Эталон счетчика квантов спектрофлуориметра

14 10 15 25 30 40 45 50 ф 55 Мосле многочисленных исследованийвыбраны два вещества: кумарин 30 иПОПОП.Механизм работы трехкомпонентногоэталона на основе матрицы ПИМА следующий. Перекрытие спектров Флуоресценции красителей - доноров (кумарин30 и ПОПОП) со спектром Флуоресценции красителя - акцептора (родаминВ или родамин С) является необходимым.условием для реализации двух эффектов, ухудшающих эксплуатационные возможности эталона: реабсорбции молекулами акцептора (Л) излучения Флуоресценции молекул донора (Д), безызлучательного переноса энергии электронного возбуждения от молекул Д к молекулам А.Эффективная реабсорбция достигает, ся при высоких оптических плотностяхэталона. Оптическая плотность должнабыть больше 3 во всем рабочем диапазоне для того, чтобы большая часть излучаемого изотопно по всем направлениям Флуоресцентного излучения от Дпоглотилась молекулами А. Наличиебезызлучательного переноса энергииот Д к А обеспечивает эффективнуютрансформацию поглощенного донорнымикомпонентами излучения возбуждения визлучение А, регистрируемое детектором счетчика квантов. Вероятность (и,соответственно, эффективность) этогопроцесса определяется степенью перекрытия спектров излучения Флуоресценции Д и поглощений А, квантовымвыходом флуоресценции Д и расстояниями между молекулами Д и А, Анализспектрально-энергетических характеристик выбранных соединений показыва"ет, что критическое расстояние переноса энергии, при котором эффективность безызлучательного переноса отмолекул Д к молекулам А составляет507, характеризуется величинами 50100 А. Такие расстояния реализуютсядля рассматриваемых систем при концентрациях 0,25-2,5 г/л.П р и м е р. Изготовлены и исследованы два эталона, выполненные ввиде лопасти обтюратора для счетчика квантов спектрофлуориметра 10. из полимерной матрицы ИЗМА, активированной тремя Флуоресцентнымикомпонентами,Первый эталон, г/л: родамин В 1;ПОПОП 1; кумарин 30 1. 745274Второй эталон, г/л: родамин С1 ПОПОП 0,4; кумарин 30 0,4.Оба эталона имеют толщину 2 ммпо оптической оси распространениявозбуждающего излучения, съем излучения флуоресценции осуществляетсяс торца лопасти. Оптическая плотность в диапазоне 220-600 нм Р 3,0.Оба эталона имеют практически одинаковые характеристики. В обоих эталонах энергия, поглощенная ПОПОП,реабсорбируется и передается кумарину 30, а от него также за счет эффектов реабсорбции и передачи энергии трансформируется практически сэффективностью 1002 в излучение родамина. Предлагаемое техническое решение20 по сравнению с известным за счет повышения коэффициента поглощенияэталона путем дополнительной активации матрицы из ПММА компонентами, спектры поглощения которых заполняют область слабого поглощения родамина, а спектры Флуоресценции перекрываются с основной полосой поглощения родамина,позволяет повысить стабильность коэффициента преобразованиячисла квантов возбуждающего излучения в число квантов флуоресцентногоизлучения до значения не хуже +52. На чертеже представлены записанныена автоматических спектрофлуориметрах Р.саи Б 1.Мкоэффициенты преобразования числа квантов возбуждающего излучения в число квантов флуоресцентного излучения трехкомпонентного эталона 1 и двух однокомпонентных - с родамином В и родамином С. Как видно из чертежа, однокомпонентные эталоны обладают погрешностью до 20% именно в области 370-470 нм, где для них характерны малые коэффициенты поглощения,Известно, что в органических растворителях изменение концентрации родаминов от 1 до 4 г/л приводит к уменьшению квантовых выходов флуоресценции растворов в 2,3-2,5 раза. Непосредственное. сравнение предлагаемых трехкомпонентных эталонов и известного, в которых концентрации родаминов также составляют 1 и 4 г/л соответственно, похазывает, что при одинаковых условиях возбуждения и регистрации интенсивности на длине волны максимума спектров флуоресценции родамина В в предлагаемом эталоне выше14 П/7 РМродагеиуу Я гПППЛфродонииС О 8 085 дУ УХ Составитель Б. ШироТехред Л. Сердюкова емчик орректо едактор Н, Тупица 41 Тираж 788 Подписноеарственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Заказ 18 НИИПИ оизводственно-издательский комбинат "Патент", г.уж ул, Гагарина, 1 в 3-3,5 раза, Это обусловлено не только концентрационным эффектами, но и меньшей толщиной трехкомпонентного эталона (2 мм) по сравнению с толщиной известного эталона.Таким образом, предлагаемое техническое решение по сравнению с известным за счет снижения концентрации родамина до 1 г/л позволяет повысить светоотдачу эталона.Кроме того, компоненты, входящие в состав предлагаемого эталона, используются в качестве активных сред в ОКГ на красителях, внедренных в ШЧМА, что дает уверенность в их высоких эксплуатационных возможностях, поскольку мощности излучения возбуждения в спектрофлуориметрах на 3-4 порядка меньше мощностей, используемых при накачке в ОКГ. 74527 6 Формула изобретения Эталон счетчика квантов спектрофлуориметра, выполненный в виде ло". пасти обтюратора из матрицы полиметилметакрилата, активированной родамином В или родамином С, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью расширения области стабильности коэффициента преобразования числа квантов возбуждающего излучения в число квантов флуоресцентного излучения и повышения светоотдачи, матрица полиметилметакрилата дополнительно активирована кумарином 30 в концентрации 0,4- 1 г/л и 1,4-ди 12-(5-фенилоксазолил) бензолом в концентрации 0,4-1 г/л, а концентрация родамина В или родамина С составляет 0,9-1, 1 г/л,