Инвертированный микроскоп-фотометр

.87 товышение ий. Цель ар 985. рм ТО тометсле та нияировании. 1 ип.1 б ф- ,сз М ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИПРИ ГКНТ СССР К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) Инвертированный микроскоп фот фирмы И 11 соп, Япония, Катало мь 1111 соп, 8376-02 КЕС 503-10/4,Инвертированный микроскоп 1 405 фирмы Орсоп, ФРГ, Каталог ф Орсоп Ы-Н-Ч/84 11"00, 1985.(57) Изобретение относится к фо рии и предназначено для биотехн гии и медицины, а именно для ис дования клеток культур тканей, же взвесей клеток, Цель изобрети роиз водитль ос .:. .змг и -достигается тем, ч гои - Вгртровснный микроскоп Г(церждги гобственно микроскоп, каниругяи предметный стол г объектом, г иг гс му рстрации флуорс гцс ниии, с игу фоторафировдния, ввгдсы двд гм ных гнетоделителя 12 и 13, игны 14 и зеркдло 18, выпс.нсзнные с во ь - ногтыо ввода-вывода из хсд; .уюг,зсирсншие светофильтры 1520. Схемд позволяет проводить одопрев мс иную рс 1 гистрдцикэ интгнгиьчггт флуоресценции клеток в ячейкдх гпецидльных планшет в двух облдст ях спектра и, кроме того, испоь" 1 в,ь 1 , фотоприемник 17 в качестве д;,тчикд сигнала погучения оптимальной выдержки при автоматическом фотогрд -на к а. гин днил 45 50 Изобретение относится к фотометрип и предназначено для исследования клеток культур тканей, а также нзве - сей клеток н специальной посуде, и может бьть использовано при производстве приборов для биотехнологии, медицины и биологии.Пель изобретения - повьпзение производительности измерений интенсив -ности флуоресценции объектов.На чертеже представлена принципидльная оптическая схема инвертированного микроскопа-фотометрд,Инвертированнын микроскоп-фотометр содержит источник света - ртут -ную лампу (ПГШ-2) 1, коллектор 2,тенлсздшптный светофильтр 3, узкопо -лосный гвозбуждаюший светофильтр 4,ннтерференцпошсьд светоделитель 5,микрос,бъектив 6, объект 7, запираю 1щий светофильтр 8, призму 9, окуляр 1 О, мдсштдбную сетку 11, сменныесветоделителн 12 и 13, переключаемуюлинзу 14,здпирдюгций светофильтр 15,диафрагму 16, фотоумножитель 17, зеркало 18, сигнзу 19, запирающий снето -фильтр 20, фотоумножитель 21, окуляр22, электромагнитный затвор 23, фотоаппарат 24, кснпенсор 25, ирисовуюдидфрдг.гу 26, кс 1 гвектор 27, лампу 28 Излучение ог рт,тной лампы 1, прошедшее через коллектор 2, теплозащитный снс.тофпльтр 3, узкополосный светофильтр 4, отразившись от интерференпионнс,го свстсделителя 5, микро - объективом 6 гс 1 бпрдется на объекте 7 и возбуждает его флуорес.ценцию. Изображение прег.дрдтд тем же микрообьек - тином через дпирдющий светофильтр 8 при введенной н ход лучей призме 9 и окуляром 10 с сеткой 1 получается на сетчатке глдзд наблюдателя. При вынеденнсй пэ хоцд лучеи призме 9 световой по гок Флуоресцечции с помо - шью ипторференцпонно о светодслителя 12 разделяется на двд потока, один из которых с помощью линзы 14, запнрдю - щего светзфиль грд 15 и диафрагмы 16 попадает на Фотоумножитель ФЗУ 1 17; друг 1 й - при выведенном из хс 1 дд. лу - чей зеркале 18 с помощью линзы 19 через здпирдзший с ветофипьтр 20 попадает нд второй с 3 21, Прн внеленном в ход лучей : оркдс 1 е 8 изсбрджение объск та оку"1 2 при с 1 ткрытом элс кгрсмд 1 нп 1 н 1 м здтв рс 23 с оздает" 10 15 20 25 30 35 40 ся н плоскости фотопленки фотоаппдра 1та 24. Система освещения объекта в проходящем свете состоит из конденсора 25, полевой диафрагмы 26, коллектора 27, лампы 28 накаливания.При измерении интенсивности флуоресценции объекта, предварительно окрашенного двумя флуоресцирующими красителями (флюоресцеиндиацетатом изтидиумбромидом), происходит возбуждение флуоресценции и указанных красителей при освещении ячейки нланшета с объектом 7 возбуждающими лучами,выделенными из излучения источника 1света с помощью светофильтра 4. Светфлуоресценции обьектд при выведенныхиз хода лучей призме 9 и зеркале 18с помощью интерференционного светоделителя 12 распределяегся на два ка -нала и через соответстнующие запирающие светофильтры 15 и 20 поздддет ндФЗУ 7 и 21, Характеристики светсде -лителя 12 выбираются такими, чтобыотрдждлдсь более коротковолноваяфлуоресценция (зеленая) на ФЗУ 7 ипропускалась более длинноволновдяфлуоресценцпя (красная) - на ФЗУ 21.Здпирангщие светофильтры 15 и 20 пропускают соответственно зеленую икрасную области спектра, Линзы 14 и19 проектируют в плоскости фотокатодов соотнетстнующих ФЗУ зрачок микрообъектива 6,Так происходит регистрация интенсивности флуоресценции н двух участ -ках спектра для первой ячейки планшеты. Затем предмс тный стол автоматически перемегцдот планшету в положе -нпс, в котором перед микрообъектиномустанавливается вторая ячейка, производится измерение и т.