Способ разрушения клеточной оболочки хлореллы

, кл. 36(2) Э,СССР1968 (протоутем куль- в тетем, гнгп ферГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ОПИСАНИЕ ИЗОБ Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) 1. Патент Японии1794опублик. 1971.2. Авторское свидетельство276886, кл. С 12 Р 13/06,тип),(54) (57) 1. СПОСОБ РАЗРУШЕНИЯ КЛЕ ТОЧНОЙ ОБОЛОЧКИ ХЛОРЕЛЛЫ, пре дусматривающий тепловую обработку пензии хлореллы, охлаждение ее с п дующим ферментативным гидролизом, о чающийся тем, что, с целью более пол разрушения клеточных оболочек и увел ния тем самым выхода белковых вещ тепловую обработку суспензии осущест ют при 85-95 С в течение 3-5 мин с п дующим ее охлаждением до 45-48 С ферментативный гидролиз проводят п обработки водной суспензии хлореллы турой гриба Тг 1 сЬодеппа 11 дпогпгп 6 С чение 1-3 ч.2. Способ по п. 1, отличающийся что культуру гриба г 1 с 1 одеггпа 11 дпо 6 С вносят в количестве 250-400 кд С мента на 100 г сухого веса хлореллы.Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается приготовления белково-витаминных обогатителей кормов, используемых в сельскомхозяйстве. 5Известен способ приготовления напитка из хлореллы, заключающийся в том, чтосвежую хлореллу суспендируют в воде, ксуспензии добавляют жидкую протеазу, продуцируемую микроорганизмами Васйцзпайо, которая вызывает автолиз хлореллы 11.Недостатком этого способа являетсяневысокий выход белковых веществ.Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому эффекту является способ разрушения клеточнойоболочки хлореллы, предусматривающийтепловую обработку суспензии хлореллы,охлаждение ее с последующим ферментативным гидролизом. Гидролиз хлореллы проводят путем воздействия на оболочку цитолитическим ферментным препаратом, полученным из гриба 1 гсйоВес 1 цгп гозешп.ферментный препарат вносят в количестве,равном 5/о, и выдерживают в течение 1748 ч с толуолом. Перед введением ферментного препарата водоросли стерилизуют (пропаривают) с десятью частями воды в течение 1 ч и охлаждают до 40 С 2,Недостатками известного способа являются длительность процесса тепловой обработки (пропаривание до 1 ч и ферментативный гидролиз до 17-48 ч), недостаточнополное разрушение клеток хлореллы, чтоснижает усвояемость ее белков при включении в корма.для животных, и низкий выход белковых веществ из клеток, а также З 5добавление толуола в гидролизуемую смесьи последующее его отделение от гидролизата.Цель изобретения - более полное разрушение клеточных оболочек и увеличениетем самым выхода белковых веществ.Поставленная цель достигается тем,что согласно способу разрушения клеточной оболочки хлореллы, предусматривающему тепловую обработку суспензии хлореллы, охлаждение ее с последующим ферментативным гидролизом, тепловую обработку суспензии осуществляют при 85-95 Св течение 3-5 мин с последующим ее охлаждением до 45-58 С,а ферментативный гидролиз проводят путем обработки водной суспензии хлореллы культурой гриба Тпс 1 одеггпа 11 дпогцгп 6 С в течение 1-3.Причем культуру гриба ТпсЬодеппа 1 дпогцт 6 С вносят в количестве 250-400 кд С, фермента на 100 г сухого веса хлореллы.Способ осуществляют следующим образом.Суспензию хлореллы с влажностью биомассы не менее 80% подвергают нагреву, например, на водяной бане при 85-95 С в течение 3-5 мин с последующим охлаждением до 45-48 С. Затем проводят гидролиз культурой гриба Тпсйодеппа 1 дпогцгп 6 С в течение 1-3 ч в количестве 250-400 ед С-фермента на 100 г сухого веса хлореллы.После тепловой обработки фермент и хлореллу суспендируют в воде (1000 мл воды на 00 г сухого вещества) при р 1. 4,8 и инкубируют 1-3 ч при 48-50 С,В случае разрушения клеточной Мп почки высушенной хлореллы ферментатпвному гидролизу подвергают суспензию биомассы, предварительно высушенной при 110-130 С, без ее тепловой обработки при соотношении воды и абсолютно сухого вещества хлореллы 10:1.Пример 1. Ферментативный способ разрушения клеточных оболочек пастообразной хлореллы.Пастообразную хлореллу (влажность биомассы не менее 80/о) подвергают нагреву на водяной бане 3-5 мин при 85 и 95 С и проводят гидролиз культурой гриба Тпсйодеппа 1 дпогцгп 6 С в количестве 400 ед С-фермента на 100 г абсолютного сухого веса хлореллы.После тепловой обработки фермент и хлореллу суспендируют в воде (1000 мл воды на 100 г сухого вещества) при рН 4,8 и инкубируют в течение 1-3 ч при 48-50 С с перирдическим перемешиванием.Для определения степени гидролиза клеток смесь центрифугируют при 6000 об/мин 5 мин и в надосадочной жидкости определяют выход растворимого белка.Данные исследований влияния ферментативного гидролиза на выход в супернатант растворимого белка при предварительной тепловой обработке приведены в таблице.1138073 Количество Время предварительнойобработки, мин, притемпературе, С Время ферментативного КонцентрацияС фермента, ед. растворимогобелка, 7 гидролиза, ч 95 85 400 7,0 400 8,6 400 17,0 400 16,5 400 16,2 400 16,8 400 Составитель В. Голимбет Редактор Н. Бобкова Текред И. Верес Корректор В Бутяга Заказ 1(67 б/1 Тираж 743 ПодписнЕ ВНИИ ПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4Результаты таблицы показывают, что количество белка, вышедшего в раствор гз клеток, составляет 3 ч инкубации 17% от общего количества белка в пробе (в контроле 5,3%), т.е. при данной обработке полностью происходит выход всех водорастворимых белков из клеток в раствор. Продолжительность предварительной тепловой обработки хлореллы в течение трех и пяти минут обеспечивает одинаковое количество белка, вышедшего иэ клеток в раствор.Пример 2, Ферментативный способ разрушения клеточных оболочек высушенной хлореллы,На 100 г хлореллы, высушенной при 110 С, добавляют культуру гриба Тг 1 сЬосегва дпогшп 6 С в количестве 5 г (400 ед. С-фермента на 100 г абсолютно сухого вещества) и проводят гидролиз, аналогично гидролизу пастообразной хлореллы по примеру 1, но без предварительной тепловой обработки суспензии клеток хлореллы, при соотношении воды и абсолютно сухого веса хлореллы 10:1.После гидролиза содержание белка всупериатанте составляет 17% от общего его количества в образце.Преимуществом предлагаемого способаразрушения клеточной оболочки хлореллы является сокращение времени проведения ферментативного гидролиза примерно в 6 раз, исключение операции добавки в гидролизуемую смесь толуола, являющегося токсичным легковоспламеняющимся веществом, сокращение времени тепловой обработки до 5 мин вместо 1 ч со снижением температуры до 85-95 С вместо 00 С, исключение операции тепловой обработки 40 суспензии высушенной хлореллы, сокращение расхода электроэнергии в 5-16 раз и увеличение выхода белка в раствор до 7% от общего количества вместо 11%.