Способ определения холодоустойчивости растений огурца

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ А ИК ИСАНИ РЕТЕНИЯ ЛЬСТВУ14 Л. М. К инина оват. 16, вып. 4,Ломоно ний.НИИОХ, вып, 5, 1975,00 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕ(54) (54) СПОСОБДОУСТОЙЧИВОСЦА, включающийв регулируемыхферм ентативнойтканей и степени ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХОЛОТИ РАСТЕНИЙ ОГУР- проращивание семян условиях, определениеактивности растительнйх ее изменения под дей,801149897 сю А 01 б 7/О; А 01 Н 1/04 ствием пониженных температур, отличаюи 1 ийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, сокращения расхода семенного материала и сохранения растений для дальнейшего выращивания, проращивание семян в течение 4-5 дней проводят в оптимальных условиях, после чего часть полученных растений продолжают выращивать при 14-17 С в течение 3-4 сут, а остальные - ч прежних условиях, затем определяют активность нитратредуктазы и по отношению ее . активности в тканях опытных к активности в тканях контрольных растении судят о холодоустойчивости растений, при этом при значении отношения больше единицы растения относят к холодоустойчивым, а при отношении меньше единицы - к теплолю- р бивым.Изобретение относится к способам определения физиологических параметров растений и может быть применено в растениеводстве и овощеводстве при селекционном отборе растений на холодоустойчивость, в частности, растений огурца.Известен способ определения холодостойкости растений огурца по количеству сока, отжимаемого иэ листьев. Получают сок из 3-5 листьев охлаждаемых растений в центрифужном микропрессе и по количеству сока судят об изменении холодостойкости 11.Недостатками способа являются невозможность определения холодоустойчивости различных сортов, а также длительность выращивания, (30-35 дней).Известен также способ определения устойчивости растений огурца к охлаждению на стадии проращивания семян. Согласно способу семена огурца проращивают при низкой температуре 2-5 С и определяют в проростках активность фермента липазы и содержание аскорбиновой, кислоты. Различия в уровнях этих показателей .у сортов связывают с уровнем их холодостойкости 12.Однако для проведения биохимического анализа приходится уничтожать используемые проростки целиком (по весу 5-10 г), что неприемлемо для селекционных целей, так как количество семян исследуемых образцов ограничено и важно сохранить растения для дальнейшего выращивания и изучения. Кроме того, прорастание семян при такой низкой температуре длительно (15 дней и более в зависимости от сорта), что удлиняет сроки определения.Цель изобретения - ускорение и упрощение определения холодоустойчивости растений огурца, сокращение расхода семенного материала и сохранение растений для дальнейшего выращивания.Поставленная цель достигается тем, что проращивание семян в течение 4-5 дней проводят в оптимальных условиях, после чего часть полученных растений продолжают выращивать при 14-17 С в течение 3-4 сут, а остальные - в прежних условиях, затем определяют активность нитратредуктазы и по отношению ее активности в тканях опытных к активности в тканях контрольных растений судят о холодоустойчивости растений, при этом при значении данного отношения больше единицы растения относят к холодоустойчивым, а при отношении меньше единицы - к теплолюбивым.Предлагаемый способ осуществляется следующим образом,Семена каждого из исследуемых сортов (14-16 шт) проращивают двое суток в термостате при 25-27 С, затем проростки высаживают на воду, а через одни сутки -45 Пример. Осуществление предлагаемого способа проводилось на девяти сортах огурца, обладающих заведомо известной холодоустойчивостью (Муромский 36, Нежинский 12, Алтайский ранний 166, Ташкентский 86, Изящный) и неизвестных по устойчивости к холоду тепличных формах (Мар. финский, Манул, Московский тепличный, Весна). Согласно способу выращивали по две группы растений каждого сорта, а именно при 27/20 С (контроль) и 17 С круглосуточно (оыпт). В возрасте девяти дней со дня замачивания семян делали высечки в семядолях каждой группы и определялиактивность фермента нитратредуктазы. За.