Состав для криоконсервации миелокариоцитов

(51)4 А 01 М ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Киевский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови иКиевский институт органической химииАН УССР(54) (57) СОСТАВ ДЛЯ КРИОКОНСЕРВАЦИИ МИЕЛОКАРИОЦИТОВ, содержащий идон, глюкозу, апирогенванную воду, отличающий- целью повышения жизнелокариоцитов в процессе еличения срока сохранениясвойств состава, состав держит натриевую соль сатрехзамеще нный фосфор- и аминокровин при следую- компонентов, г: поливинилпиррол ную бидистиллиро ся тем, что, с способности мие консервации и ув криопротекторных дополнительно со харной кислоты, нокислый натрий шем соотношении 17,0 - 20,0 10,0 - 11,0 ПоливинилпирролидонГлюкозаНатриевая соль сахарнойкислотыТрехзамещенный фосфоркислый натрийАминокровинАпирогенная бидистиллированная вода 0 - 2,2 1,0 - 1,1 5,0 - 6,0 До 100,0 мл ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯИзобретение относится к медицине, а именно к консервированию и трансплантации биологических тканей, в частности клеток костного мозга, и может найти применение в клиниках и станциях переливания крови.5 Целью изобретения является повышение жизнеспособности миелокариоцитов в процессе консервации и увеличение срока сохранения криопротекторных свойств состава за 1 О счет повышения криозащитных свойств состава и его стабильности благодаря дополнительному введению натриевой соли сахарной кислоты, аминокровина и трехзамещенного фосфорнокислого натрия.Состав содержит поливинилпирролидон 15 (ПВП), глюкозу, апирогенную бидистиллированную воду, натриевую соль сахарной кислоты (НССК), трехзамещенный фосфорнокислый натрий и аминокровин при следующем соотношении компонентовг;Голивинилпирролидон 17,0 - 20,020Глюкоза 10,0 - 11,0 Трехзамещенный фосфорнокислый натрий 1,0 -1,1Натриевая соль сахарнойкислоты 2,0 - 2,2Аминокровин 5 - 6Апирогенная бидистилированная вода Дс 100 мл Состав готовят следующим образом.Сухую навеску ингредиентов, входящих в раствор, растворяют в 50 мл апирогенной зо бидистиллированной воды, после чего прибавляют 5 - 6 мл аминокровина и доводят апирогенной бидистиллированной водой до 100 мл. Для более быстрого растворения колбу с содержимым можно подогреть. После полного растворения веществ раствор фиды руют, разливают во флаконы. Флаконы укупоривают, стерилизуют автоклавированием при режиме 1,2 атм 30 мин, рН раствора 5,7 6,6. Консервирующий раствор сохраняет свои криопротекторные свойства на протяжении 24 мес. При консервировании миелокариоциты смешивают с консервирующим раствором в соотношении 1:1.Подготовленную к замораживанию взвесь клеток костного мозга пропускают через трансфузионную систему для переливания крови с капроновым фильтром в алюминиевый контейнер емкостью 160 мл. Затем контейнер с взвесью миелокариоцитов помещают в аппарат для программного замораживания, где скорость охлаждения клеток до температуры хранения биоматериала (- - 85 С, - 196 М) осуществлялась по ранее установленной программе. После оттаивания контейнера с костным мозгом в водяной бане при 40 С число морфологически сохранных клетоек по пробе Шрека составляет 91,2+-0,9.Согласно изобретению были приготовлены составы, рецептуры которых приведены в табл, 1 (составы 1 и 5 содержат ингредиенты в запредельных концентрациях (меньше минимальных и больше максимальных).Результаты испытаний составов приведены в табл. 2.Из табл. 2 видно, что предлагаемый консервирующий состав для миелокариоцитов (2,3,4) обладает лучшими криопротекторными свойствами по сравнению с известным, так как позволяют сохранить морфологическую сохранность клеток в процессе консервир ова н ия до 92 о.Состав 1, где концентрации ингредиентов меньше минимальных, не обеспечивает высокук защиту миелокариоцитов в процессе замораживания-оттаивания (82 Я). Концентрации ингредиентов больше максимальных (состав 5) снижают жизнеспособность миелокариоцитов после замораживания-оттаивания (83 О,).Результаты исследований, характеризующие стабильность консервирующего состава на этапе хранения, представлены в табл. 3.Из табл. 3 видно, что криоконсервирующий раствор для миелокариоцитов, содержащий ПВП, НССК, глюкозу, аминокровин и трехзамещенный фосфорнокислый натрий, хранившийся в стеклянных бутылках для крови при 20 - 25 С, остается стабильным в течение 24 мес по физико-химическим и биологическим показателям биологический контроль свидетельствует что раствор стерильный, апирогенный и не токсичный, в то время как известный консервирующий состав сохраняет свои физико-химические свойства при 2 - 4 С в течение 6 мсс. Реакция на подлинность ПВГ 1, НССК, глюкозы, аминокровина и фосфатов в растворе положительная.Предлагаемый состав для низкотемпературного консервирования миелокариоцитов повышает жизнеспособность клеток в процессе их консервирования.1246967 Таблица 1 Содержание ингредиентов (г) в составах Компоненты Пиливинилпирролидон(ПВП) 20,0 19,0 21 16,0 170 11,0 12 10,5 9,0 1 С,О Глюкоза Натриева сольсахарной кислоты 2,3 2,2 2,1 2,0 1,0 7,0 6,0 5,5 4,0 5,0 Аминокровин 1,2 10,5 1 0,9 1,0 На)РО) 12 Ндо Бидистиллированнаявода До 100,0 До 100, 0 До 100,0 До 100,0 До 100,0 Таблица 2 Сохранность клеток в процессе консервирования, Х составоветод исследования Т Суправитальная окраска12-ным раствором эозина 98 97 97 98 до замораживания 95 после размораживания 85 95 92 83 9 С 92 82 Таблица 3 Концентрация ппп Цветность рг Срок хранения, мес. Вязкость (относительная) глюкозы Свежеизготовленный ( =5) 6 мес ( 9 мес ( 12 мес (