Способ выделения монолиний м-вируса картофеля

СООЭ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИстИЧЕСКИКРЕСПУБЛИК 2 Г 17 51) ИСАНИ ТОРСКОМУ ИЭОБР ДЕТЕЛЬСТВ наммМи табл,области ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ .И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Украинский научно-исследовательский институт сельскохозяйствной микробиологии(56) Амбросов А,Л Блоцкая И.В,Идентификация и исследование штмозаичных вирусов картофеля.Ураджай, 1979, с. 7,Изобретение относится к фитовирусологии.Целью изобретения является получение монолиний М-вируса картофеля.П р и м е р 1. Проводят исследования с целью выбора растения-индикатора, реагирующего наиболее устой- чино некротической реакцией на заражение М-вирусом картофеляи оптимальных условий для проявления локальной реакции;Опыты проводят в контролируемых условиях температуры и освещенности: в теплице (зимне-весенний период) резкие колебания температуры от 10 до 50 С и освещенности от 5000 до 20000 лк, в климатической камере при длительности светового дня 16 ч, температуре 25 С и освещенности 15000 лк в вегетационной камере при длительности освещения 16 ч, температуре 18-25 С, освещенности 2500 лк. 801565886 А 1(57) Изобретение относится к Фитовирусологии. Целью изобретения является получение монолиний М-вируса картофеля. Укаэанная цель достигаетсяиспользованием в качестве растенияиндикатора мари стенной, на листьяхкоторой производят 2-3-кратное пассирование изолятов, После этого заражают от некроза растения томатасорта Петито для накопления вируса.Полученные при этом популяции вирусов отличаются по патогенности. Растения-индикаторы заражают механически. Для приготовления инокул 1 омаиспользуют листья растений картофеляи томатов, инфицированных выделенными в природе изолятами М-вируса картофеля. Листья пораженных растенийрастирают в фарфоровой ступке с добавлением буферного раствора в пропорции 1: 1-1.3. Используют фосфатный0,1 М, рН 7,2-7,5, и цитратный 0,1 МрН 7,2-7,5 буферные растворы; приотсутствии положительной реакции наотдельных видах растений-индикаторов используют также цитратныйО, 1 М, рН 9,0, МН-глициновый О, 1 Г 1,рН 7, 2-7,5 и трис-НС 1 О, 1 М, рН 7, 27,2 буферные растворы, Растения-индикаторы заражают в фазе развития,оптимальной для проявления М-вирусакартофеля,Резульиндикатор таты заражения растенииов представлены в таблице,Результаты проведенных опытов посазывают, что локальная реакция при заражении различнымн изолятами М-виуса картофеля проявляется на ряде растений-индикаторов, но наиболее устойчиво на мари стенной (СЬепоройюш шога 1 е Ь). На инокулированных листьях мари через 18-25 дней после заражения появляются желтые пятна, затем некротизирукщиеся в центре. Наиболее четкие некрозы на листьяхари стенной получали, заражая растения в фазе бутониэации, удаляя перед йнокуляцией их верхушку, Причем реак,ция на большинство испытанных изоля,тов М-вируса картофеля получена на. растениях мари стенной в условиях ,вегетационной камеры.Таким образом, из всех испытанных тест-растений марь стенная наиболее стабильно реагирует локальной реак цией на заражение исследуемыми изолятами М-вируса картофеля, и наиболее оптимальными для проявления этой реакции являются условия вегетационной камеры.П р и м е р 2Изучают возможность пассирования М-вируса через некроз с целью получения монолиний вируса при выделении штаммов,Участок некроза на листе растения-индикатора вырезают пробойником с диаметром 3 мм, растирают в микро- ,ступке с добавлением буферного раствора, полученную суспензию наносят на опудренные карборувдом листья растения-индикатора или растения-нако,пителя с помощью пипетки и растирают по поверхности листа поролоновым .тампоном, увлажненным буферным растворомВ работе используют изоляты М-вируса картофеля и растения-индикаторы, проявившие в первой серии опытов (пример 1) локальную реакцию." вигна, табак Дебнея, гомфрена головчатая, дурман индийский, марь белая, марьиропоФ о а изобре я Способ выделения монолиний М- са картофеля, включакщий пассиро через некроз на листьях растения дикатора с последующим заражени растения-накопителя, о т л и ч а щ и й с я тем, что, с целью полу ния монолиний И-вируса картофеля в качестве растения-индикатора и пользуют марь стенную (СЬепорой шига 1 е Е), а в качестве растения накопителя - томат сорта Ре 11 Со виру а е-им е Киноа, марь стенная, Для накопления вируса заражают растения, томата сорта Петито в стадии 1-2 настоящих листьев. Пассирование на определенном тест-растении проводят в тех условиях, которые наиболее способствовали проявлению локальной реакции на этом растении.Устойчивое пассирование через некроз (3-8-кратное и более), а также успешная передача способом механичес кой инокуляции на растение-накопител исследованных иэолятов И-вируса картофеля получены только на растениях мари стенной (СЕепоройыш пага 1 е Ь).На всех остальных растениях-индикато рах ни в одном случае не получено заражения от некроза.П р и м е р 3, 3-Кратное пассванне через некроз на листьях СЬе ройки пшта 1 е Ь в условиях вегетационной камеры и последующее заражение от некроза растений томата сорта РеюСо для накопления вируса позволя ет выделить штамм И-вируса картофеля из природных иэолятов этого вируса, используемых в дальнейшей работе: М- слабопатогенный (вакционный) В 17 ВИЗР, И- сильнопатогенный, для оценки вирусоустойчивости селекционного материала, Р 1 ц ВИЗР; М- иммуногенный, для производства диагностической сыворотки к М-вирусу кар тофеля, У 16 ВИЗР.351565886 Проявление локальной реакции при выращивании Растения-индикаторы В теплице В климатической В вегетационнойкамере камереКоличество изолятов И-вируса картофеля, вызвавших локальную реакциюна растении-индикаторе.Количество исследованных изолятов И-вируса картофеля. Составитель С.СветльппевРедактор О.Юрковецкая Техред И.Дидык Корректор Э,Лончакова Заказ 1199 Тирах 477ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж; Раушская наб., д, 4/5 Производственно-издательский комбинат фПатент", г,ужгород, ул. Гагарина,01 Чарда е 1 пепз.зРпазео 1 цв чц 18 аг 1 зМсогдапа деЪпеудПагцга шеге 1Сошр 1 гепа 81 оЬозаСпепорой 1 цш а 1 ЬцшСЬепоройдцп цц 1 поаСЬепороддцш шцга 1 е Оф/59 Яф О/52 10/31 29/59 9/15 3/1 О 3/35 53/59