Средство для прижизненного выявления клеток нервной ткани

(19) (11)АВТОРСКОМУ С ЕЛЬСТВУ и со 1 кон тель-е. Л.: О ВЬЮ 57) Изобретениеургии, точнее к изненного выявл относится к неи средствам дния нервныхрической и ии глиаль ентральх клеток пе ГОсудАРстВенный комитет ссс ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫ(71) Институт биологической фиАН СССР(56) Чумасов Е.И., Материалыференций и выставок по изобреству и рационализации в медицМедицина, 1976, с. 136-138.(54) СРЕДСТВО ДЛЯ ПРИЖИЗНЕ 1 ЛЕНИЯ КЛЕТОК НЕРВНОЙ ТКАНИ ной нервной системы (ЦНС) в культурах ткани ЦНС, в культурах периферической нервной системы и свежих срезах нативного мозга, Цель изобретения - сокращение времени выявления нервных клеток путем поддержания оптимальных физиологических условий во время окрашивания исследуемых препа- . ратов. Для этого средство содержит вещества в следующем соотношении, мас.7.: метиленовый синий 0,30-0,60; хлористый натрий 0,75-0,90; хлористый калий 0,03-0,06; хлористый кальций 0,011-0,020; сернокислый магний 0,015-0,030; двузамещенный фосфорно- кислый калий 0,004-0,008; кислый углекислый натрий 0,03-0,045; глюкоза ф 0,2-0,4; вода остальное. Время выявления 18-20 мин, 1 табл.С:08 г 1 13173Изобретение относится к нейрогистологии, в частности к средствам для прижизненного выявления нервных и глиальных клеток центральной и периферической нервной системы и может быть предназначено для выявления и исследования нервных и глиальных клеток в культурах ткани ЦНС, а также может найти применение для прижизненного исследования нервных и 10 глиальных клеток в культурах периферической нервной системы и свежих срезах нативного мозга,Цель изобретения - сокращение 15 времени выявления нервных клеток путем поддержания оптимальных физиологических условий во время окрашивания исследуемых препаратов.П р и м е р 1. Готовят средство 20 для прижизненного выявления клеток нервной ткани, для чего растворяют 0,3 г химически чистого кристалли,ческого красителя метиленового синего в 25 мл сбалансированного соле всго раствора состава, г/л: хлористый натрий 7,5; хлористый калий 0,3, хлористый кальций 0,11; сернокислый магний О, 15; двузамещенный фосфорнокислый натрий 0,04; од нозамещенный фосфорнокислый калий 0,04; кислый углекислый натрий 0,30, глюкоза 2,0, остальное вода, а за. - тем непосредственно перед опытом разбавляют 1 мл исходного раствора в 3 мл того же солевого раствора.На препарат культуры гиппокампа, выделенного из мозга новорожденньгх крыс и культивированного методом вращающихся пробирок, наносят 3 капли приготовленного средства и помещают его в термостатированную камеру, в качестве которой используют столик-термостат (Т +37 С), Контроль за окрашиванием проводят с помощью 45 микроскопа ,аЬоча 1 (Фирмы Кари Цейсс Йена, ГДР).Через 5 - 6 мин были окрашены глиальные клетки в тонкой части (зоне роста) культуры. Спустя 10 мин начали проявляться нервные клетки и их отростки. Оптимальная степень окрашивания была достигнута в данном случае к 20-й минуте.П р и м е р 2. Средство для прижизненного выявления клеток нервной ткани, содержащее г/л: метиленовый синий 4,5; хлористый натрий 8,60; хлористый .калий 0,4; хлористый кальций 0,14 сернокислый магний 0,20; двузамещенный фосфорнакислый натрий 0,06 однозамедддекньдй фосфорнокислый калий 0,06; кислый углекислый натрий 0,35; глюкоза 3,0, остальное вода. Готовят по примеру 1.Для выявления нервных клеток на препарат культуры ткани коры головного мозга крыс, выделенный и культивированный по примеру 1, наносят 3 капли свежеприготовленного вышеопи-. санного раствора. Процесс окрашива-, ния проводят также, как в примере 1В данном случае нервные клетки начали выявляться по всему эксплантагу через 8 мин, Спустя 18 мин бьдло достигнуто хорошее окрашивание нейронов и их отростков.П р и м е р 3. Средство для выявления нервных клеток, содержащее г/л: метиленовый синий 6,0; хлористый натрий 9,0; хлористый калий 0,5, хлористый кальций 0,20; сернокислый кальций 0,20; сернокислый магний 0,30, двузамещенный фосфорнокислый натрий 0,08; однозамещенный фосфорно- кислый калий 0,08; кислый углекислый натрий 0,45; глюкоза 4,0, остальнревода, Готовят по примеру 1. На препарат культуры ткани ядер шва наносили 3 капли этого раствора и окрашивание проводили, как описано в примере 1.Спустя 5 мин краска включалась в глиальные клетки на периферии культуры, а нервные клетки начали выявляться к 10-1 минуте от начала окрашивания. Через 20 мин нейроны и их отростки были хорошо окрашены.Сравнительные данные по времени выявления клеток нервной ткани в зависимости от состава использованного средства на 1 л водного раствора представлены в таблице. Формула из обретения Средство для прижизненного выявления клеток нервной ткани, содержащее метиленовый синий, хлористый натрий и воду, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью физиологической оптимизации средства и возможности сокращения времени выявления, оно дополнительно содержит хлористый калий, хлористый кальций, сернокислый магний, двузамещенный фосфорнокислый натрий, однозамещенньд фосфорнокислый калий, кислый углекислый натрий и1317308 глюкозу при следующем соотношениикомпонентов, мас.7: О, 004-0, 008 0,004-0,008 0,30-0,60 0,75-0,90 0,03-0,06 0,011-0,020 0,05-0,030 Метиленовый синий Хлористый натрий Хлористый калий Хлористый кальций Сернокислый магний 0,03-0,045 0,2-0,4 ОстальноеКомпоненты 1 2 3 4 6,00 4,5 10 Метиленовый синий 9,00 8,00 ИаС 1 0,5 0,4 0,3 КС 1 0,20 0,14 0,11 0,30 0,20 0,15 0,08 0,06 0,04 0,08 0,06 0,04 0,45 0,30 0,35 4,0 3,0 2,0 Время окрашивания составов: 1 - 60 - 90 мин 2 - 20 мин;2 - 20 мин; 3 - 18 мин; 4 -. 20 мин,Составитель А. РыбинаТехред Л.Олейник Корректор М. Шароши Редактор В. Ковтун Подписное Заказ 2414/37 Тираж 776ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 СаС 1Мя 80иа,НРО 4КН Р 04ИаНСОГлюкоза Двузамещенный фосфорнокислый натрийОднозамещенныйфосфорнокислый калийКислый углекислыйнатрийГлюкозаВода Содержание компонентов, г, в составах