Способ определения адгезивных свойств микроорганизмов, вызывающих кишечные инфекции

сОгОэ сОВетснихСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК а 9) аг ЗСЮС 12 И ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ЗОБРЕТЕНИЯ ЕЛЬСТВУ ИСА(71) Ленинградский ордена Тр(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ1 НЫХ,СВОЙСТВ МИКРООРГАНИЗМОВ,довогодоваии,мика 1 пйесйд -256. айаг 27 Вирра нт АДГЕЗ ВЫЗЫ АВТОРСКОМУ СВ ВАЮЩИХ КИШЕЧНЫЕ ИНФЕКЦИИ, путемвведения исследуемой культуры в живой организм с последующим определением адгезивных свойств по индексуадгезии, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, исследуемуюкультуру вводят в аллантоиснуюполость развивающихся куриных эмбрионов, инкубируют в течение 3-6 ч,дополнительно определяют частотугибели куриных эмбрионов, коэффицие.прочности адгезии, абсолютное количество прочнопрнкрепившихся микроорганизмов и достижение максимальных значений этих показателей к концу инкубирования.40 х 1003,(в 1 в 4) Изобретение относится к медицйнс" кой микробиологии и касается изучения вирулентных свойств микроорганизмов,.Известен способ определения ад гезивных свойств микроорганизмов путем контактирования исследуемой культуры с кусочками ткани кишечника в буферном растворе, после чего определяют индекс адгезии 1 .1 ОИзвестен также способ определения адгезивных свойств микроорганизмов, вызывающих кишечные инфекции, путем введения исследуемой культуры в живой организм - изолированные петли 15 тонкой кишки взрослого кролика с последующим определением адгезивных свойств по индексу адгезии 2 .Однако известные способы длительны и не обеспечивают высокой 20 точности определения, так как предусматривают оценку только одного показателя - индекса адгезии.Целью изобретения является уско,рение и повышение точности способа, 25 Цель достигается тем, что согласно способу определения адгезионных свойств микроорганизмов, вызыВающих кишечные инфекции, путем введения исследуемой культуры в живой организм с последующим определением адгезионных свойств по индексу адгезии, исследуемую культуру вводят в аллантоисную полость развивающихся куриных эмбрионов, инкубируют в течение 3-6 ч, дополнительно определяют частоту гибели куриных эмбрионов-, коэффициент прочности адгезии, абсолютное количество прочноприкрепившихся микроорганизмов и достижение максимальных значений этих показателей к концу инкубирования.П р и м е р 1. Изучаемой 16-часовой культурой на бульоне Хоттингера рН 7,2-7,4 в дозе 1-310 (холерные вибрионы 0,5-0,9 10 ) микр.клеток в 0,1 мл заражают 10 куриных эмбрионов 11-12-дневного срока развития, Заражение осуществляют в аллантоиснФо полость общепринятым методом. Контро 50 лем служат эмбрионы, которым вводят стерильный бульон. Такие эмбрионы продолжают нормально развиваться в течение нескольких суток. Гибель опытных эмбрионов начинают регистрировать через 3-4 и каждый последующий час путем просмотра их на овоско. пе. О гибели судят по обездвиживанию зародыша, истончению и запустениюкровеносных сосудов. Культуры, вызывающие гибель 50% и более зараженныхэмбрионов через 5-6 ч, относятся к1 группе и обладают выраженной способностью к адгезии. Культуры,вызывающие гибель большей части эмбрионов через 8-24 ч (поздняя гибель)относятся к 11 группе и неимеютвыраженных адгезивных свойствП р и м е р 2. Каждой исследуемой(холерный вибрион, кишечная палочка)культурой заражают по 4 куриныхэмбриона общепринятым способом. Накаждом сроке вскрывают по 2 эмбриона. Для стерильного взятия тканейи жидкостей после инкубации скорлупунад воздушной полостью прожигают,срезают ее ножницами и разрезаютподлежащие оболочки, Отсасываютсаллантоисную жидкость и замеряют ееобъем. Переворачивая эмбрион над стерильной посудой, с помощью ножниц .ипинцетов удаляют амниотическиймешок с зародышем, желточный мешок.Затем отслаивают ХАО и переносят еена стерильную чашку Петри, удаляютбелковую массу, Далее проводят последовательное промывание 2 оболочеквместе в 3-4 объемах по 100-150 млтеплого физраствора (37 ). ПромытыеХАО растирают в ступке с небольшим,генат 2 ХАО смывают 2 мл физраствора,затем пипеткой переносят в мернуюпробирку, Отмечают его объем, вычитая объем кварцевого песка. Дляпосева три первые промывные водысливают вместе. Количественные микробиологические посевы производят общепринятым методом на агаровую пластину с пересчетом количества микроорганизмов на весь объем пробы. Количественные показатели, характеризующие адгезию, определяют по формуле где Т - индекс адгезии, т,е. процентпрочноприкрепившихся микроорганизмов,й - абсолютное количество прочноприкрепившихся микроорганизмов,знаМенатель - сумма микроорганизмов всей популяции:Заказ 192 б/19 Тираж 522 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 а - абсолютное количество микроорганизмов, не обладающихспособностью прикрепляться(содержатся в аллантоиснойжидкости);,5Ьо - абсолютное количество слабо"1 4прикрепившихся микроорганизмов (смытые соответственно в трех первых и послед-.ней промывных водах). 1 ОВеличины А (количество микроорганизмов, неспособных к адгезии), В 1 и В (микроорганизмы, обладающие слабой адгезией) вычисляют аналогич- . но индексу адгезии Т. 15КПА = , показывает во скольков 1раэ больше осталось. микроорганизмов на оболочке, чем в;последней про О мывной воде, т,е. характеризует степень прочности прикрепления. 295Применение куриных эмбрионов вместо трудоемкого метода изолированных петель тонкой кишки кролика делает предлагаемый способ широко доступным, обеспечивает стандартные условия проведения опыта. Предлагаемые критерии оценки адгезивнойспособности с использованием индексаадгезии еще двух показателей - КПА . и количества прочноприкрепившихся возбудителей с учетом их максимальных значений через 4-5 ч - позволяют, достоверно определять способность культур к адгезии. Возможность пред,варительной качественной оценки зна 1 чительно экономит время (в прототипе - 30-36 ч, в предложенном способе - 20-24 ч) и трудозатраты, так как исключает из дальнейшего количественного изучения до 18 культур (среди НАГ вибрионов и кишечных палочекзначительно больше).