Способ диагностики инфаркта миокарда

(51)4 А 61 В 10/00 е туальные волтубо, 1980,76, с 0-42ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ(71) Волгоградский государственныимедицинский институт(54)(57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИНФАРКТМИОКАРДА путем постановки реакцииторможения миграции лейкоцитов с использованием в качестве антигенамиокардиального белка с последующимопределением индекса миграции, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с цлью повышения точности способа, вкачестве антигена используют миокардиальные белки актин и тропомнозинв концентрации 25-50 мкг/мл и призначении инцекса миграции ниже 807диагностируют инфаркт миокарда.1178412 Средний вес эон миграции с антигеномСредний вес эон миграции без антигена Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано в клинической практике для диагностики инфаркта миокарда.Целью изобретения является повы шение точности способа.Способ осуществляют следующим образом.Получают актин и тропомиозин из миокарда, взятого иа аутопсии у эдо рового человека не подзнее 6-8 ч пос. ле несчастного случая.Актин выделяют по методу Хайтлиной С.Ю. Экстракцию актина осуществляют из приготовленного ацетонового 15 порошка миокарда, который может храниться в герметически закрытой посуде,при й 0-4. С в течение 6-8 мес,оБелок очищают высаливанием сульфатом аммония при 257-ном насыщения, 20Тропомиозин выделяют по методу Бейли. Полученный тропомиозин может храниться при 703-ном насыщении сульфатом аммония при й 0 - +4 в течение 6-8 мес. 25Перед использованием в РТМЛ проводят изоэлектрическое осаждение белка при рН 4,5 с одновременным диализом до полного удаления сульфат- иона. Гелеобразный осадок растворяют З 0 в бидистиллированной воде с рН 7,0. Готовые стерильные растворы актина и тропомиозина сохраняются при с 0 ;4 С (актин 8-10 сут, тропомиозин 4-6 сут,).35Белки применяют в концентрации 25-50 мкг/мл, так как в других соотношениях они оказывали неспецифи. ческий эффект торможения миграции лейкоцитов доноров.РТИЛ проводят по методу ЗАВЕ Я х Вепд 1 хеп, в модификации В.Я.ГергерРеакцию оценивают положительной при индексе миграции ниже 80%, а свыше 807 - отрицательной.П р и м е р 1, Больной Р.,55 лет. На ЭКГ при поступлении заре гистрирована полная блокада обеих ветвей левой ножки пучка Гиса, по которой было трудно сделать заключение о наличии свежих очаговых изменений миокарда. Активность Фермен тов сыв,кротки крови была в пределах нормы. При постановке теста торможения миграции лейкоцитов с использова. та. Кровь забирают из локтевой веныили подключичного катетера сухимстерильным шприцем в количестве 1015 мл и переносят в стерильную силиконированную пробирку, в которойнаходится гепарин в соотношении25 ед. на 1 мл крови. Кровь быстроперемешивают 2-3 раза и ставят втермостат при 37 на 1 ч. Полученную плазму осторожно отсасывают пастеров. ской пипеткой, центрифугируют 7 минпри 1000 об/мин для получения лейко.взвеси, после чего надосадок удаляют. Полученный лейкоцитарный осадоктрижды ресуспендируют в среде У 199и осаждают, центрифугируя по 7 минпри 1000 об/мин. В клеточный осадоквносят по 0,1 мл культуральной жидкости (смесь среды Р 199 и бычьейсыворотки 10:1) и заполняют стеклянные капиляры с внутренним диаметром0,8-1 мм и длиной 10 см. Последниезапаивают с одного конца парафиноми центрифугируют 5 мин при 1000 об//мин. Затем их обрезают с двух сторон на границах жидкости и парафинатаким образом, чтобы получились одинаковые Фрагменты (4-5 мм), которыенемедленно погружают на дно камеры,заполненной культуральной жидкостьюбеэ антигена (контроль) и с антигеном (опыт). Капиляры Фиксируют напредварительно нанесенной стерильным вазелином полоске. Камеры герметически закрывают стеклами 2424 мм и ставят в термостат при 37 на 24 ч,После инкубации зоны миграции зарисовывают, проецируя на рентгеновскую пленку с помошью фотоувеличителя (в масштабе 1:4), вырезают ивзвешивают на торзионных весах, Индекс миграции вычисляют по Формуле нием в качестве антигенов актина и тропомиозина получены положительныерезультаты (индекс торможения миграции составил 67,4 и 77,57 соответственно,что свидетельствует о ГЗТ кэтим белкам, а также позволяет предположить развитие повторного инфаркта миокарда, Учитывая клиникобиохимические показатели и динамику ЭКГ(исчезновение на вторые сутки полной блокады левой ножки пучка Гисаи появление крупноочаговых измененийв передке-перегородочной области леСоставитель М.ПозднякРедактор Т.Митейко Техред М.Кузьма Корректор Е.Сирохман Заказ 5579/4 Тираж 722 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, ЖРаушская наб д.4/5 Филиал ППП "Патент", г.Ужгород, ул.Проектная, 4 3 11 вого желудочка) был подтвержден диагноз острого повторного крупноочагового инфаркта миокарда передне-перегородочной области левого желудочка. П р и м е р 2. Больной И, 55 лет, При поступлении в инфарктный центр на ЭКГ отмечена депрессия интервала Т и инверсия Т,1 , Проведенная3реакция торможения миграции лейкоцитов не выявила ГЗТ к актину и тропомиозину (индексы миграции 108,6 и 101,2 Е соответственно). Биохимические показатели сыворотки крови были без отклонения от нормы. При поступлении болевой синдром бып купирован наркотическими аналгетиками и в дальнейшем не рецидивировал. Наблюдение за больным с учетом характера клиники течения заболевания, иммунно-биохимических и инструментальных тестов позволило отвергнуть предварительный диагноз острого инфаркта миокарда. У больного имела место нестабильная стенокардия. 78412 4П.р и м е р 3. Больной К.,73 года. В кардиореанимационном отделении на ЭКГ определяются рубцовые изменения в передне-перегородочсной и задне-диафрагмальной областилевого желудочка, На ЭКГ признакиповторного инфаркта миокарда былинеубедительными. Показатели иссле-дования ферментов сыворотки крови 1 О (ЛДГ = 157 е/л, КФК = 40 е/л) соответствовали нормальным параметрам.При постановке РТМЛ с актином, тропомиозином и миозином были полученыследующие результаты, 7: индекс миграции с актином 53, тропомизином66,5, миозином 86, что свидетельствует о появлении ГЗТ к актину и тропомизину, В процессе наблюдения забольным на 4 сут на ЭКГ зарегистрирована отчетливая динамика повторного инфаркта миокарда в зонерубцов заднедиафрагмальной областилевого желудочка, Проведенная РТМПс актином, тропомиозином и миозином 25 дала следующие показатели: индексмиграции 71,8, 63,3, 65,1 Х соответственно.