Среда для разбавления и замораживания спермы быков

СОНИ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН ЕЛЬ 1,32 - 0,30 0,03 - 0,14 6 - 15 р 15 - 10 З Остальное ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССС ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫ ОПИСАНИЕ ИЗОБР К АВТОРСКОМУ(72) Е. М. Платов и В. И. Деряженцев (71) Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела(56) 1. Авторское свидетельство СССР411868, кл. А 61 Р 7/02, 1974.2. Авторское свидетельство СССР549148, кл. А 61 Р 7/02, 1977.3, Соколовская И. И., Фарид. Действие натрий-кальциевого внутрикомплексного соединения ЭДТУК и кокарбоксилазы при замораживании семени быка. - Животноводство, 1973,11, с. 53 - 54.(54) (57) СРЕДА ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ И ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ БЫКОВЯО 1155262 А включающая лактозу, источник кальция, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, желток куриного яйца, глицерин и воду, отличающаяся тем, что, с целью лучшего сохранения биологической полноценности сперматозоидов при замораживании, среда дополнительно содержит натрий двууглекислый, а в качестве источника кальция - гидрат окиси кальция при следующем соотношении ингредиентов, мас. о:Лактоза 5,0 - 8,0 Гидрат окиси кальция 0,20 - 0,05 Этилендиамннтетраацетат двунатриевыйдвуводныйНатрий двууглекислыйГлицеринЖелток куриного яйцаВодаВведение в состав среды дефицитной кальций-динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты и кокарбоксилазы делает среду дорогостоящей и трудновыполнимой,Целью изобретения является лучшее сохранение биологической полноценности сперматозоидов при замораживании,45 Поставленная цель достигается тем, что среда, включающая лактозу, источник кальция, этилендиа минтетраацетат двунатриевый двуводный, желток куриного яйца, глицерин и воду, дополнительно содержит 50 Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных.Известна среда для разбавления и замораживания спермы животных, включающаядисахара, желток куриного яйца, глицерин,внутрикомплексные соли щелочно-земельных металлов - кальция и магния с аминополиуксусными кислотами, серную кислотуи сульфат калия 1,Известна также среда, дополнительно 10включающая двунатриевый двуводный этилендиаминтетраацетат, а в качестве источника магния и кальция - лимоннокислыйаммоний 2.Недостатком этих сред является то, чтоони не обеспечивают полноценного сохранения сперматозоидов быков,Известна среда для разбавления и замораживания спермы быков, включающая лактозу, источник кальция этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, желтоккуриного яйца, глицерин и воду 3.Однако эта среда обладает недостаточным холодозащитным действием, так какв ее составе содержится кальцийдинатриеваясоль этилендиаминтетрауксусной кислоты,соотношение кальция и натрия в которой 25не является оптимальным для защитногодействия спермы быков от холодового ударакак при охлаждении от 30 - 35 С до 0 - 4 С,так и при замораживании от 0 до - 196 фС.В среде наблюдается избыток кальция.Важно, чтобы в период адаптации иэквилибрации спермы в диапазоне температур от 30 до 0 - 4 С и при замораживаниисинтетическая среда предохраняла сперматозоиды от вредных последствий изменения концентрации водородных ионов, которые имеютместо в слабозабуференных синтетическихсредах. Указанная среда не содержит солевых компонентов, придающих ей буферныесвойства, и применима лишь при низкихстепенях разбавления спермы быков (1:19)при относительно высоком содержании подвижных сперматозоидов в дозе 10 - 15 млнчто экономически не эффективно, натрия двууглекислый, а в качестве источника кальция - гидрат окиси кальция при следующем соотношении ингредиентов, мас, Я:Лактоза 5,0 - 8,0 Гидрат окиси кальция 0,20 - 0,05 Этилендиаминтетраацетат двунатриевыйдвуводныйНатрий двууглекислыйГлицеринЖелток куриного яйцаВода 1,32 0,300,03 - 0,146 - 1515 - 10Остальное Пример. Приготовили три состава среды(см. табл. 1).Каждый состав среды испытывался в лабо-раторных условиях на подвижность и выживаемость сперматозоидов после оттаиванияспермы (число проб 10). Полученные результаты представлены в табл. 2.Оптимальный вариант данной среды,вес. Я; лактоза 6,4; гидрат окиси кальция 0,12; этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный 0,66; натрий двууглекислый 0,08; глицерин 7,5; желток куриногояйца 14,2 имеет физиологически нормальную концентрацию водородных ионов (рН==6,8) и более высокие криозащитные свойства в сравнении с другими испытаннымивариантами. Подвижность после оттаивания=2,3 - 2,5) превышает этот показатель вдругих вариантах.Сравнительная эффективность предлагаемой среды с известной приведена в табл. 3.В результате осеменения 691 телки спермой быков, замороженной в разработанной среде, получили при содержании 5,10 -и 20 - 25 млн. подвижных сперматозоидовв дозе стельность 58 - 75, 62 - 74 и 62 - 76 ЯСтельность в контрольной среде соответственно составила 44 - 60, 57 - 68 и 60 - 67 Я,Среда обладает высокими холодозащитными свойствами при больших степеняхразбавления, т. е. малом содержании подвижных сперматозоидов в дозе, в результате чего повышается оплодотворяющаяспособность оттаянной после замораживания спермы быков, содержащей 5 млн. подвижных сперматозоидов в дозе, на 14 - 15 Яв сравнении с контролем. Эффективность использования спермы повышается в 2 - 5 раз,так как оплодотворяющая способность спермы замороженной в предлагаемой среде исодержащей 5 млн. подвижных сперматозоидов, не уступает сперме, замороженнойв контрольной среде и содержащей 10 и 20 -25 млн, подвижных сперматозоидов,1155262 4Таблица 1 Состав Компоненты 8,0 6,4 5,0 Лактоза 0,05 0,12 0,20 Гидрат окиси кальция Этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный 0,30 0,66 1,32 0,14 0,08 Натрий двууглекислый 0,03 15,0 7,5 6,0 10,0 14,2 15,0 До 100 До 100 До 100 Таблица 2 Абсолютный показатель выживаемости в оттаянной сперме,условные единицы, при 2 - 4 оС Состав среды 42 + 007 Контроль Таблица 3 Режим замоПодвижных спермиев в дозе, млн,Из них стельных Среда раживания спермыОбычный 10 100 68 20 65 101 ВНИИПИ Заказ 2938/5 Тираж 722 ПодлисиоеФилиал ППП сПатентэ, г. Ужгород, ул, Проектная, 4 ГлицеринЖелток куриного яйцаВода дистиллированная Подвижность сперматозоидов после оттаивания спермы, баллы (5 параллельных образцов в каждой пробе, т, е,5 х 10 - 50)М+в 44 + 0,10 4,6 + 0,09 43 + 0,13 243 + 21,6 227 + 22,3 204 + 32,6 179 + 12,0 70,5 + 5,2 71,2 + 3,7 68,0 + 4,7 60,3 + 4,7