Способ стимуляции иммунного ответа

Номер патента: 1202108

Авторы: Бартова, Елистратова, Кульберг, Маргулис

ZIP архив

Текст

СООЭ ОЗЕЕТСКИХСОЦИАЛИСТ ИЧЕСЙ ИХРЕСПУБЛИК 4 А 61 НИ к двтоескОм ВИДКтвЛьСтв Ю ЬЭ УДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ ИСАНИЕ ИЗО(71) Ордена Трудового Красного Знмени научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологим. Почетного акад. Н.Ф.Гамалеи(54) (57) СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ИММУННОГО ОТВЕТА ХН 71 ТКО, включающий одновременное добавление в культуру клеток селезенки кролика антигена и иммуностимулятора с последующим учетом количества антителообраэующнх клеток о т л ич а ю щ к й с я тем, что, с целью усиления антителообразования в качестве иммуностимулятора используют пептид с мол.м.500-2000 дальтон полученный в результате протеолиэа папанном фрагмента иммуноглобулинаф, 1 120Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, а именно к способам усиления иммунного ответа в культуре клеток (ин витро) п ч 1. го.Целью изобретения является усиление антителообраэования клеток селезенки в культуре тканей с помощью Р(аЪ ) -фрагмента иммуноглобули 2на С.П р и м е р 1. Получение пептида.Р(аЬ ) -фрагмент получают перева 2риванием ХяС кролика пепсином в 0,05 М ацетатном буфере на 0,15 Мо МаС, рН 4,1 в течение 18 ч при 37 С, Соотношение фермент-субстрат 1:50. Полученный гидролизат диализуют против 0,15 М ИаИ, подвергают хроматографии на колонке с сефадексом Ги концентрируют на системе Аппсоп с использованием фильтра РМ.Полученный Р(аЬ )2 -фрагмент диали.зуют против 0,15 М НаС 1 рН 7,0 в течение 24 ч при 4 С. Концентрацияобелка составляет 1 О мг/мл, объем 3 мл. К раствору фрагмента добавляют папаин, 3-кратно перекристаллизованный в 0,05 М фосфатном буфере рН 6,8, содержащем 0,01 М 2-меркаптоэтанол (Яегча). Соотношение фермент-субстрат составляет 1:50. Смесь инкубируют при 37 С в течение 10 ч, затем папаин инактивируют добавлением 0,05 М монойодацетата натрия с последующей инкубацией пробы при 20 С в течение 1 ч, Гидролизат пропускают через мембранный фильтр (Магно) РМО (Ашсоп). Фильтрат концентрируют с помощью мембранного фильтра Рдай Ео ИМ,5 (Ашсоп). Оставшийся над фильтром материал исследуют биуретовым методом на содержание пеп 2108 2тида (пептидов), используя в качестве стандарта дипептид глицил-лейцин.Количество полученного ниэкомолекулярного стимулятора составляло250 мкг.Постановка основного опыта.Клетки селезенки (5 млн/мл) куль"тивируют в среде ВРМ 1-1640 с О/- ной аутологичной сывороткой и в приьЯ10 сутствии 5 10 М меркаптоэтанолаи глютамина. В каждую культуру вносятпо 2,5 10 эритроцитов барана. Вопытные культуры дополнительно вносят по 5 мкг полученного продукта,который предварительно стерилизуютпутем Фильтрации через милипоровыйфильтр СЗИ-р 02500,СЯ О, 22 М, В другиекультуры клеток селезенки кроликавносят по 500 мкг Р(аЬ )-фрагмента 20 или по 500 мкг высокомолекулярногопродукта гидролиза Р(аЬ ) -фрагментапапаином, выделенного при хроматогра.фии гидролизата на сефадексе Г(папаиновый РаЬ-фрагмент). В конт рольные культуры добавляют толькоэритроциты барана. Все культуры стаовят в термостат при 37 С в атмосфере 95 воздуха плюс 5 . СО . Через5 сут. определяют число антителопроЗ 0 дуцирующих клеток по прямому методулокального гемолиза в геле агара,Положительный эффект изобретенияподтверждается данными, приведеннымив таблице.Таким образом, предложенный способ позволяет увеличить антителообразование в культуре клеток селезенки в 100 раз по сравнению с ранееизвестным.Способ имеет практическое значение в биотехнологии при разработкеметода получения антител в большихмасштабах.1202108 Зависимость количества антителопродуцирующих клеток от типа и концентрациифрагмента Тип фрагмента Р (аЬ), 500 РаЪ 500 12 ф 1,7 51+ 7,8 Составитель И. Башкаев Редактор П.Горькова Темро М.Ходаиич Корректор Л.ПатайТираж 660 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР во делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5Заказ 3318/2 Производственно-полиграфическое предприятие, г.узгород, ул.Проектная,4 Эритроцитыбарана5 10 ь продуктпротеолизаР(аЪ )фрагмейта Концент- Количество рация АОК на фрагмен млн,-клеток та,мкг/мл 1 ф 0,6 8 + 3,5 29 ф 2,3

Смотреть

Заявка

3757837, 25.06.1984

ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ ИМ. ПОЧЕТНОГО АКАД. Н. Ф. ГАМАЛЕИ

КУЛЬБЕРГ А. Я, БАРТОВА Л. М, МАРГУЛИС Г. У, ЕЛИСТРАТОВА И. А

МПК / Метки

МПК: A61K 39/00

Метки: иммунного, ответа, стимуляции

Опубликовано: 15.06.1986

Код ссылки

<a href="https://patents.su/3-1202108-sposob-stimulyacii-immunnogo-otveta.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ стимуляции иммунного ответа</a>

Похожие патенты