Способ выделения паразитов из малых прудовиков для лабораторных исследований по н. ф. запорожцу

Ссюэ СОВЕтСНихсоциАлистическихРЕСПУБЛИН 01 К 67/ 61 В 1000 ЕНКЫЙ КОМИТЕвениям и отнеыти са ГОСУДАРСпо ЙзоБПРИ ГКН АНИЕ И ЕТЕНИЯ ние церй и вынии жизВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Винницкий филиал Украинскойсельскохозяйственной академии(56),Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды, М.; Колос, 1984,с.162.(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ПАРАЗИТОВ ИЗМАЛЫХ ПРУДОВИКОВ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНЫХИССЛЕДОВАНИИ ПО Н.Ф.ЗАПОРОЖЦУ(57) Изобретение относится к зоологии и паразитологии, а также к медико-биологическим моделям - лаборатор"ным препаратам, иможет быть использовано как наглядное пособие в учебно-методической и научно-исследоваИзобретение относится к зоологии и паразитологии, а также к медико- биологическим моделям - лаборатор ным препаратам, и может быть исполь" зовано как наглядное, пособие в учебно-методической и научно-исследовательской работе.Цель изобретения - выделе карий, получение адолескари ведение фасциол при сохраненеспособности улиток.Способ заключается в том, что малых прудовиков помещают в двухкомпонентный раствор (состоит из уксусной кислоты при концентрациях 0,04-0,063 и нитрита,натрия при концентрациях, 1464991 А тельской работе. Целью изобретения является выделение церкарий, получение адолескарий и выведение фасциол при сохранении жизнеспособности ули,ток. Малых прудавиков помещают в раствор, содержащий 0,04-0,06 Х уксусной кислоты и 0,0002-0,00043 нитрита натрия, Вьдерживают в течение 9-12 ч. Получают церкарии. Улиток из раствора удаляют. Церкарии в растворе вьдерживают в течение 18-60 ч. Получают из церкарий адолескарии, Раствор удаляют. В сосуд с адолескариями вносят фильтрат тканей печени. К последнему добавляют 4-103 натуральной желчи крупного рогатого скота. Адолескарии инкубируют более 1 чопри температуре 35-40 С. Получают живых фасциол из адолескарий. Малые прудовики остаются жизнеспособными. 20,0002-0,0004 Х) и вьдержнвают в течение 9-12 ч. Получают церкарии из организма улиток, Улитки с раствора удаляют, а церкарии в растворе вьдер живают на протяжении 18-60 ч. После этого времени получают из церкарий адолескарий на внутренней поверхности сосуда (они прочно приклеиваются к поверхности сосуда). Раствор удаляют. В сосуд с адолескариями вносят смесь двух биологических жидкостей, вначале после измельчения тканей пее ъчени крупного рогатого скота и последующего отжимания печеночного Фарша через 4 слоя марли и фильтрования полученной биологической жидкости1464991 через обеэзоленный бумажный фильтр - получают сок. К последнему добавляют 4-10% натуральной желчи крупного рогатого скота. В итоге получают смесь5 двух биологических жидкостей, которую используют согласно способу, помещают в термостат и инкубируют в течеоние не менее 1 ч при 35-40 С. После этого получают живых фасциол из адолескарий.П р и м е р 1, 2 малых прудовика выдерживают в двухкомпонентном растворе, состоящем из 0,04% уксусной кислоты и 0,0002% нитрита натрия, в 15 течение 10,5 ч. Полученные церкарии в 5 чашках Петри в указанном раствоо ре вьдерживают 39 ч при 18, С. В контроле церкарий от улиток не вьделено, а в опыте их выделено 5. Из этих 20 церкарий получено 62 адолескарии. Улитки остались живыми.П р и м е р 2, 2 улитки опьгга выдерживают в двухкомпонентном растворе, состоящем из 0,05% уксусной кисло ты и 0,0003% нитрита натрия. 2 малых прудовика вьдерживают в дистиллированной воде (контроль). В контроле от улиток церкарий не получено, а в опыте их выделено 550. Из этого коли- ЗО честна получено 490 адолескарий. Улитки остались живыми.П р и м е р 3. 2 малых прудовика (опыт) выдерживают в двухкомпонентном растворе, который состоит из 0,06% уксусной кислоты и 0,0004% нитрита натрияВ опыте выделено 125 церкарий (улитки остались живыми) и получено из них 104 адолескарии, а в контроле соответственно 0 и О.аоП р и м е р 4, Улитки вьдерживаютов течение 9 ч при 18 С в двухкомпонентном растворе - 0,05% уксусной кислоты и 0,0003% нитрита натрия (опыт), а в контроле улитки - малый 45 прудовик - в воде. В опыте от улиток выделено 450 церкарий, из которых через 39 ч получено 420 адолескарий а в контроле (улитки выдерживают в воде в течение .12,5 ч) О и 0 соответственно.П р и м е р 5. 2 малых прудовикавыдерживают в двухкомпонентном растворе в течение 10,5 ч, а в контроле " в воде 12,5 ч. В опьгге получено 600 церкарий и 530 адолескарий, а в контропе соответственно 0 и О.П р и м е р 6. 2 малых прудовика в двухкомпонентном растворе вьдерживают 12 ч, В опыте выделено 100 церкарий и получено 92 адолескарии, Вконтроле 0 и 0 соответственно.