тем вычисляли показатель холодоустойчина раствор питательной смеси по три растения в 1 литровые сосуды, Растения выращивают в камере искусственного климата при освещенности 18-20 тыс, лк, температуре 25-27 С днем и 20-22 С ночью, световом дне 14 ч до 4-5 дневного возраста с момента замачивания семян. Затем сосуды с растениями каждого сорта разделяют на две группы, одну из которых оставляют в прежних условиях (оптимальных), а вторую переносят в камеру с круглосуточной температурой 14-17 С, Через 3-4 сут делают высечки диаметром 5 мм из семядольных листьев проростков контрольного и опытного вариантов.15Из высечек берут навеску 200 мг и помещают в темные пузырьки с завинчиваю- щейся крышкой с 5 мл инкубационной среды, содержащей 0,1 М фосфатный буфер рН 7,5, 0,02 М нитрат калия, 5 О/О-ный про панол и 0,08%-ный хлорамфеникол. Пузырьки помещают в термостат на 1 ч при 30 С. Реакцию останавливают добавлением 0,2 мл уксусной кислоты (4 = 1,04) . Содержание образующегося в реакции нитрита определяют в среде инкубации. Для этого к 0,3 мл пробы (+1,2 мл воды) добавляют по 1 мл раствора 0,5% сульфаниловой кислоты и 0,05% раствора 1-нафтиламина.Через 20 мин интенсивность окрашивания растворов определяют на спектроколоримет ре при 540 нм. Активность нитратредуктазы выражают в микромолях нитрита на 1 г сырого вещества навески.Отношение активности нитратредуктазы в ткани опытных растений (А) и активности фермента в семядолях контрольных растений (А) используют как показатель холодоустойчивости К=АкОпределение найденного показателя у сортов, выращиваемых в открытом грунте, с известной характеристикой холодостойкос ти, проверенной многолетними полевымииспытаниями, показало, что у холодоустойчивых сортов К больше единицы, а у теплолюбивых меньше единицы.1149897 Активность нитратредуктазы в семядолях растений огурца при различном температурном режимеКритерийАкК= -- Ст ьюденАота Активностферментапри пониженной Активностьферментапри оптимальной Сорт22,82 25,33 19,95 20,24 17,51 25,60 32,86 22,67 ВеснаМарфинский то же Составитель Е.ШкрадюкТехред И. Верес Корректор В. БутягаТираж 743 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий13035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д, 4/5филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Редактор А. Долииич Заказ 1976/1 вости для каждого сорта (гибрида). У холодостойких сортов открытого грунта Муромский 36 Алтайский ранний 166, Изящный показатель холодоустойчивости К превышает единицу -1,24; 1,23; 1,07 соответственно. У теплолюбивого сорта Нежинский 12 и жаростойкого сорта Ташкентский 86 показатель холодоустойчивости меньше единицы. Тепличные гибриды Манул, Московский тепличный, Весна и сорт Марфинский, для которых характеристика холодоустойчивости неизвестна, имеют четкие различия согласно предлагаемому способу. Гибрид Манул устойчив к охлаждению (К=1,11), остальные неустойчивы. В таблице приведена активность нитраредуктазы в семядолях растений огурца при различном температурном режиме. Муромский 36 холодоустойчивый Алтайский ранний 166 холодоустойчивый Ташкентский 86 жаростойкий Московский тепличный тепличный Применение предлагаемого способа определения холодоустойчивости растений огурца обеспечивает по сравнению с известными ускорение и упрощение определения холодоустойчивости в селекционном процессе, так как позволяет оценить холодоустойчивость на ранних этапах онтогенеза (фаза семядолей) с помощью определения одного показателя. Кроме того, обеспечивает сохран Оность семенного материала и растений, так как все растения, из которых берут высечки, в дальнейшем доращиваются до урожая; позволяет определять устойчивость к пониженной температуре тепличных сортов и гибридов, оценка холодоустойчивости которых 15 ранее не проводилась, что имеет большоезначение для овощеводства в защищенном грунте. 0,85 4,04 "1,074,441,11 13,820,78 5,870,62 6,12Оэ 77 13 ф 69 "