Детектор флуоресценции проточного цитофлуориметра

1133511 1Изобретение относится к области Рвтоматизации цитологических исследований с использованием проточных цитофлуориметров, у которых струя воды (или физиологического раствора), несущая анализируемые клетки, с боль; шой скоростью выпускается из форсунки в воздух.Известен детектор, предназначен ный для светосбора от различных 10 источников света, в том числе и флуоресценции, состоящий иэ полуэллиптического отражателя (напротив нлоского зеркала). Источник света установлен в фокусе полуэллиптического15 отражателя 1 .Однако при такой конструкции возникает многократное отражение лучей, непопадающих прямо в объектив детектора, что приводит к нарушению кру говой симметрии светосбора в плоскости, перпендикулярной струе.По этой же причине не обеспечивается полная нейтрализация флуктуаций светосбора, вызванил отклонением 25 клетки по сечению струи. Кроме того, изготовление эллиптических оптических поверхностей представляет большие трудности.Наиболее близким к изобретению по технической сущности является детектор флуоресценции проточного цитофлуориметра с выходом струи клеточной суспензии в воздух, состоящийиз объектива, светофильтров, диафрагмы, фотоприемника, расположенных последовательно, и сферического вогнутого зеркала, фокус которого находится на линии, совпадающей с направлением оптической оси объектива, Причем сферическое вогнутое зеркало расположено напротив объектива. Подобная конструкция детектора позволяет в значительной степени нейтрализовать наибольшую компоненту флуктуаций светового сигнала, вызываемых отклонением клеток от оси струи в направлениях оси объектива (усреднение светового сигнала), и почти вдвоеувеличить светосилу детектора 2 .Однако при известной конструкции нет нейтрализации Флуктуаций свето,вого сигнала, обусловленного отклонениями клеток от центра (оси) струи не по оси объектива, а в на- з 5 правлениях, не охватываемых сферическим вогнутым зеркалом, что ухудшает разрешения детектора. 2Целью изобретения является улучшение разрешения детектора.Поставленная цель достигается тем, что в детектор флуоресценции проточного цитофлуориметра с выходом струи клеточной суспензии в воздух, состоящем из объектива, светофильтров, диафрагмы, фотоприемника, расположенных последовательно, и сферического вогнутого зеркала, фокус которого находится на.линии, совпадающей с направлением оптической оси объектива, дополнительно введеноплоское зеркало с отверстием в центре, расположенное на выходе сферического вогнутого зеркала под углом кнаправлению течения струи, а сферическое вогнутое зеркало выполнено ввиде кольцевого сегмента и расположено концентрично направлению течения струи в плоскости, перпендикулярно ей.Сущность изобретения заключается в полном устранении зависимости амплитуды сигнала флуоресценции от местоположения клетки в сечении струи путем усреднения светосбора от вспышек флуоресценции по углу 21 п ь плос-кости, перпендикулярной струе.На чертеже представлена схема предлагаемого устройства.Детектор содержит кольцевой сегмент 1 сферического вогнутого зеркала, вспомогательное плоское зеркало 2 с отверстием в центре, струю 3,несущую клетки, объектив 4, светофильтры 5, диафрагму б, фотоприемник7. На чертеже также обозначены луч8 лазера, источник 9 вспьппек флуоресценции, изображение флуоресцирующего объекта 10. Детектор работает следующим образом.Свет вспьппки флуоресценции, возникающей в точке 9 в результате пересечения клеткой луча лазера, попадает на кольцевой сегмент 1 вогнутого сферического зеркала и с помощью вспомогательного плоского зеркала 2 направляется в объектив 4 оптической схемы детектора. После цветовой и пространственной фильтрации на фильт-. рах 5 и диафрагме 6, собранный сегментом 1 свет преобразуется в электрический импульс фотоприемником 7. Кольцевой. сегмент 1 вогнутого сферического зеркала усредняет свет вспышки флуоресценции по всем углам 2 пСоставитель Н.ЗововРедактор Л.Шишкина Техред А.Кикемезей Корректор Л .Пилипенко Заказ 9943/Зо Тираж 898 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 3 11 в плоскости, перпендикулярной направлению течения струи, и это позволяет полностью нейтрализовать флуктуации световых импульсов, обусловленных отклонениями траекторий клеток от оси струи. При этом, если угол сбора света К сегментом будет таким же, как в известном устройстве, то светосбор, обеспечиваемый сегментом, будет более чем в 3 раза превышать светосбор известного детектора.улучшение разрешения флуоресцентного детектора проточного фпуориметра имеет большое значение для качества цитологических исследований. Напримерулучшение разрешения от 17 до 7 уже позволяет раздельно наблюдать распределение ДНК в хромо 33511 4сомах млекопитающих. Независимостьразрешения от величины распада клеточной суспензии (а от расхода еезависит амплитуда отклонения клетокот центра струи) позволяет существенно повысить расход (подачу) исследуемых клеток, что резко повышает производительность установки по анализуклеточных популяций, Производитель ность установки особенно важна прирежиме поклеточной сортировки "пч.йго". Кроме того, независимость разрешения от величины расхода клеточнойсуспенэии существенно повышает стабильность разрешения. Стабильность разрешения является важным фактором в ис 1следованиях, где измеряемым параметром является именно .ширина пикаисследуемой клетки.