П р и м е р 7. Готовят 10 л двухкомпонентного раствора, который состоит из 0,05% уксусной кислоты и0,0003% нитрита натрия. Верут 2 банки, емкость каждой 0,5 л, нумеруютих. В первую наливают 100 мл дистиллированной воды, а во вторую (опыт) -100 мл указанного раствора. В обасосуда помещают по 2 малых прудовикана 10,5 ч при 18 С, Получают церкарии (улитки после этого из сосудовудаляют), которые вьдерживают в двухкомпонентном растворе 18 ч, В контроле от улиток церкарий не вьделено,а в опыте их выделено 550. Из этогоколичества церкарий получено 510 адолескарий. Улитки остались живыми,П р и м е р 8, Аналогичен примеру 7, но здесь церкарии в двухкомпонентном растворе вьдерживают 39 ч.В опыте вьделено от улиток 600 церкарий и получено 530 адолескарий, ав контроле соответственно 0 и О.П р и м е р 9. Аналогичен примеру 7, но здесь церкарии в двухкомпонентном растворе выдерживают 60.ч.В опыте от 2 малых прудовиков выделено 600 церкарий, из которых получено 520 адолескарий, в контроле 0и 0 соответственно,П р и м е р 10. Адолескарии в опыте инкубируют при 35 С (а в условномоконтроле - 34 С) в составе смеси биологических жидкостей (7% желчь, всоке из печени) в течение 1 ч, Вопыте из 92 адолескарий получено 51фасциола, что составляет выход фасциол 55%, а в контроле соответственно 100,29 и 29,П р и м е р 11. Адолескарии инкубируют при 37,5 С (опыт), а в контроле (согласно примера 10) - прио34 С. Из 106 адолескарий получено102 фасциолы, выход которых составляет 96%, а в контроле 100,29 и 29 соответственно.П р и м е р 12Адолескарии инкубируют в опытном сосуде при 40 С, ав контроле (см.пример 10) - при 34 С.В опыте из 94 адолескарий получено3 фасциолы, что составляет 78% выхода, а в контроле соответственно100,29 и 29.П р и м е р 13. Чашки . Петри сацолескариями в смеси биологических(опыт), а в контроле 50 мин. В опыте из 110 адолескарий получено 108 фасциол, что равно 98% выхода, а в контроле соответственно 120,0 и О.П р и м е р 14. Адолескарии инкубируют в течение 70 мин. а в контроле .50 мин. В контроле из 120 адопескарий получено 0 фасциол, что состав ляет 0% выхода, а в опыте 120,116 и 97 соответственно.П р и м е р 15. Адолескарии инкубируют при 37,5 С в течение 1 ч в смеси биологических жидкостей - 4% 15 натуральной желчи крупного рогатого скота в соке печени. В контроле 3% желчи. В опыте из 110 адолескирий получено 89 фасциол, выход составляет 81%, а в контроле соответствен но 105,0 и О.П р и м е р 16. Адолескарии инкубируют в смеси биологических жидкостей - 7% натуральной желчи в соке из печени. Остальное - аналогично приме ру 15, В опыте из 120 адолескарий получено 118 фасциол, что составляет 98% выхода, а в контроле 105,0 и О . соответственно.П р и м е р 17, Адолескарии инкубируют в смеси биологических жидкостей - 10% натуральной желчи в соке из печени. Остальное - аналогично примеру 15. В опыте из 120 адолескарий получено 118 фасциол, выход 98%, З 5 а в контроле 105,0 и 0П р и м е р 18. Берут 1 кг печени от крупного рогатого скота, при помощи ножа режут ее на мелкие кусочки, которые дополнительно измельча ют при помощи мясорубки - получают. фарш из печени. Последний помещают в марлю, состоящую из четырех слоев, и руками тщательно отжимают - получают сок из печени. Далее берут мерный 45 цилиндр, вставляют в него стеклянную воронку, в которую помещают обеззоленный бумажный фильтр, и наливают сок печени, После фильтрования получают прозрачный красноватый сок. Бе рут 93 мл профильтрованного сока и к нему добавляют 7 мл натуральной свежей желчи крупного рогатого скота,перемешивают стеклянной палочкой, В итоге получают 7% раствор желчи в соке из печени, т.е. получают смесь двух биологических жидкостей. Ее используют для инкубирования адолескарий и получения из последних фасциол согласно способу.Аналогичным образом готовят и дру" гие концентрации желчи в соке из печени, но при этом к соку добавляют 3 или 10% натуральной желчи согласно способу.Применение параметров за пределами предлагаемых, или применение растворов уксусной кислоты (0,04-0,06%) и нитрита натрия (0,0002-0,0004%) не сочетанно по два, а раздельно по одному, не сопровождается получением положительного эффекта.Предлагаемый способ позволяет на 100% сохранить после экспериментов малых прудовиков жизнеспособными, дает возможность получать от улиток в лабораторных условиях неограниченное количество церкарий, адолескарий и фасциол, причем в нужное время,Способ выделения паразитов из малых прудовиков для лабораторных исследований, включающий помещение малых прудовиков в раствор, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью выделения церкарий, получения адолес. карий и выведения фасциол при сохранении жизнеспособности улиток, малых прудовиков помещают в раствор, содержащий 0,04-0,06% уксусной кислоты и 0,0002-0,0004% нитрита натрия, выдерживают в нем в течение 9-12 ч, выделившиеся церкарии с раствором переносят в другой сосуд и выдерживают в нем в течение 18-60 чпосле чего раствор удаляют, а выделившиеся адолескарии помещают в фильтрат тканей печени крупного рогатого скота, к которому добавляют натуральную желчь крупного рогатого скота при концентрации 4-10%, и термостатируютопри 35-40 С в течение одного и более часов получения фасциол.