Способ количественного определения белка

(51) 4 С 01 М 33/О ф в 1 БР ПИСАНИ ВТОРСКОМУ С ВУ Т(21) 3 (22) 31 (46) 2 юсЬеш.,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ 811276/28-13(56) Реегвоп С.Ь, Апа 11. В 1979, ч. 100, 201.Мосолов В.В. и др. Прикладная био химия и микробиология, 1965, т. 1, вып. 2, с. 233-237. (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕ НИЯ БЕЛКА(57) Изобретение относится к микробиологии и может найти применение пр количественном определении белка в растворах и экстрактах из различных биологических объектов. Целью изобре тения является сокращение времени анализа при сохранении воспроизводимости и чувствительности метода. Щелочной экстракт белка из растертыхлистьев и клубеньков сои помещаютв пробирку и добавляют медно-карбонатный реактив, содержащий 2% НаСО,0,027. трехзамещенного лимонно-кислого Иа и 0,01% СцБО.5 Н О. Пробиркупомещают в водяную баню с температурой 98 С на 10-15 с с последующимвведением 0,5 мл 1 н. фенольного реагента фолина-Чиокалтеу и выдержкойв водяной бане при 980 в течение30-40 с. Пробу охлаждают в воде иизмеряют оптическую плотность окрашенных растворов на спектрофотометрепри длине волны 750 нм, Количественное определение белка осуществляютв зависимости от измеренных значенийоптической плотности. 3 табл.1383201 Изобретение относится к микробиологии, биотехнологии, биохимии и касается определения белка в растворахи экстрактах из различных биологических объектов.5Цель изобретения - сокращение времени анализа при сохранении воспроизводимости и чувствительности метода.Оптическая плотность не изменяется 10в течение 1 ч и более длительноговремени и воспроизводится при повторных анализах вследствие того, что достигается плато" оптической, плотности,15В табл. 1 - 3 приведены средниеданные из трех определений содержаниябелка, полученные согласно предлагаемому способу, и контрольные данныесогласно известному способу. 20П р и м е р 1. В пробирку помещают1 мл щелочного экстракта (0,5 н. ИаОН)белка концентрацией 5-80 мкг/мл израстертых листьев и клубеньков сои идобавляют 5,0 мл медно-карбонатного 25реактива, содержащего, %: МаСОЗ 2;,трехзамещенный лимонно-кислый Ма0,02; СцБО 5 Н О 0,01. Пробирки ставят в водяную баню температурой 98 Сна 15 с, затем быстро добавляют0,5 мл 1 н. Фенольного реагента Фолина-Чиокалтеу, энергично встряхиваюти снова помещают в водяную баню температурой 98 С на 30 с. Пробы охлаждают в воде и измеряют оптическуюплотность окрашенных растворов наспектрофотометре при длине волны750 нм.Контроль. Аликвоты щелочного экстракта белка согласно известному спо собу после добавления 5 мл медно-карбонатного реактива выдерживают при комнатной температуре 15 мин, а затем после добавления (используют исключительно короткие интервалы време ни и высокие температуры для проведения реакций образования медно-протеи- нового комплекса при взаимодействии анализируемого белка с медно-щелочным реактивом - 1-я реакция) и последую 50 щего восстановления реактива ФолинаЧиокалтеу образовавшимся медно-протеиновым комплексом (2-я реакция)создаются условия, когда достигаетсямаксимальная величина оптическойплотности, что обеспечивает достаточную чувствительность метода (5 мкг//мл), 0;5 мл 1 н. раствора ФолинаЧиокалтеу выдерживают в термостатепри 37 С 30 мин.П р и м е р 2. Осуществляют также, как в примере 1, за исключениемтого, что в качестве проб берут щелочные экстракты из дрожжей Сапс 1 Ыача 1 хс 1 а и Сапс 1 Ма с 1 Ыепз 1 д, времяпроведения 1-й реакции 10 с 2-й реакции 35 с. Температура водяной бани 100 С,П р и м е р 3. Осуществляют так,же, как в примере 1, за исключениемтого, что в качестве проб берут щелочной экстракт из биомассы Реп 1 с 111 щп з 1 гоуае, время проведения 1-йреакции 10 с, 2-й реакции 40 с.Температура .водяной бани 99 С,Таким образом, предлагаемый способпозволяет проводить количественноеопределение содержания белка в пробахв течение не более двух минут, что в7,5 раза быстрее известного ускоренного метода определения белка, причем полученные данные практически неотличаются от результатов, полученных известными методами. Формула изобретения Способ количественного определе" ния белка, предусматривающий отбор пробы, смешивание с медно-карбонатным реагентом, выдерживание, последующее нагревание с реактивом, ФолинаЧиокалтеу и измерение оптической плотности окрашенного раствора, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сокращения времени анализа при сохранении воспроизводимости и чувствительности метода, выдерживание пробы, смешанной с медно-карбонатным реагентом, и последующее нагревание с реактивом Фолина-Чиокалтеу проводят в кипящей водяной бане в течение 10-15 и 30-40 с соответственно.Образец известному предлагаемому 57,0 54,0 68,5 68,5 60,0 59,2 4 35,3 36,4 Т а б л и ц а 2 Содержание белка, мкг/мл,по способуОбразец известному предлагаемому 38,0 39,0 45,7 46,2 36;5 35,5 49,6 50,1 50,1 51,3 50,2 49,7 45,0 46,0 52,4 53,6 45,7 Т а б л и ц а 3 Образец Содержание белка, мкг/мл,по способу известному предлагаемому 48,5 50,0 41,1 42,0 33,6 31,9 50,3 49 9 43,2 43,1 1 1 57,0 55,0