Способ определения пирогенности препаратов для инъекций

. (51)4 С 0 21/64 ОМИТЕТОчнРитиям ГОСУДАРСТВЕНН по изОБРетени ПРИ 1 ннт ссОР ЬСТВУ 41Ерошевск елвство ССС 33/48 1980 ьство СССР 33/18) 1979 воначально изучаюнций указанных пирволны возбуждениямые растворы пироирогенной дистиллирьно иа апирогенньстворах". 09-номхлорида и 5 Х-ном сп енов при 60 нм. Ис"рес сле на енов готовят ованной воде отдел х инъекц растворе растворе ных ра натрия козы. Сп(56) Авторское свидеВ 913255, кл. С 01 0Авторское свидетелФ 663380, кл. С 01 Н Изобретение относится к техникеопределения пирогенности воды и растворов для инъекций и может. быть использовано в Фармацевтической промышленности, а также в аптеках приконтроле качества лекарственныхсредств,Цель изобретения - расширениекруга анализируемых объектов, повышение чувствительности определенияза счет исключения влияния на результаты анализа источника происхождения цнрогенов и ускорение анализа.В качестве источника пирогеновиспользуют отечественные стандартыпирогенности (продигиозан и пирогенал), липополисахарнды, выделенныеиз Б. огапхепЬиг 8, Б. апйегзс,Б. йурЬу 4446, Б. еурЬу 0901, Б, аЬогВо-е 1 пхпа, Б. Боппе 6747, Б. Р 1 ехаегх 4 ф н пирогенообразующнй микроорганизм Б. аагсевсепз. 20407 А 1(57) Изобретение относится к техникеопределения пирогенности воды и растворов для инъекций. Цела изобрете"ния - ускорение, повышение чувствительности прирасширении диапазона исследуемых объектов. Определение проводят по величине интегральной интенсивности собственной Флюоресценциианализируемой пробы в пределах длинволн 310-400 нм. 1 табл. ектры 4 евворесценции всех изученных пирогенов характеризуются широки- ми полосами в пределах 310 - 400 нм с одним максимумом, находящимся в зависимости от вида пирогена и его концентрации в пределах 236 - 340 нм. Интенсивность 4 цтюоресценции во всех случаях прямо пропорциональна концентрации пирогенов.Таким образом, на примере десяти различных пирогенов выявлено, что явление Фшооресцендии в пределах 310 - 400 нм является общим свойством бак 1520407териальных пирогенон, выделенных из разных культур микроорганизмов, а интенсивность флюоресценции может служит мерой содержания пирогенов н. испытуемой воде или растворе.П р и м е р. Испытуемую дистилли" ронанную воду (растнор для инъекций) помещают н кювету с толщиной слоя жидкости 1 см с помощью апектрофлюориметра ИПФс термостатируемой ячейкой записывают спектр фгнооресценции " и пределах длин волн 310 400 нм. Длину волн возбуждения устанавливают 260 нм, чувствительность усилителя - 10,0, щель монохроматора возбуждения - 20 нм, щель монохроматора эмиссии - 10 нм, скоростьсканиронания - ЬО нм/мин. Затем, используя микропроцессор МПФ, находят интегральную интенсивность флюоресценции.Параллельно проводят контрольный опыт с заведомо апирогенной дистиллированной водой (раствор для инъекций) .Дистиллированную воду (раствор для инъекций) считают нирогенной, если величина интегральной интеисивностч флюоресценции испытуемого образца превышает величину интегральной интенсивности люресценцви контрольного образца более чем в 3 раза.Необходимость вычисления интегральной интенсивности флюоресцеиции в пределах длин нолй 31 О 400 нм обусловлена тем, что флюоресценция пирогенов характеризуется широкими полосами н ука; эанном диапазоне. Причем и зази" симости от происхождения бактериальных нирогеноц и их концентрации в испытуемом растворе местонахождение максимума люоресценции может изменяться. Поэтому оценка пирогеиности анализируемого образца но вейцчине флюоресценции при какой-либо фиксированной длине волны приводит к значительной ошибке, В то же время использование интегральной интенсивности позволяет определять содержание пирогенов. не зависимо от их про" исхождения и концентрации. Ускорение способа обусловлен. исключением одной иэ стадий анализа, а именно приготовлением и введением реактива - родамина ЬЖ, что приводит к сокращению продолжительности анализа с 20 до 5 мин., т.е. н 4 раза.Данные анализа растворов продиги- озана различной концентрации предс-.: тавлены н таблице.Как видно из таблицы, с помощью предлагаемого способа можно с достаточной точностью определить продигиоэан н водном растворе в концентрации более чем н 3000 раз ниже концентра-,ции, вызывающей пирогенную реакцию(минимальная концентрация продигиоэана, вызывающая пирогенную реакцию, составляет 5 10 г/мл), Чувствитель- ность предлагаемого способа по нродигиоэану не превышает 1,6 10г/мл, по пирогеналу - 1,0 10 г/мл, что н 10-100 раэ вьппе, чем у известного.Таким образом, предлагаемый способ определения пирогенности воды и растворов для инъекций чувствительнее известного н 10-100 раз, быстрее в 4 раза, .точнее и дает возможность расширить диапазон исследуемых объектов, позволяя правильно оценить пирогенность не только дистиллированной воды, но и растворов для инъекций.Формула из обретенияСпособ определения пирогенности препаратов для инъекций, включающий облучение пробы возбуждающим излучением, регистрацию интенсивности Флюоресценцни и определение пирогенности воды, о тл ич ающи йс я тем, что,с целью расширения круга анализируемых объектов, поньппения чувствительности определения за счет исключения влияния ча результаты анализа источника происхождения пирогенов и ускорения анализа, определение пирогенности проводят но величине интегральнойинтенсивности собственной Флюоресценции бактериальных пирогенов в интервале длин волн 310 - 400 нм.1520407 Концентрация продигиозанаг/мл Интегральнаяинтенсивность Концентрация.продигиозанаг/мл Интегральнаяинтенсивностьфлюоресценции юоресценции Составитель О, БадтиеваРедактор Н.Лазаренко Техред Л,Олийнык Корректор Л.Па Заказ 6749/44 ВНИИПИ Государ Подписное тениям и открытиям при ГКНТ СССР ская наб., д. 4/5 енног 13035 комитета по иэо Москва, Ж, Р онзводственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина 10