Способ получения монокультуры водорослей (его варианты)

(21) 3431218/ (22) 23.03,82 (46) 07.04,84 (72) В.А,Силк (71) Тихоокеа вательский ин ва и океаноло (53) 663.18(0 8-13 Бюл. У 13н и Н.А.Айздайский научно-иститут рыбногоии8. 8) едо- зяйс Ланская Л.А., огия морских пл слей. К., "Наук Экологическа нктонныхва думка",Семененко Б.Е., етическое обоснотоматического конпродуктивных х водорослей на, ского моделироваа многокомпоненупроточном режиме.7, т.ХИ, Ф 4,ОКУЛЬТУРЫ ЕНВАР ТЫ чения монокуль едусматривающи ой культуре ида от быстрор вания в услови )живания пол 9 ф( л и ч а ю щ и(57) 1. Способ полу туры водорослей, пр отделение в смешанн медленнорастущего в тущего путем выращи благоприятных для в мых водорослей, о т ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ(56) 1физиолводоро1971 ь2. Цеглин Л,НПоляков А,К, Теование принципа акурентного отборформ одноклеточноснове математичния динамики росной популяции и(54) СПОСОБ ПОЛУЧВОДОРОСЛЕЙ (ЕГО с я тем, что, с целью ускорения иупрощения процесса, при отделениимедленнорастущего вида в качествепоследнего используют культуруРогрЬугЫдцв сгцепгцв, а в качествебыстрорастущего вида - культуруСЫавуйовопаз зр, или РЬасойасгу 1 цв1 г 1 согпцгцв, при этом при отделениикультуры РогрЬуг 1 йдцв сгцепгцвот культуры СМавудовопаз зр. выращивание осуществляют в темноте при20-24 С в течение 60 сут, а приоотделении культуры РогрЬугЫдцвсгцепгцв от культуры РЬасойасйц 1 цвСгхсогпцгцв выращивание ведут втех же условиях или при 5-7 С втечение 30 сут.2. Способ получения монокультурыодорослей, предусматривающийотделение в смешанной культуре Св медленнорастущего вида от быстрорас, тущего путем выращивания в условиях,благоприятных для выживания получаемых водорослей, о т л и ч а ю щ. и й с я тем, что, с целью уско. рения процесса, при отделении медленнораступего вида. от быстрорастущего в качестве медленнорастущего вида ис-: пользуют культуру Р 1 агувопаз чьгЫхз, а в качестве быстрорастущего вида - культуру РЬасодасгу 1 цв ггдсогпцг.цв, .при этом выращивание ведут в темноте при 20-24 С в течение 60 сут или при -5-7 С в течение 30 сут.5 Цель изобретения - ускорение и упрощение процесса.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения монокультуры, предусматривающему отделение в. смешанной культуре медленнорастущего вида от быстрорастуИзобретение относится к микробиологической промышленности, вчастности к способам выращиванияводорослей.Известен способ получения монокультуры водорослей, заключающийсяв том, что из смешанной культурыводорослей с помощью микропипеткиотбирают клетки выделяемой в монокультуру водоросли,. а затем высевают 1 Она питательную среду н выращиваютдлительное время до плотной культуры 11 .Недостатком этого способа является длительность процесса, большие 15трудовые затраты требование высокой квалификации исполнигеля. Крометого, способ не гарантирует чистотыполучаемой культуры, особенно приработе с мелкими формами. 20Наиболее близким к предлагаемомуявляется способ получения монокультуры водорослей, предусматривающийотделение из смешанной культуры медленнорастущего вида от быстрорастущего путем выращивания в условиях,благоприятных для выживания получаемых водорослей. Сущность способазаключается в следующем: с цельювыделения наиболее активнорастущего 30вида получают интенсивную непрерывнуюсмешанную культуру. При турбидостатном непрерывном выращивании смешанной культуры водорослей и культиваторе остается наиболее активнорас- З 5тущий вид, менее активные вымываются 21,Недостатком известного способаявляется то, что невозможно получить чистую культуру менее активнорастущего вида, способ требует орга,низации интенсивной турбидостатнойкультуры, на что необходимо длительное время 6-12 мес и высокая квалификация исполнителя. Кроме того, 45способ не гарантирует чистоты культуры вследствие возможного прикрепления сопутствующего вида к стенкамкультиватора а также в случаеопределенных симбиологических взаимо отношений видов в культуре. щего путем выращивания в условиях,благоприятных для выживания получае"мых водорослей, при отделении медленнорастущего вида от быстрорастущего в качестве медленнорастущеговида используют культуру РогрЬугЫхцшсгцеп 1 цш, а в качестве быстрорастущего вида - культуру СЫашуцошопавзр. или РЬасойасгу 1 цш сгсогпццш,при этом при отделении культурыРогрЬугЫцш сгцепСцш от культурыСЬ 1 ашудошопаз зр. выращивание осуществляют в темноте при 20-24 С втечение 60 сут, а при отделении культуры РогрЬугЫыш сгцепгцш от культуры РЬасодасгу 1 цш ггдсогпцгцш выращивание ведут в тех же условияхили при -5-7 С в течение ЗО сут.