Среда для разбавления и замораживания спермы хряков

,04-0,3,0-4,ДА ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ СПЕРМЫ ХРЯКОВ, вклю углерода - глюкозу, 5-водный, этилендиа вунатриевый двуводтил)аминометан, сул церин и липидный(54)(57 И ЗАМОР РЕ ИЯ чающая источникцитрат натрия 5минтетраацетатный, трис(оксимфат аммония, глкомпонент, о ттем, что, с целвыживаемости и До т л ный и чаю д экстрак держит подсо соотношении и ч ю лучшего сохранениплодотворяющей ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ АВТОРСИОМУ СВИДЕТ(71) Институт зоологии и физиологии АН Молдавской ССР(56) 1. Авторское свидетельство ССС У 549148, кл. А 61 Р 7/02, 1977.2. Авторское свидетельство СССР У 626773, кл, А 61 0 7/02, 1978.3. Кононов В.П., Голышев Н,А., Хачатуридзе Э.А. Среда для заморажи вания спермы хряков, - "Свиноводство",1975, Р 11, с. 25-26 (прототип) пособности сперматозоидов при замоаживании, в качестве липидного комонента среда содержит водный экс" ракт подсолнечного масла, а в каестве источника углерода дополниельно содержит сорбит при следующем оотношении компонентов, мас.7.:Сорбит 2,5-3,5 Глюкоза 0,6-0,8 Цитрат натрия5,5-водный 0,2-0,3 Сульфат аммон 0,2-0,3 Этилендиаминт ацетат двунатриевый двуводныйТрис(оксиметил)аминометанГлицеринВодный экстрактподсолнечногомасла2, Среда по п. 1, щ а я с я тем, что в подсолнечного масла с нечное масло и воду в 0,4-0,6:1.Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, в частности к синтетическим средам для разбавления изамораживания семени преимущественнохряков.Известны среды для разбавленияи замораживания семени животных,включающие дисахара глюкозу, окисьмагния, окись кальция, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный,лимоннокислый аммоний, гЛицерин, желток куриного яйца и воду И ,Недостатком таких сред являетсяотсутствие антиоксидантов, предотвра щающих развитие в сперматозоидахперекисного окисления липидов.Известна также среда для разбавления и замораживания семени сельско.зозяйственных животных, например 2 Охряков, содержащая дисахарид, моносахарид, этилендиаминтетраацетатдвунатриевый двуводный, окись кальция, окись магния, аммоний лимоннокислый, глицерин, желток, воду и антиоксиданты (2,б-дибутил-п-крезоллибо 2-(и 3)-бутил-гидрооксианизол) 12 Д .Недостатком указанной среды является то, что входящие в ее составантиоксиданты недостаточно эффективны для применения в составе криоза"щитных сред из-за нерастворимостив воде и дефицитности.Известна среда для разбавления35и замораживания спермы хряков, включающая источник углерода - глюкозу,цитрат, натрия 5,5-водный, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, трис(оксиметил)аминометан, сульФат аммония, глицерин и липидныйкомпонент 13 .1Недостатком известной среды является то, что она не обеспечиваетустойчивость мембран сперматозоидовпри замораживании и длительном хранении семени вследствие отрицательного влияния желтка, а также отсутствия природных антиоксидантов, предотвращающих вредные последствияперекисного окисления липидов. Желток к тому же является потенциальнымносителем паталогии и отличаетсянепостоянным химическим составом,что в свою очередь сказывается настабильности получаемых результатов,Морфофизиологические показателизамороженно-оттаянного семени в зна чительной степени связаны со ерокомхранения яиц. Кроме того, желток куриного яйца повышает кислотность среды, что вызывает необходимость применения в составе сред дополнительных буферных систем и соответственно дополнительных затрат.Введение в состав среды дефицитных дорогостоящих компонентов - желтка куриного яйца и Фруктозы делает среду дорогой и труднодоступной.Целью изобретения является улучшение сохранения выживаемости и оплодотворяющей способности сперматозоидов при замораживании 0,3-04 Поставленная цель достигается тем, что среда для разбавления и замораживания спермы хряков, включаю щая источник углерода - глюкозу, цитрат натрия 5,5-водный, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, трис(оксиметил) аминометан, сульфат аммония, глицерин и линидный компонент, содержит в качестве липидного компонента водный экстракт подсолнечного масла, а в качестве источника углерода дополнительно содержит сорбит при следующем соотношении компонентов, мас. :Сорбит 2, 5-3,5Глюкоза 0,6-0,8Цитрат натрия5,5-водный 0,2-0,3СульФат аммония 0,2-03Этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводныйТрис(оксиметил)аминометан 0,04-006Глицерин 3,0-40Водный экстрактподсолнечногомасла До 100Причем водный экстракт подсолнечного масла содержит подсолнечное масло и воду в соотношении 0,4-0,6:1.