Способ определения нефропатии при нарушении кровообращения

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК А 1 19) М 33/48 А 61 В 10 РЕТЕН ТЕЛЬСТВУ 28-1 Бюл. У 8адский госуданститутнов, Г.И.Мала и З.Г.Иван88.8) венный а ва ва Г.И.,е изоферв моче,2, с.92 В.П., КолупаИсследованиой фосфатазыдело, 1982,ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССС О ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫ ОПИСАНИЕК АВТОРСКОМУ СВИ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕФРОПАТИИПРИ НАРУШЕНИИ КРОВООБРАЩЕНИЯ(57) Для раннего. выявления гипоксической формы нефропатии в моче исследуют изоферментный спектр эстераз сиспользованием в качестве субстратае-нафтилацетата, Определяют их электрофоретическую подвижность относительно бромфенолового синего. При появлении иэоферментов с электрофоретической подвижностью 0,25 и менее диагностируют заболевание.Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии, и может быть использовано для ранней диагностики дегенеративных и дистрофических изменений канальцевого аппарата почек вследствие их ишемического повреждения у больных гипертонической болезнью, хронической недостаточностью кровообращения, диабетическим нефроангиосклерозом, вследствие приема нефротоксических препаратов, при хронических гломерулонефритах, пие-. лонефритах, других возможных приобретенных или врожденных канальцевых нарушениях.Целью изобретения является раннее выявление гипоксической формы нефропатии за счет того, что в моче исследуют изоферментный спектр эстераз с использованием в качестве субстрата Ы-нафтилацетата, определяют их электрофоретическую подвижность относительно бромфенолового синего и при появлении изоферментов с электрофоретической подвижностью 0,25 и менее диагностируют гипоксическую форму нефропатии.Способ осуществляют следующим об" разом.Проводится сбор утренней мочи, ее предварительная микроскопия (наличие форменных элементов или сперматозоидов), центрифугирование 20 мин при 3000 об/мин с целью осаждения клеточных элементов, могущих служить источником ферментативной активности. За" тем проводят диск-электрофорез мочи в полиакриламидном геле по методу Орнстейн-Девиса.с использованием 5 Е разделяющего геля в аппарате ПЭФА, с трисглициновым буфером рН=8,3 для электродных сосудов, в который добавляется краситель бромфениловый синий (5,0 мл 0,0012-ного р-ра на 500,0 мл буфера),.по отношению к ЭФ-подвижности которого идентифицируются фракции эстераз. Моча (0,1 мл) наносится в стеклянные трубки вместе с сефадексом Г. Электрофорез проводится при силе тока 4 мА на каждую трубку. После электрофореза столбики геляопускают на 15 мин в инкубационную смесь, предварительно профильтрованную, следующего состава: 5 мг ю.-нафтилацетата в 0,3 мл 503-ного ацетона, 10 мг Фаст Блю Б соли,0 мл 0,2 М фосфатного буфера рН=8,0при 37 "С.. где можно было ожидать повреждениепочек вследствие циркуляторной ише мии, и во втором случае вследствиепобочного действия фурасемида в мочеотмечено появление медленных изоферментов эстераз с ЭФ-подвижностью0,22 и Ое 25 э Ое 22 ф Оь 14 э Оэ 11 ф 0.09.Исследование предлагаемым способом 255 больных с различными заболеваниями (гипертонической болезнью,хронической недостаточностью кровообращения, инфарктом почек, острыминфарктом миокарда, гломерулонефрита"ми, пиелонефритами, диабетическимнефроангиосклерозом, гипоксии у новорожденных детей) показало, что сего помощью можно выявлять ранние из" 20 25 30 35 40 Сгущение мочи в 25 раз с помощью диализа против полиэтиленгликоляМ.В.20000 существенно не влияло на результаты исследования.Сыворотка крови исследуется аналогичным способом. Для получения экстрактов из органов, кусочек почечной ткани предварительно многократно отмы" вали от крови дистиллированной водойдобела, гомогенизировали с помощьюстеклянного пестика, заливали на 24 чфизиологическим раствором и ставилив холодильник, затем центрифугировали 30 мин при 3000 об/мин и экстрактподвергали электрофорезу. П р и м е р 1. Больной Т., 63 лет с диагнозом острого трансмурального переднего инфаркта миокарда. В первый день болезни эстеразы в моче не выявились, Затем у больного развился кардиогенный шок, анурия, фибрилляция желудочков, После успешных реанимационных мероприятий на второй день в моче стали определяться медленные фракции эстераз (7-71), исчезнувшие через пять дней.П р и м е р 2. Больная Ж., 57 лет, с диагнозом ревматизм, активность 1, сочетанный митральный порок с преобладанием стеноза. После приема фурасе" мида на,фоне лечения сердечными глико" эндами появилась тошнота, частая экстрасистолия, суточный диурез составил всего 700 мл, В моче до приема диуретиков эстеразы не определялись, после них в порциях мочи, собранных через 4 и 8 ч, отмечено появление медленной фракции эстеразы (7)," 1377729 3 Составитель Н.ЛитвиненкоТехред М,ДидыкКорректор М.Шароши Редактор:Э.Слнган Тираж.847 - . ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений н открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д,4/5 Заказ 864/39 Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул,Проектная,4 менения в почках, обусловленные ишемическими и токсическими повреждениями канальцевого аппаратаПредлагаемый способ прост, не требует количественных изменений и соответствуяцей аппаратуры, поскольку является качественной реакцией (наличие или отсутствие медленных изоферментов эстераз в моче), для его выполнения требуются стандартные наборы реактивов и выпускаемый промыш " ленностью аппарат для электрофореза (ПЭФА), он основан на известных теоретических предпосылках и обоснован экспериментальными исследованиями.Формула и зобр е т ения Способ определения нефропатни при нарушении кровообращения путем исследования мочи, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью раннего выявления гипоксической формы нефропатии, в моче исследуют изоферментный спектр эстераз с использованием в качестве субстратаЫ-нафтилацетата, определяют их электрофоретическую подвижность относительно бромфенилового синего и при появлении изофермента с электрофоретической подвижностью 0,25 и менее диагностируют гипоксическую форму нефропатии.