Способ определения церулоплазмина в крови

союз советскихсоцидлистичеснихРЕСПУБЛИК 01 М 3349 1 Н 33 б 8 ОПИСА ЛЕЛ инстит атенко,рип ство ССС48,ОсудАРстВенный кбмитето изоБР 1:тениям и отнрцтияРи гкнт ссср) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦЕРУЛОПЛАЗВ КРОВИ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к биохимии. Целью изобретения является повьввение точностии чувствительности способа наряду сего упрощением, Для этого к растворусубстратно-буферной смеси добавляютжидкость, содержанию фермент, пропус"кают слабый высокочастотный ток и повеличине сопротивления этому токуобъективно определяют скорость накопления продуктов ферментативной реакции. 1 табл.Изобретение относится к медицине,конкретно к биохимии.Целью изобретения является повышение чувствительности и упрощенияспособа.Способ осуществляется следующимобразом.0,05-1,0 мл исследуемои биологической жидкости разбавляют в 50- 10500 раз. В кювету прибора вносят 12 мл (в зависимости от количества исследуемой жидкости) раствора субстратно-буферной смеси, состоящей изацетатного буфера и нарафенилендиамина, при включенном термостате прибора й = 37 С + 1 С. Кювету с электродами подсоединяют к прибору. Черезотверстие в электроде вводят растворбиологической жидкости, исследуемойна активность фермента. Регистрируют ход накопления продуктов ферментативной реакции при помощи самописца(КСП,. Н, Н).Активность фермента оценивают как 25по количеству, так н по скорости мак.симальиого накопления продуктов реакциивСубстратно-буферную смесь готовятпутем растворения 0,125 г парафени" лендиамина солянокислого х/ч иличда) в 25 мл дистиллированной воды.Затем к Б мл полученного раствора до"бавляют 5 мл 0,1 И ацетатного буферарН 6,0 и 40 мл дистиллированной воды,Полученная субстратно-буферная смесь Содержит субстрат-парафенилендиамин в концентрации 4,62 мИ/л.В соответствии с инструкцией к прибору АФ, на котором проводилось измерение, характеристики тока следующие: частота тока 880 кГц, сила тока 20 мкА.Частота тока является стабильнойхарактеристикой прибора, не подлежащей коррекции. Сила тока является оптимальной.Для индикации используется типовой датчик с двумя серебрянными электродами, покрытыми керамической пористой оболочкой. Активность церулоплазмина рассчитывают по ФормулеЬ1 3 101000) 551151000где Ь - отклонение пера самописца(мВ); 1,3 - коэффициент перехода отпоказаний милливольтметрапри предлагаемом способена концентрацию церулоплазмина при условиистрогого соблюдения всехпараметров опыта (мгф 7);10 - коэФФициент пересчета100 мг на 1 л;1000 - коэффициент пересчета мг вмкг,"1 - длительность реакции (ч);151000 - мол. м церулоплазмина.П р и м е р. О, 1 мл.сыворотки крови разбавляют в 100 раз 0,97-ным раствором натрия хлорида. В кювету анализатора вносят 2 мл субстратнобуферной смеси, состоящей из 0,1 М ацетатного буфера рН 6,0, раствора парафенилендиамина, приготовленного из расчета 0,125 мг парафенилендиамина на 25 мл дистиллированной воды, и дистиллированной воды. Ингредиенты субстратно-буферной смеси берут в соотношении 1:1;8 соответственно. Полученная субстратно-буферная смесь содержит субстрат"парафени" лендиамин в концентрации 4,62 мм/л.Кюветы помещают в термостат при" бора Т = 37 С, вставляют датчики с электродами и при достижении постоянной температуры подключают к прибору. Через отверстие в крьппке датчика вводят О, 1 мл разведенной в 100 раз сыворотки крови белой крысы. Ход ферментативной реакции регистрируют на циаграммной ленте самописца.Параметры работы приборного комплекса: сила тока 20 мкА; напряжение 50 мВ; скорость движения ленты самописца Н180 мм/ч.Результаты эксперимента представлены в таблице,Оценку точности измерений проводятс помощью среднего арифметическогоединичных отклонений отдельных измерений от среднего арифметического.Показатель точности способа Е, прикоэффициенте надежности 0,95 и К -" = 9 Я= 0,271,Таким образом, х, , ш полностьюопределяют точность (воспроизводи"мость и правильность) анализа.В примере точность предлагаемогоспособа характеризуется следующимипоказателями; х = 6,177; Гс= 0,271;1446571 4мени исследования одной пробы в4 раза в сравнении с кэвестным способом. Чувствительность повыпается дот510 при равенстве ее в известном способе 10Ф зффициентклонение Продолжитрелки тельность мм (мВ) реакции,тивностьрмекта,оль/л.ч ора,В ета 48(0,27) 6 9(19,5) 0 1,3 54(0,30) 5,450(0,28) 6,38(19 9(19 46(0,26) 6,56 52(0,29) 6,36 51(0,28) 5,84 47(0,26) 6,46 47(0,26) 6,36 46(0,26) 6,36 39,5(19,8 38,5(19,2 8(19,0) 9(19,5) 38,5(192 38,5(19,2+ш = +0,12; римечанШилинанык Составитель ЛТехред Л.Оли ктор Г.Волкова Корректор И,Иаксимишинец 744/51 Тираж 847Государственного комитета по изо 113035, Москва, Ж, Р Подписно ЗаказВНИИПИ СССР етениям и открытиям пушская наб., д, 4/5 оизводствекно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная Показатели точности известного способа х д 1,146; Е,= 1,7 прн 1 с =7; +ш = 1 0,065.Чем вьппе величина показателя точности Я, тем ниже точность способа. Таким образом, известный способ является менее точным (воспроизводимым и правильным) по сравнению с предлагаемым способом. 10Статистические параметрырассеяния данных активности церулоплазмина выше при использовании известного способа в связи с тем, что в нем не учитывается фактическая продолжитель ность индивидуальных реакций, а используется один и тот же показатель продолжительности реакций, определенный.методикой (1 ч).Хаким образом, предлагаемый 20 способ позволяет получить более точ. ные и объективные данные об активности церулоплазмииа, чем известный способ. Достигается уменьшение вреФормула изобретения Способ определения церулоплазмина в крови путем внесения ее в субстратко-буферную смесь, содержащую парафенилендиамин и ацетатный буфер с последующей инкубацией исследуемой пробы и учетом результатов реакции, о т л и ч а ющ и й с я тем, что,с целью повьппения чувствительности и упрощения способа, после внесения крови в субстратно-буферную смесь через исследуемую пробу пропускают слабый высокочастотный ток, а учет результатов активности церулоплаэми" на проводят по величине сопротивления этому току.