Введение в среду водного экстракта подсолнечного масла вместо желтка куриного яйца обуславливает присутствие в растворе ненасыщенных жирных кислот (подсолнечное масло содержит 52-64. линолевой и 2-5 . линоленовой кислот)., которые способствуют увеличению выживаемости сперматозоидов и в конечном счете повышают оплодотворяющую способность семени.Кроме того, экстракт подсолнечного масла богат природными антиоксиданта-.13 4кой зкономической эффективности,П р и м е р. Среду для разбавления и замораживания семени сельскохозяйственных животных готовят следующим образом.В 1 л водного экстракта подсолнечного масла при комнатной температуре растворяют соответствующее количество компонентов среды (табл.1) для экспериментов взято 5 составов (сред). Затем среду доводят до температуры семени, предварительно выдержанного. в течение одного часа прн комнатной температуре, разбавляют семя средой в соотношении 1:1, выдерживают при +15 оС в течение 4 ч, затем охлаждают до +4 С в течениеочаса и замораживают при -100 С в пас рах жидкого азота на фторопластовой пластине, причем оттаивание ведут при +60 С. 11434,Т а б л и ц а 1 Состав среды, мас.% Трис(оксиметил)аминоГлице одный экстрактрин одсолнечногоасла ЭДТАнатриеваясоль Сульфат аммония Глюко Цитрат за натрия Сорбит Варианты метан 1 2,0 0,35 0,15 0,15 0,2 2,5,2 2,5 0,6 0,2 0,2 0,3 3,03 3,0 0,7 0,25 0,25 0,35 3,54 3,5 0,8 0,3 0,3 0,4 4,05 4,0 1,0 0,4 0,4 0,5 0,07 5,0 Д, 100 До 100 До 100 До 100 0,0030,040,050,06 До 100 Для получения экстракта подсолнеч. . ного масла последнее (ГОСТ 1129-73) 4 О встряхивают в течение 1 ч с дистилли. рованной водой в соотношениях, представленных в табл. 2, затем центрифугируют при 1,5-2,0 тыс. об/мин в течение 15-20 мин, либо оставляют в сосуде экстрагирования на 1 ч для разделения слоев, верхний слой отсасывают водоструйным насосом, а нижний используют для приготовления син-тетической среды.Т а б л и ц а 250 Продолжение табл. 2 Количество, ч. 0,5 0,6 Количество, ч. 0,25 0,4 ми (51 мг% альфа-токоферола) и следовательно, предотвращает вредные последствия перекисного окисления липи-. дов, что в свою очередь ведет к стабилизации мембран и сохранению целостности акросомы сперматозоидов при замораживании"оттаивании семени. Снижение утечки ферментов в плазму . также ведет к повышению оплодотворяющей способности сперматозоидов10Эффективность от использования предлагаемой среды достигается за счет высоких криозащитных свойств ненасыщенных жирных кислот и присутствия природных антиоксидантов, 15Сорбит значительно снижает себестоимость предлагаемой среды по сравнению с известной, что наряду со снижением себестоимости среды за счет применения водного экстракта подсол О нечного масла помогает достичь высоПодсолнечного масла воды Подсолнечного масла воды Эффективность применения разработанной среды оценивают по подвижности, выживаемости при 37 С, процентуОинтактных акросом и оплодотворяющей способности сперматозоидов после замораживания-оттаивания семени.Результаты испытания пяти вариантов сред представлены в табл. 3 и 4.+ .НЮ СОл лч м Ф Фм л л Ю Ю н н о а л а л Эф ф СО 0л л +1 +1 О Ол л О Г У Чф ФО СЧ Ч л л Ю Ю + Н Ю Ю л л и В1143413 ОФ е ФО О Фб %0 а е + + 1- ох Съемф оа о сСаа оо ы сч м Оь еРлы 1.Оаоофс й х хха1 91хо1 ф1 Х фу а1 Ффф1М1 Х3СО Юсч сч аа а аН Н +1осч л Ое сЧйЧ я.яа а ял ъо РЧ л а е Ю О Юм . Р сО Ю Ю Ю О О а а а а е Ю Ю ОО Оф СЧ Р 1 Ф аа Ю Ю Ю1143413 10 Составитель М.БелоусоваРедактор О.Черниченко Техред С.Легеза Корректор В.Бутяга Заказ 795/5 Тираж 722 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 Оплодотворяемость свиноматок прииспользовании семени, замороженногов предлагаемом составе среды посравнению с известным, повышаетсяна 31,62, Ожидаемый экономический 5эект от использования предлагаемойсреды составляет Я 58 тыс. рубна 1000 свиноматокПрименяемые в предлагаемой средекомпоненты являются дешевыми и недеФицитными, Это позволяет получитьдополнительный экономический эФФект в сумме 245 руб. на 1000 свинбматок за счет сахаров и экстракта.Применение водного экстракта подсолнечного масла в составе синтетических сред для разбавления и замо" раживания семени сельскохозяйственных животных позволяет заранее проверять пригодность больших партий масла к применению, что исключает нежелательные случайности в работе, имеюшие место при использовании желтка куриного яйца.