстве для ов. Целью и ие выхода косится к б ия с помо мой амино т быть исп балансира иотехнолощью микро- кислоты ользован в ания корзобретен онечного я являетспродукта. велич Хсмол сланцевой ны подфракции, й смолы, выкипа- С. Низкокипящаяноатомными фе(более 320 С) - поэтому их не исмулятора. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Ленинградский технологический институт им.Ленсовета и Научно-исследовательский институт сланцев(56) Авторское свидетельство СССР М 975800, кл. С 12 Р 13/04, 1980.Авторское свидетельство СССР В 1157060, кл, С 12 Р 13/06, 1983. Способ заключается в следующем,Штамм бактерий ВгечЬастегив НачавЕкультивируют в условиях аэрированияв жидкой. питательной среде, содержащейассимилируемые источники углерода, азота,. минеральные соли и биостимулятор, В качестве биостимулятора используют сланцевую генераторную смолу, получаемую изкукерсита, или отдельные ее узкие фракциис пределами кипения 260 - 320 С,Основные этапы технологического процесса, ведущие к получению фракций сланцевой смолы, используемой в качестве(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ Е-ЛИЗИНА (57) Изобретение относится к биотехнологии и касается получения с помощью микроорганизмов незаменимой аминокислоты - лизина, который может быть использован для балансирования кормов в животноводстве. Целью изобретения является увеличение выхода конечного продукта. Способ заключается во введении в среду для ферментации -лизина штаммом В генЬастег цт Яачап Ев качестве биостимулятора обесфеноленной фракции генераторной,сланцевой смалй с пределами кипения 260-320 С в концентрации 0,0005- 0,005 мас,6. Выход лизина повышается на 256. 4 табл. стимулятора, следующие: полукоксование органической части сланца (керогена) при 430-470 С, обесфеноливание продукта полукоксования (средней части генераторной сланцевой смолы) 10-ным раствором йаНСОз при соотношении раствор: смола:1, сушка обесфеноленной сланцевой смолы сульфатом натрия, ректификация обесфеноленной сланцевой смолы на широкие фракции с температурой кипения 210- 370 С (табл.1), которые производятся в промышленности. арактеристика фракы приведена в табл,3,Для испытания выбраполученные ректификациеющей в пределах 230-320часть смолыы обогащена однолами, а высококипящаяпроизводными антрацена,пользуют в качестве биостиФракция 230-320 С обесфенолена раствором бикарбоната натрия (10), а затем подвергнута ректификации.Особенностью сланцевых смол является то, что даже использование ректификационной колонны с высокой разделяющей способностью не позволяет полностью отделить легкокипящие компоненты от высококипящих. Полученные подфракции испытывают как биостимуляторы.Для выявления биологически активного начала названных фракций их смешивают пропорционально выходам и из суммарной фракции 260-320 С выделяют водно-спиртовой экстракцией нейтральные кислородные соединения (НКС). В сланцевой смоле методами газожидкостной хроматографии, инфракрасной спектроскопии, ядерного магнитного резонанса и масс-спектрометрии идентифицировано свышв 420 соединений, которые представлвны следующими классами: парафины нормального строения, изопарафины, циклоалканы, олефины нормального и разаетвленногостроения, циклоалквны,диеновые углеводороды, ароматические Фенолы и эфиры, карбонильные соединения, спирты, альдегиды, эфиры кислот.Ароматические углеводороды представлены такими соединениями,. как индены, флуорены, цимол, хриэен, пирен, оксибензофураны и др. Нвйтральныв кислородные соединения представлены этилметилалкилквтонами, непредельными кетонами, алкильнымм производными циклопентанона, спиртами с числом углеродных атомов 3-4, альдегидами (С 1-Са), кислотами (С 1-Са) и ДРОптимальными кжтрациями указанных стимуляторов, прн которых достигается наибольший выход лизина, являются 0,0005-0,005 мас При увеличении концентрации свыше 6,01наблюдается ингибирование биосинтез, при уменьшении концентрации ниже 0,900 Щ стимулирующего эффекта не наблюдается,(табл.2-4).Абсолютныв количества вводимых в среду биостимуляторов в табл.2-4 приведены в виде массовых щацентов от 0,01 до 0,0001, что составляет соответственно от 0,1 до 0,001 г смол и 1 л Ферментационной среды.Влияние концентрации фракции ОС-И на выход лизина представлено в табл.2.Влияйие концентрации Фракции ОСП на выход лизина представлено в табл,З,Влияние концентрации нейтральныхкислородных соединений на выход лизинапредставлено в табл.4.П р и м е р 1. Односуточную культуру В.5 Лечив Е, выращенную на сусло-гара,переносят на жидкую Фрементационнуюсреду следующего состава, мас, : меласса. 10,0 (по РВ); гидролизат БВК 6,0; (МНа)280 а2,0; К 2 НРОа 0,05; КН 2 Р 04 0,05; МдЗОах10 х 7 Нг 02,0; СаСОз 1,0: биостимулятор - Фракция ОС-Н 0,005, при рН 7,8.,Ферментецию проводят при 30-32 С втечение 72 ч в колбах с обьемом среды 20 млна качалке (220 об/мин).15 Выход лизина 34,1 г/л.Выход лизина при выращиванииВ, Яачце Ев тех же условиях, но бездобавления биостимулятора (контроль) 27,5г/л,20 П р и м е р 2. Штамм В. Пачоа Е. выращивают в условиях примера 1. В качестве стимулятора добавляют фракцию ОС-П 1в концентрации 0,001 мас, .Выходлизина 40,0 г/л(в контроле 35,6.г/л).25 П р и м е р 3, Штамм 8.6 чае Евыращивают в условиях примера 1, В качестве стимулятора используют нейтральныекислородныв соединения стемпературой кипения 260-320 фС в концентрации 0,0005 мас,30 Выход лизина 45,0 г/л (в контроле36,0 г/л).Предлагаемый способ позволяет существенно увеличить выход лизина за счет использования дешевого и недефицитного35 сырья - сланцевой смолы и отдельных евфракций.Форйула изобретенияСпособ получения -лизина, предусмат 40 риваюврюй культивирование штамма бактерий ВгеФЬсегЬа Пачце Ев условияхаэрации в питательной среде, содержащеймелессу, аммонийный азот, гидролизатБВК; фосфаты, ионы магния, кальция и био 45 стимулятор, до максимального накопленияцелевого продукта с последующим его выделением, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью повышения выхода конечного продукта; в качестве биостимулятора использу 50 ют обесфвноленную фракцию генераторнойсланцевой смолы с пределами кипения 250320 С в концентрации 0,0005-0,05 мас.или нейтральные кислородные соединения,выделенные водно-спиртовой экстрацией55 из Фракций генераторной сланцевой смолыс пределами кипения 260-320 С в концентрации 0,0005-0,005 мас. ,