ОСогласно второму варианту приотделении медленнорастущего видаот быстрорастущего используют в качестве медленнорастущего вида культуру Р 1 айушопаа чгЫз, а в качестве быстрорастущего вида культуруРЬасойасТугцш ггдсогпцецш при этомвыращивание ведут в темноте притемпературе 20-24 С в течение 60 сутили при -5-7 фС в течение 30 сут.1Сущность способа заключается вследующем.При культивировании водорослейв промышленных нестерильных условияхпоявляются сопутствующие виды, какправило, наиболее активнорастущиеи вытесняющие культивируемый вид.При культивировании морской одноклеточной водоросли порфиридиум появляются сопутствующие зеленые илидиатомовые водоросли, которые вытесняют порфиридиум. Возникает необходимость очистки полученной культуры от сопутствующего вида.Смешанную культуру водорослейпомещают в термостат и инкубируютпри определенной температуре. В процессе инкубирования отбирают пробыдля контроля за жизнеспособностьюводорослей. Пробы высевают на питательную среду и выращивают в периодической культуре. Контроль зачистотой культуры ведут под микроскопом. Инкубирование ведут до техпор, пока выращенная культура водорослей будет представлена одним видом,П р и м е р 1. Смешанную культуру одноклеточной красной водорослиРогрЬугЫцш сгцепгцщ и зеленой1084296 4микроскопом. Через ЬО дней полученачистая культура водоросли РгагущопаячдгЫ 1 я.П р и м е р 5. Смешанную культуру одноклеточной зеленой водоросли Р 11 аГущопая чдгЫхя и диатомовой водоросли РЬасос 1 асу 1 цщгг 1 согпцГцщ инкубировали в темнотепри - 5 ОС. Каждые две недели отби 1 О рали пробы и высевали на свежуюпитательную среду. Контроль осуществляли под микроскопом. Через 30 днейполучена чистая культура водорослиР 1 агущопая чгдЙБ .1 П р и м е р 6. Смешанную культуру одноклеточной красной водорослиРогрЬугЫдцщ сгцепГцщ и зеленойводоросли СЫащуйощопая яр. инкубировали в темноте при +10 С, Каждые 20 две недели отбйрали пробы и высевалина свежую питательную среду. Контроль культуры осуществляли подмикроскопом. Через 150 сут инкубирования разделения водорослей не 25 произошло.П р и м е р 7. Смешанную культуру одноклеточной красной водорослиРогрпугЫ 1 цш сгцепгцщ и диатомовойводоросли РЬаеойассугцш ггсогпцСцшинкубировали в темноте при + 10 С.Каждые две недели отбирали пробы ивысевали на свежую питательную3среду. Контроль культуры осуществлялипод микроскопом. Через 60 сут инкубирования разделения не произошло.П р и м е р 8, Смешанную культуру одноклеточной зеленой водорослиР 1 агущопая чггЫ 1 я и диатомовойводоросли РЬасойас 1 у 1 цщ ггсогпцгцшмонкубировали в темноте при + 10 С.Каждые две недели отбирали пробы ивысевали на свежую питетельную среду.Контроль осуществляли под микроскопом,Через 60 сут инкубирования разделения не произошло.,водоросли СЬ 1 ашуйощопая яр. инкубировали в темноте при 22-24 ОС. Каждые две недели отбирались пробы и высевались на свежую питательную среду.Емкость со смешанной культурой порфиридиума закрывали чехлом из плотной бумаги и хранили при - 5,8Ои 22 С. Контроль проводили путем взятия проб из емкостей и высева на свежую питательную среду и культивирования при 24-26 ОС на люминостате в течение 7-10 дней, т.е. при тех же условиях, при которых сопутствующий вид доминировал и вытеснял культуру порфиридиума Растущая культура ежедневно просматривалась под микроскопом при 300-кратном увеличении. Культура считалась чистой, если после трехкратных пересевов в ней оставались только клетки порфириди" ума.Через 609 сут получена монокультура водоросли РогрЬугЫ 1 цш сгцепгцш. Контроль культуры осуществлялся под микроскопом.П р и м е р 2, Смешанную культуруодноклеточной красной водоросли РогрЬугЫтцш сгцепг.цш и диатомовой водоросли РЬасодасгуцш гг 1 согпцгцш инкубировали в темноте при 22 2 С, Каждые две недели отбирали пробы и высевали на свежую питательную среду. Контроль культуры осуществляли под микроскопом, Через 60 сут инкубирования получена чистая культура РогрЬугЫцш сгцепгцш.П р и м е р 3Смешанную культуру одноклеточной красной водоросли РогрЬугЫцш сгцепгцш и диатомовой РЬасот 1 асйуХцш ГгсогпцГцщ инкубировали в темноте при -5 С. Каждые две недели отбирали пробы и высевали на свежую питательную среду. Контроль культуры осуществляли под микроскопом. Через 30 сут получена чистая 45 культура РогрЬугЫдцщ сгцепгцщ.П р .и м е р 4. Смешанную культуру одноклеточной зеленой водоросли Р 1 агушопая чхгЫдя и диатомовой водоросли РЬасойасгу 1 цш ггхсогпцгцш инкубировали в темноте при 22 ОС. Каждые две недели отбирали пробы и высевали на свежую питательную . среду. Контроль осуществляли под Таким образом, предлагаемый способ позволяет ускорить процесс получения монокультуры водорослей до 1-2 мес по сравнению с 6-2 мес по известному способу, а также упростить способ за счет исключения использования интенсивной турбидостатной культуры.