Способ определения активности симпатической нервной системы

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ае си ЗШ 0 0 САНИЕ ИЭОБРЕТЕНИ ЬСТВУ ТИВСТ Е%1 о т с це,изме- адрена- после ометричереналинамоче. Валин". б Вегето сосуди с81, с, 35-37 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ АВТОРСКОМУ СВИД(56) 1. Матлина Э.1, Флуорские методы определения ади норадреналина в крови икн.: "Адреналин и норадренМ., 1964, с. 268-278.2. Вейн А.М, и дртая.дистония. М 19(прототип),( 5 4 ) ( 5 7 ) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКНОСТИ СИМПАТИЧЕСКОЙ НЕРВНОЙ СИпо содержанию катехолвминов,л и ч а ю щ и й с я тем, что,лью повнения точности способаряют содержание дофамина и норлина в слезной жидкости до ивведения( -диоксифенилаланина иизменению этих показателей судятактивности симпатической нервнойсистемы.Изобретение относится к биохимиии может быть использовано в медицинских исследованиях для уточнениямеханизмов развития сердечно-сосудистых заболеваний и повышения эффективности лечения.5Известен способ определения состояния симпатико- адреналоной систелипо изменению уровня катехоламиновнорадреналина и адреналина) в кровии моче 11, 0Известен также способ определения состояния симпатической нервнойсистемы по клиническим признакам,например, потливости, повькению частоты сердечных сокращений 2 .Недостатком известного способаявляется то, что этот способ основанна субъективной оценке испецифических признаков и, следовательно, непозволяет количественно определять3активность симпатической нервнойсистемы.Целью изобретения является повышение точности способа.Указанная цель достигается тем,что согласно способу определения активности симпатической .нервной системы, измеряют сод ржание дофамина инорадреналина в слезной жидкости дои после внедения -диоксифенилаланина, и изменение этих показателейсвидетельствует об активности симпаткческой нервной систелю.Способ осуществляется следующимобразом.В течение контрольного периода 354-5 сут) из пищи обследуемого исключают продукты, влияющие на обмен катехоламинов, а также отменяют медикаментозные препараты, На шестые сутки иэ конъюнктивального мешка глаза 40обследуелых лиц забирают микропипет)кой 0,05-0,5 мп слезной жидкости после вдыханкя через нос раствора нашатырного спирта. К образцу добавляют0,3-0,5 мл 0,1 раствора ЭДТА. Затемобследуемому перорально вводят-ДОФА иэ расчета 3,8-4,2 мг/кг веса и через 3-5 ч после приема Ь-ДОФА повторяют отбор слезной жидкости, к которой также добавляют тоже количество ЭДТА. Оба образца довс 50дят до рН 8,2-8,5 фосфатным буферомрН 6,5 и 1 н ю НН 40 Н и помещают наколонку с окисью алюминия,После адсорбции катехоламины элюируют 0,25 н. уксусной кислотой дважды по 3,5 мл, Уксуснокислый элюат доводят до рН 4,2 1-2 каплями 1 н.раствора аммиака и затем отбирают, по 1 мл в контрольную и опытную пробы, в которые предварительно поме щают по 1 мл 0,1 М Фосфатного буфера.,с рН 4,2. Затем оставшееся количество элюата доводят до рН 6,2, учитывают количество аммиака, пошедшего на титрование, и в две пробы отбирают 65 количество раствора, соответствующее2 мл элюата. В эти пробы предварительно помещают по 1 мл 0,1 И Фосфатного буфера с рН 6,2,Полученные дне опытные пробы уксусного элюата с рН 6,2 и 4,2 окисляют 0,1 мл 0,25-ного раствора Феррицианида калия в течение 4 мин и затем добавляют как н опытную, так ив контрольную пробу 0,5 мл 0,2%-ногораствора аскорбиновой кислоты, свежеприготовленного на 5 н,растноре щелочи. Через 3 мин все пробы доводятводой до 5,0 мл, а н контрольные пробы добавляют по 0,1 мл 0,25%-ногораствора Феррицианида калия. Длябольшей стабилизации флюоресценцииопытные и контрольные пробы охлаждают на льду в период измерения Флюоресценции.