д. Такжч образом, при сканировании планшеты происходит одновременная регистрацияинтенсивностей фпуоресценции объектав зеленой и красной областях спектра,Обработка результдтон измерений производится с помощью ЭВМ по разработанной математическои программе с выдачей процентного соде ржания живыхи мертвых клеток на дисплее ипи прин -тере, Бремя измерения одной планшетынд 60 ячеек - 30 с,При фотографировании изображения клеток обеспечивдс тся автоматическое регулирование выдержек как при ин - тегрдльной оценке 1 свешенности изображения всего цпи большей части поля объекта, так н прп и н се освегценнос -5 151 ти иэображения (яркости флуоресцецции) сюжетно ажой части кадра, что требуется при съемке объектов методами флуоресцентцой микроскопии и темного поля . При первом способе н ход лучей вводится цеселектцв,ый снетоделитель 13 посылающий на фЭУ 12 10 Х светового потока и пропускаощий 90 ь светового потока; последний, отражаясь от зеркала 18 (при введенном в ход лучец зеркале), идет к фото - аппарату 24. Изображение объекта образуется в плоскости фотопленки с помощью микрообъектива 6 и окуляра 22. Осуществление микрофотографиронация производится с помощью блока упан;ения микрофотонасддкой. При этом вместо снетоделителя 12 в ход :учей вводятся снетоделитель 13, зеркало 8 и открывается электромагцитцый эдтор 23. При достижении оптимальной выдержки (регистрации на ФЭУ 17 соответствующего сигнала) электроагц.тцый эдтнор 23 закрывается и осусстн -ляется перемотка п.енки ца один капп н кассете фотоаппарата.1 ри определеции выдержки по сюжетно важной части кадра (обычно выделяется 1" плошади кадра ;ицэ 14 ывоцися цэ хода лучей . При этомплоскость Фотокдтода фЭУ микрообъек - тиь 6 проектирует иэобрдженис. нрс.п, - рата. С помощьп диафрагмы 16 й этого иэображения выделяется часть, рдн - на по пло цдли 7. ппощади Фотокддрд 24 Х 36 мм, Предварительно центр диафрдмы 16 согласуется с центром кружка в сетке 11 оку.пяра 10, Н; сетке нанесены рамка, соотнетстнующаяФотокадру, кружок, соотнетстнуюний 17.фотокадра, и 4 биштриха, по которымнаблюдатель настраивается ца плоскость сетки.Таким сбрдйом, инвертированный микроскоп-фотометр обеспечивает наблюдение клеток культур тканей в проходящем свете (в том числе метод.и фазового и интерферецционного контраста при испопьэовании соответствующего конденсора 25 и микрообъектива 6), н свете флуоресценции, микро- фотографирование этих объектов с дв - томатическим регулированием выдержек (по интегральному и точечному сносов10 1520 2530 3540 4550 4 ормулаиэо 6 ретсния Инвертированный микроскоп-фото- метр, содержащий ртутную лампу и расположенные по ходу ее луча коллектор, теплоэащитный светофньтр и узкополосный воэбужддющи светоЮшьтр, лампу накаливания и расположснны по ходу ее луча, перпендикулярному ходу луча ртутной лампы, второй кол:ектор, конденсор, микрообьсктпн, .птерферецционный светоделитель, эдирдюшци, светофильтр, приэму, сэс тодели ель, зеркало, линзу и фотапремник, при этом призма выполнена с возможностью нынеда ее из хода лучей, д .дкже сис - тему ниэудльного наблюдеия, ра;пав ложецную по ходу отраженного от призмы луча и состоящую и. двух линз и расположенной между ньми мдсштабной сс тки, систему фотоэлсктричес ко ре - гистрации, состоящую и.: последодтельцо расположенных по ходу луча, отраженного от с.ветсдели сея, диафрдгы и торогс. Фотспремик си те - му Фотографической рс гнат рдгн, состоящую иэ сослс;тодтс.ь о сносож в нх по ходу луча, отрджсццого от эер -кала окуляра, элсктромагци", ого эд; - норд и фото:3 ппардтд) о Г л и чю ш и й с я тем что с:елью повьюе - ния производительное гн изсрс.ци, н него допопцительно введены горой эдпираюший светофильтр, рдсположсцный перед перным фотоприемцилом, допол - нцтельная линза и третп э;ицрдющий светофильтр, распопожеццыс перед диафрагмой в системе фотоэлектрической регистрации, и дополцительцьг ицтср - ференционный светоделитель, при этс м первый снетоделитель выпалец не севлективным, эеркало и дополцтесы д ялинза выполнены с возможцостью н пди вывода иэ хода луей, д срый с -тоделитель и дополнительный ьцтс рфс -ренциоцный светоделитель но:ценыс мен ным и. 8618 6 бдм), а тдкже однонрсмеццое э ере це интенсивностей флуореспеццци н двухучастках спектра при автоматическом сканировании планшет с регистрацией и обрдботкой реэультдтов с помопьк ЭВМ.