Способ диагностики хронического пиелонефрита

(51) Н АВТОРСКО УДЯРСТВЕНКЫЙ КОМИТЕТ СССР ДЕЛЯМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ ИСАНИЕ ИЗОБ ВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Кишиневский государственныймедицинский институт(54)(57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ПИЕЛОНЕФРИТА путем выявлениявозбудителя заболевания с помощьюреагента напредметном стекле, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью повышения чувствительностии специфичности диагностики, в качестве реагента используют суспензиюинактивированных стафилококков штамма Соуп 1, а возбудитель выявляютпо наличию их коагглютинации.Изобретение относится к медицине, преимущественно к способам лабораторной диагностики заболеваний.Известен способ диагностики хронического пиелонефрита путем выявления возбудителя заболевания с помощью реагента на предметном стекле 11.Однако известный способ характе- ризуется недостаточной чувствительностью и специфичностью, а также слоО жен при выполнении.Целью изобретения является повышение чувствительности и специфичности диагностики.Указанная цель достигается тем, 15 что согласно способу диагностики хронического пиелонефрита путем выявления возбудителя заболевания с помощью реагента на предметном стекле в качестве реагента используют сус. 20 пензию инактивированных стафилококков штамма Соуп 1, а возбудителя выявляют по наличию их коагглютинаСпособ осуществляется следующим 25 образом.Для получения 3-77-ной диагностической суспензии инактивированных стафилококков штамма Соап 1 делают смыв микробов из 3-4 пробирок со ско ЗО шенным агаром, промывают их на центрифуге при 3000 об/мин в течение 30 мин и ресуспендируют по объему осадка с последующим добавлением мер тиолята в концентрации 1;1000 - 1: 10000.3-8 мл свежей исследуемой мочи центрифугируют в течение 20-40 мин при скорости 1500 - 3000 об/мин. Микробный осадок отмывают 2-4 раза фиэ 40 раствором и ресуспендируют отмытые микробы мочи в Физрастворе до концентрации 3 - 15 ед. мутности. На предметном стекле смешивают по капле обоих препаратов и учитыва ют агглютинацию, по наличию которой в течение 2-3 мин определяют характерные для хронического пиелонефрита фиксированные на бактериях антитела.50П р и м е р. Инактивированную культуру стафилококков штамма Союап 1 получают путем смыва микробов из 4 пробирок со скошенным агаром, промывая их на центрифуге при 55 3000 об/мин в течение 30 мин и ресус. пендирования по объему осадка, чтобы получить 57-ную суспенэию, к которой добавляют мертиолят до концентрации 1:10000.Свежую мочу больных с бактериурией (100 тыс. и выше бактерий в 1 мл) в количестве 6 мл центрифугируют при 3000 об/мин 20 мин, Надосадок сливают, а микробный осадок двукратно про. мывают Физраствором на центрифуге и ресуспендируют в физрастворе, чтобы получить суспензию с мутностью 5-10 ед. Каплю полученной суспензии микробов наносят на предметное стекло и затем добавляют каплю диагностического препарата стафилококков Сожап 1. Быстро наступающая агглютинация указывает на наличие антител, Фиксированных на поверхности бактерий возбудителей пиелонефрита, Специфичность результатов устанавливается по отсутствию агглютинации кипяченой (в течение 2-3 мин для раз - рушения антител) суспензии микробов мочи. При бактериурии, происходящей из нижнего отдела мочевыделительной системы (воспаление мочеточников мочевого пузыря, уретры, простаты), выделяемые бактерии не покрыты анти- телами.Предлагаемый метод изучен одновременно с методом иммунофлюоресценции при обследовании 68 больных хроническим пиелонефритом и 42 больных с заболеваниями мочевого пузыря и простаты. Методом коагглютинации выявили бактерии, покрытые антителами, у 64 из 68 больных хроническим пиелонефритом или в 94,1+4,037 случаев, а методом иммунофлюоресценции положительные результаты получены только у 52 (76,5+6,547) больных. Кроме того, последним методом получены положительные результаты у 14,3+6,407. больных беэ хронического пиелонефрита.Недостаточная чувствительность иммунофлюоресценции связана с разрушением бактериальных клеток в организме больного на мелкие фрагменты, слабосветящиеся и трудноотличимые от неспецифического фона в флюоресцентном препарате. Вместе с тем указанные микробные осколки, несущие на своей поверхности антитела, вполне могут взаимодействовать с белком А стафилококка и способствовать коагглютинации корпускул диагностикума.Составитель П.БонарцевРедактор О.Черниченко ТехредС.Легеза Корректор В.Бутяга Заказ 795/5 Тираж 722 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытии 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул,Проектная, 4 3 1143411Неспецифические результаты непря. мой иммунофлюоресценции у больных с уроинфекциями, локализованными в нижнем отделе мочевыделительной системы, связаны с тем, что флюоресцирующая антиглобулиновая сыворотка реагирует со всеми,иммуноглобулинамн человека, прикрепившимися к поверхности бактерий, не только по типу реакции антиген - антитело, но и 1 О в результате неспецифической физико- химической адсорбции. Кроме того, в оболочке некоторых бактерий имеются белок А-подобные вещества, также .способные к неспецифическому связы в ц ванию иммуноглобулинов в том числе и . флюоресцирующих. Таким образом, при выявлении в люминесцентном микроскопе кокков даже с ободочным свечением нельзя быть уверенным в том, что на О блюдаются антитела, покрывающие возбудителей пиелонефрита, а не неспеци 4фическую адсорбцию флюоресцирующих глобулинов этими бактериями. В то же время наличие белок А-содержащихстафилококков в исследуемой пробе мочи не оказывает влияния на специфичность способа коагглютинации, поскольку такие микробы могут лишь уча" ствовать в реакции вместе с аналогич. ными клетками диагностического препарата.Предлагаемый способ более экономичен, т,е. 1 мл стафилококкового ди" агностикума оценивается в 0,03 коп, а 1 мл флюоресцирующей сыворотки к глобулинам человека - 3 руб. Кроме того, не требуется люминесцентного микроскопа (МЛ- 1200 руб. или ЛЮМАМ-Р 2 - 5000 руб), а также специалиста по люминесцентной микроскопии. Предлагаемый способ более быстрый, т.е. время анализа 40 мин, а при использовании иммунопюоресценции 1 ч.