Обе пробы с уксуснокислым элюатомрБ 6,2 и 4,2 измеряют на спектрофлюориметре при длинах волн 410 и 510 нм,для определения дофамина количество уксуснокислого элюата, доведенного до рН 6,2 исоответствующего1 мл исходного элюата, добавляют к1,0 мп 0,1 И Фосфатного буфера срЙ 6,2 в опытную и контрольную пробы.Объем опытных и контрольных пробдоводят до 3,5 мл водой и окисляют0,2 мл 0,02 н,раствором йода в течение 4 мин, Затем к опытной пробедобавляют 0,5 мл щелочного сульфита1 г кристаллического сульфита натрия растворяют в 2 мл воды и доводят5 н.раствором едкого натра до 20 мл),а н контрольную пробу 0,45 мл 5 н.раствора щелочи. Через 7 мин во всепробы помещают по 0,7 мл 5 н.раствора уксусной кислоты и тщательно ихвзбалтывают, Затем пробы облучаюткварцевой лампой н течение 15 мини после добавления в контрольные йробы по 0,05 мл сульфита 1 г кристаллического сульфита на 2 мл воды) из-,меряют Флюоресценцию при длинах волн330 н 380 ммк,Флюоресиенцию образцов сравниваютс Флюоресценцией стандартных растворов катехоламинов известной концентрации, производят расчеты и выражают,результаты в нг/0,1 мл слезной жидкости,Количественное определение катехоламинов н слезе является показателемактивности только симпатической нервной системы ввиду особенностей иннер.нации слезной железы. Это подтверждается отсутствием увеличения в слезной жидкости адреналина, так какбиосинтез катехоламинов в симпатической нервной системе заканчинаетсяна стадии образования норадреналина,П р и м е р 1, Обследуемый К,практически здрров,Наосновании определения катехоламинов в слезной жидкости было ус1075162 П р и м е р 3. Больная А. Диагноз - первичный альдостеронизм.Результаты определения показали,что в этом случае имеет место нормальный уровень активности симпатической нервной системы по высвобождению дофамина и норадреналина. Вто же время в слезной жидкости содер.жится 170,4 кг адреналина, котбрыйисчезает после введения , -ДОФА 10 (табл, 3). Таблица 3 Содержание в нг/0,1 мл15 Показатели слезной жидкости 0 0 350 на П р и м е р 2. Больной Л. Диагноз - гипертоническая болезнь. 20Результаты определения показали, что реакция симпатической нервной системы у данного больного отличается от таковой у здоровых лиц. В ответ на . -ДОФА содержание норадрена лина повышает .я так же, как и у здоровых, а дофамина, напротив, значительно понижается табл. 2) .- Т а б л и ц а 230 250,4 0 170,4 Через 3 чпосле приема 1, -ДОФА 410,0 28,1 0 Предлагаемый способ может найти широкое применение в клинических исследованиях, поскольку для точно направленного патогекетического лечения, обладашщего наибольшей зффектив ностью,тояния системю системляции. необходимо симпатическ одной нейро-гуморваниесо нервной ведущих 3 Фон Через после ема-ной регуА 16 Составитель И. Емельяненактор Т. Кугрышева Техред С,Легеза ектор И. Эрдей Заказ 490/37ВНИИПИ Госупо делам113035, Мос Тираж 82арственногоэобретенийва, ж, Р Подписн омитета СССРоткрытийушская наб/5 лиал ППП "Патент", г. ужгород, ул. Проектна тановлено одновременное увеличение содержания дофамина и норадреналина после приема-ДОФА, что указывает на достаточность их биосинтеэа и является количественным выражейием активности симпатической нервной систе мы у здорового человека табл, Ц .Таблица 1 Содержание в нг/0,1 ммслезной жидкости Показатели дофами- норадре- адренана налива лина ФонЧерез 3 чпосле приема Ь -ДОФА 2800,0 70,0 0 дофами- норадрена- адрена лина нали