Способ определения оплодотворяющей способности спермиев птиц

,ЯО 147564 51)4 А 6 Р 7/О ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНК АВТОРСКОМУ С 8 ИДЕТЕЛЬСТВУ размн и пре ения животных, крисазначено для оценки биолог биолог способ Целью ности спермы к оплодотворению. изобретения является повышение чности спос спо отм 1:2 рох ношенвор флхромательн спол пере редметное с ают покровн юминесцентн ия мембран ы акросом отабл. т Изобретение относизмножения животных раствор флуорохрома, содержащий5 10-5 1 О э Ы -нафтпламина. Затемготовят рабочий раствор флуорохрома, ф 1состоящий из 1 части маточного раствора и 100 частей питательной среды(физраствор или среды для разбавления, хранения, замораживания спермы).Непосредственно для осуществленияспособа отмеривают в пробирку в соотношении 1:2-3 сперму и рабочий раствор флуорохрома (к примеру, берут0,01 мл спермы и 0,03 мл раствора),тщательно перемешивают и наносят напредметное стекло каплю смеси. Затемэту каплю плотно накрывают покровнымстеклом так, чтобы движение спермиевбыло ограничено. После этого препарат помещают под люминесцентный микроскоп, например Л. При этом используют возбуждающий свет с длиной иологии ологии и собности я криоб п предназначено для оцеспермы к оплодотворенЦель изобретения С 7 4 В В овь ние точсп начале готм спирте) Примертовой (на этил очныи ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ О ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ПНТ СССР(53) 591.463.1:591.166. (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР В 345919, кл. А 61 0 7/02, 971.Авторское свидетельство СССР У 1329780, по заявке 14035697/30-5, кл. А 61 0 7/02, 1976.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОПЛОДОТВОРЯЮ ПЕЙ СПОСОБНОСТИ СПЕРМИЕВ ПТИЦ (57) Изобретение относится к облас и ности способа.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу, включающему смешивание спермы с питательной средой, содержащей флуорохром, последующий анализ под микроскопом качества спермиев по состоянию их акросом, в качестве флуорохрома используют Ы -нафтиламин в концентрации 5 10 -5 10И, а об оплодотворяющей способности спермы судят по проценту спермиев, не имеющих изменений акрооба. Для осуществления ивают в пробирку в соотсперму и рабочий растма. В качестве флуоро-,. уют / -нафтиламин, Тщашивают и наносят на екло каплю смеси. Накрым стеклом, Исследуют под м микроскопом. Повреждепермиев, отклонения форнормы хорошо различимы.в 14756 Проинкубированояиц ушт. ОплодоКоличество спермиев имеющих нормальные акросомы приопределении из состоянияспособом Группа творенностьяиц, Ж известным предлагаебез учетасомнис учетомсомнительных тельных 81,2 74,6 42,5 41,8 2,3 53 59 47 55 44 68 60 37 20 3 71 62 55 28 5 61 44 31 14 5 Т111111 ЧЧ волны 400 нм, а флуоресценцию наблюдают в области 500-700 нм. Препарат рассматривают под имерсией при увеличении не мейее 90"15 в отраженном свете. При этом на темном фоне видным светящиеся светло-салатные спермии, у которых четко просматриваются все составные части от акросомы до хвостика, в том числе границы (кон 1 О туры) этих частей. Повреждения мембран спермиев, отклонения формы акросом от нормы хорошо различимы. Для достижения цели достаточно учитывать лишь состояние акросом спермиев. Та 15 ким образом, в поле зрения под микроскопом учитывают число (процент) спермиев с акросомами, не имеющими морфологических изменений, т.е, процент нормальных спермиев. К нормальным относят спермии петуха, акросо 20 ма которых имеет форму конуса с основанием, совпадаюшим по диаметру с диаметром головки. Все остальные спермии, акросома которых отличается 25 по морфологии (форме) от описанных выше нормальных, относят к поврежденным. Предлагаемый способ позволяет учитывать при необходимости по меньшей мере 3 степени повреждения акросомы спермиев; набухшая (имеет ром 30 бовидную форму; диаметр, особенно в средней части акросомы, существенно превышает диаметр головки):; шаровидная (сильно набухшая, до приобретения формы шара); стержневидная (шапочка 35 акросомы утеряна, но сохранился еще ствол). Точно также четко различима еще одна, самая сильная степень повреждения, связанная с полной потерей спермиями акросомы, Однако, как уже отмечалось вышее, для достижения поставленной цели достаточно лишь учесть процент спермиев, имеющих нормальную акросому. Для этого удобно подсчитывать подряд в поле зрения микроскопа 100 спермиев и одновременно отмечать, сколько из них имеют морфологически нормальные акросомы. При этом затраты времени на анализ образца спермы не превышают 3-5 мин .Данные сравнительного испытания эффективности прогноза оплодотворяющей способности спермы петухов известным и предлагаемым способами представлены в таблице.Для проведения испытаний вызывали повреждения акросом путем хранения цельной спермы при комнатной температуре. Для этого получалй сперму от нескольких петухов в один спермоприемник, так как 1 собирали объем, необходимый для осеменения 60 кур (5 групп по 12 голов в каждой). Полученную сперму тщательно перемешивали и использовали для осеменения кур 1 группы после 10 мин хранения, затем оставшуюся сперму хранили еще 70 мин (80 мин общего хранения) и использовали соответствующую ее часть для осеменения кур 11 группы. Кур 111 и ХЧ групп осеменяли затем спермой, хранившейся в течение 140 и 200 мин соответственно. Часть спермы (1/5 часть) сразу же после получения замораживали по повреждающему акросомы режиму и использовали для осеменения кур Ч группы. Непосредственно перед использованием спермы для осеменения кур учитывали в ней число спермиев с нормальными акросомами известным и предлагаемым способами, представленными в таблице.1475645 лодотворяющей способностью. Коэффициент корреляции 0,97. Продолжительность анализа одного образца спермы3-5 мин. Формула изобретения Составитель А,Филиппова Редактор В.Ковтун Техред М.Ходанич Корректор Н.КорольЗаказ 2098/8 Тираж 644 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 Данные показывают, что при использовании известного способа для оценки качества спермы, не подвергающейся сильному повреждающему действию (1-1 Ч группы) и поэтому имеющей сла" бые повреждения акросом, имеется значительное число (от 107 по 1 группе до 243 по 111) спермиев, которые по состоянию акросомы относят к категоФ рии сомнительных. В то же время при оценке спермы, подвергавшейся сильному повреждающему действию (Ч группа, замороженно-оттаянная сперма), сомнительных по состоянию акросом спермиев не обнаружено.Предложенный способ показал хорошую совпадаемость данных оценки качества спермы с ее фактической опСпособ определения оплодотворяющей способности спермиев птиц,включающий смешивание спермы с питательной средой, содержащей флуорохром, последующий анализ под микроскопом качества спермиев по состоянию их акрасом, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве флуорохрома ис,пользуют Ы -нафтиламин в концентрации 5 1 О-5 1 О-М.