Способ получения гипериммунной антиэритроцитарной сыворотки

(72) В.В,Николаевский, А.Е.Еременко, И.К.Иванов и В,Д.Курченко (71) Ялтинский научно-исследовательский институт физических методов лечения и медицинской климатологии им. И.М.Сеченова(54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ АНТИЭРИТРОЦИТАРНОЙ СЫВОРОТКИ путем внутривенного введения суспензии эритроцитов лабораторным животным с последующим забором крови и отделением сыворотки, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью получения целевого продукта с повышенным содержанием антител класса М, упро" щения и ускорения способа, животным однократно внутривенно вводят суспензию, содержащую10 эритроциотов на 100 г массы тела животного, с последующим забором крови на 5-й день после иммунизации.1 1097ГИзобретение относится к медицине иветеринарии, в частности к способуполучения иммунных сывороток, и может быть использовано для полученияантиэритроцитарных гипериммунных 5диагностических сывороток с повышенным содержанием антител класса М,при пересадке органов, диагностикеиммунодефицитных состояний и др.Для дифференцированной количественной оценки иммунорегуляторных популяций Т-лимфоцитов необходимы гипериммунные антиэритроцитарные сывороткис повышенным содержанием антителкласса М. 15Известен способ получения антиэритроцитарной сыворотки путем внутривенного введения петухам взвесиэритроцитов 5 раз с интервалом в тридня с последующей реиммунизацией спус-отя 2 недели. Реиммунизация включает две внутривенные инъекции с интервалом в три дня. Курс иммунизации состоит из 7 инъекций в течение 35 дней1 1 3.25Данным способом невозможно получить антиэритроцитарную гипериммуннуюсыворотку с повышенным содержанием антител класса М, Кроме того, способтребует больших затрат времени и тру да,Известен также способ получениягипериммунной антиэритроцитарнойсыворотки иммунизацией животных суспензией эритроцитов.Способ заключается в двухнедельном внутривенном введении животным эритроцитов барана(11 инъекций)2 3.Однако в полученной сывороткесодержится повышенное количество 40антител класса С,Целью изобретения является получение гипериммунной антиэритроцитарнойсыворотки с повышенным содержаниемантител класса М, а также упрощениеи ускорение способа. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения гипериммунной антиэритроцитарной сыворотки путем внутривенного введения суспензии эритроцитов лабораторным жи" ватным с последующим забором крови и отделением сыворотки, животным однократно внутривенно вводят суспензию, содержащую 1 10"Оэритроцитов на 100 г55 массы тела животного с последующим забором крови на 5-й день после иммунизации. 278 2П р и м е р. В опытах используют крыс-самцов весом 280-300 г. Для иммунизации применяют эритроциты, например, барана. С .помощью центрифу" гирования эритроциты трижды отмывают физиологическим раствором по 15 мин при 3 тыс. об/мин. Затем эритроциты в количестве 1 10 на 100 г массы телаюживотного разводят физиологическимраствором до объема, например, 2,0 мл и перемешивают встряхиванием до получения эритроцитарной суспензии.Суспензию вводят крысам в хвостовуювену, Забор крови для получениягипериммунной антиэритроцитарнойсыворотки производят на 5-й деньпосле иммунизации,Сыворотку отделяют от сгустка,инактивируют с помощью нагреванияпри 56 С в течение 30 мин и определяют в реакции гемагглютинациититр антиэритроцитарных антител.Средняя величина титра антител1;38400+420, что более чем в 5 разпревышает титр антиэритроцитарныхантител, полученных известным способом (1:6820 т 350).Для подтверждения повышенного содержания в сыворотке антиэритроцитарных антител класса М в селезенке иммунизированных животных определяютпрямые антителообразующие клетки(АОК) по методу Ерне. Высокие показатели количества прямых АОК в селезенке иммунизированных животных свидетельствуют о продукции иммунной системы антител класса М.В селезенке животных, иммунизированных предлагаемым способом, среднее количество прямых антителообразующих клеток 2292+212 АОК на 10 ядро- содержащих клеток селезенки. При имму- . низации известным способом число АОК 594+256 на 10" клеток (р ( 0,05).Предлагаемым способом от одной крысы можно получить 4,0-5,0 мл гипериммунной антиэтрироцитарной сыворотки с повышенным содержанием антител иммуноглобулиевого класса М. Этого количества сыворотки достаточно для поставки 1500-2000 анализов (поскольку иммунная сыворотка для поставки реакции разводится в 35-40 тыс.раз),Предлагаемая гипериммунная сыворотка представляет собой прозрачную, слегка опалесцирующую жидкость соломенно-желтоватого цвета. Титр антиэритроцитарных антител 1:38400+420,Относительное количество Т-лимфоцитов-помощников ("халперов") Е Т+ см, определяющихся в использовании сыворотки, 7. Пробакрови В 1 известной предлагаемой 32,6 32,0 33,2 33,5 31,0 30,5 31,5 32,0 30,0 30,6 Составитель Г.КрюковаТехред О.Неце Корректор А.Ференц Редактор М.Товтин Заказ 4086/4 Тираж 688 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 109Использование в клинике предлагаемой сыворотки дает результаты, соответствующие результатам, полученным с помощью известной сыворотки, (см.таблицу).5 Сопоставительный анализ результатов, полученных с использованием предлагаемой и известной сывороток, показывает, что между ними существует 1 О прямая достоверная корреляционная связь (=0,85, р0,05).Практическое использование.в клинике предлагаемой гипериммунной сыворотки заключается в опре)вселении в крови больных количества Т-лимфо" цитов-помощников ("халперов"), что имеет очень важное значение для адекватной оценки иммунологической реактивности. 20Для определения количества Т-помощников ("халперов") эритроциты 7278 4инкубируют с 0,5-1,0 мл субагглютинирующего разведения гипериммуннойсыворотки (в данном случае, прититре сыворотки 1:38000, рабочим, субагглютинирующим разведением, будет 1:40000), после чего подготовленные таким образом эритроцитыиспользуют в реакции розеткообразования с Т-лимфоцитами обследуемогоколичество розеток соответствуетколичеству Т-лимфоцитов-помощников ("халперов"),Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить гипериммунную антиэритроцитарную сыворотку сповышенным содержанием антител клас,са М; сократить время иммунизациис двух недель до 5-и дней, упроститьтехнику иммунизации (вместо 11 инъекций при иммунизации известным способом - 1 инъекция предлагаемым способом) .