Способ определения степени дестабилизации мембран эритроцитов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 8036 1 М 21/ОО ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Изобретеа именно к кл я.к медицине, раторной диаг- состояния е относ инико-л= 493 нм. бразСтепень поляризации светаом рассчитывали по формуле 1 о - 1 о/9 РЯ - .тТо То/9 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ 1(71) Ярославский государственныймедицинский институт(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИДЕСТАБИЛИЗАЦИИ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ(57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для ностике функциональногомембран эритроцитов.Цель изобретения - повышение чувствительности способа путем приготовления образца суспензии мембран иссле дуемых эритроцитов в изотоническом растворе, с последующим спектрофлюориметрическим измерением при длине волны возбуждения= 493 нм степени поляризации (Р 9) неполяризованного света, проходящего через образец, и степени фоновой деполяризации образ - ца ИРЯ) при пропускании через него поляризованного света, причем о степени дестабилизации мембран исследуемых эритроцитов судят по увеличению (в 7 по отношению к норме) отношения Р/ЙР 9, которое в условиях физиологической нормы равно 3,623+0,070 относительных единиц.П р и м е р 1. У больной с разлитым перитонитом была взята кровь определения степени дестабилизациимембран эритроцитов. Цель изобретения - повышение чувствительности спбсоба. Это достигается путем спектрофлюориметрического измерения степени поляризации неполяризованного света при прохождении его через образецсуспензия мембран исследуемых эритроцитов и степени фоновой деполяризацииполяризованного света тем же образом.О степени дестабилизации мембран эритроцитов судят по увеличению относительно нормы величины отношения первого показателя к второму, 3 табл. до и после лечения с применением гипербарической оксигенации (ГБО), Суснензию мембран эритроцитов (теней Сю эритроцитов) в иэотоническом растворе готовили стандартным методом. Каждый образец суспензии помещали в кювету спектрофлюориметра и обпучали сначала неполяризованным.светом.Измеряли интенсивность поляризованного излучения выбранной волны, прошедшего через образец (поляризационная призма помещается после образца), Выбор длины волны воз" буждения в видимой области (380- 760 нм), Максимум интенсивности поляризованного излучения наблюдается при длине волны возбуждения ЯЪфгде Р Ъ - степень поляризации на длине волны Я ( Я = 493 нм);1 - интенсивность излучения нао,длине волны 9 = 493 нм,когда оба поляризатора установлены на нулевом делении;1 /90 - интенсивность излучения наодлине волны= 493 нм,когда поляризатор возбуждаю.щего монохроматора установлен на нулевом делении, аэмиссионный монохроматорна 90-ом делении,Затем, помещая поляризационную 5призму перед образцом и пропуская через образец поляризованный свет, втом же образце измеряли степень фоновой деполяризации.Степень деполяризации света образцом рассчитывали по формуле1 а/90ЙРф1 о 25где ЙР ф - степень деполяризацииизлучения на длине волны= 493 нм;1, /90 - интенсивность излученияна длине волны ф= 493 нм, когда поляризатор возбужцающего монохроматора установлен на 90-омделении, а эмиссионный монохроматор на нулевом делении. 35После этого рассчитывали показатель .анизотропии мембран - отношениеР/ЙРЯ, характеризующее степень дестабилизации мембран в исследуемом образце. 40Величина показателя Р/ЙР в условиях физиологической нормы, котораябыла предварительно определена у группы доноров (и = 10), варьировала впределах 3,623+0,070 относительных 45единиц (пример 2),1Степень дестабилизации мембранэритроцитов рассчитывали как приростртношения РЯ/ЙРв исследуемом образце, выраженный в 7. по отношению к.50этому показателю в норме.Полученные результаты представлены в табл.1,Таким образом, на основании использования предлагаемого способа установлено: течение разлитого перитонита характеризуется сильным воз.растанием величины анизотропии(Р/ЙР 4) эритроцитарной мембраны,т.е. ее дестабилизацией. Позитивное влияние лечения с применением ГБО приводит к относительному снижению показателя анизотропии мембран эритроцитов в сторону нормальных значений и к соответствующему снижению степени дестабилизации этих мембран.П р и м е р 2. Показатели анизотропии эритроцитарных мембран были измерены предложенным способом, как описано в примере 1, у большой группы больных с перитонитом разной степени распространенности и тяжести и у группы здоровых доноров.Полученные результаты приведены в табл.2 и 3 и демонстрируют высокую чувствительность способа.Сравниение предлагаемого поляризационного метода определения степени дестабилизации мембран эритроцитов с известным методом было проведено у семи больных в возрасте 29 - 64 лет с различной нозологией, стадией процесса и тяжестью состояния.Контрольная группа состояла из трех доноров для известного способа и десять доноров для поляризационного способа.Использование поляризационного метода позволило выявить степень повреждения эритроцитов у обследованных больных в несколько иной последовательности по сравнению с из вестным методом. В частности известный метод дает одинаковые величины повреждения эритроцитов у трех больных (степень дестабилизации 5,487), сильно отличающихся по клиническим проявлениям.Применение поляризационного метода позволило выявить принципиальные отличия степени повреждения эритроцитов у этих больных, которые хорошо коррелировали с общей выраженностью патологического процесса (степень дестабилизации 44,187., 11,837. и 1,927).Таким образом, предлагаемый поляризационный способ определения степени дестабилизации мембран эритроцитов обладает более высокой чувствительностью по сравнению с известным способом.5 16367316ф о р м у л а и з о б р е т е н и я же образец пропускают поляризованныйСпособ определения степени деста- свет и определяют степень фоновой дебилизации мембран эритроцитов путем поляризации образца при длине волны исследования их биофизических свойств возбуждения 493 нм, далее рассчитьг о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, вают отношение первого показателя с целью повышения чувствительности ко второму и при увеличении этого способа, исследуют образец суспен- отношения по сравнению с фиэиологичесэии мембран эритроцитов в изотоничес- кой нормой, составляющей 3,623+ ком растворе, пропускают через него 12 42,272 относительных единиц, определянеполяризованный свет и определяют ют степень дестабилизации мембран степень поляризации, затем через тот эритроцитов,Таблица Измеряемые интенсивности излучения (= 493 нм), относительные единицы Степень дестабилизации мембран Образец суспензии мембранэритроцитов 4,35 2,62 0.52 2,794 0,137 5,82 62,2 До. лечения После леченияГБО 4,62 2,80 2.42 2,842 2,174 4,83 33,4 Таблица 2 По распространенности перитонита Контрольная группа (п=12) ПокаГруппа)2,05 с 2.25 Таблица 3 И+ш Уровень зна- Степень дестабнлизации 13 чимости,р Фаза заболевания Реактивная 3,77 Ю,12 Ъ 0,25 3,4-9,2