Состав для получения изолированных клеток кожи человека

: аС 12 л ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНА 8 ТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ исследо гический усология. фКолос" сон Л.В. УДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТН(54)(57) СОСТАВ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ИЗОЛИРОВАННЫХ КЗП:ТОК КОЖИ ЧЕЛОВЕКАМИ содержащий этиловый спирт (9 бф), ледяную уксусную кислоту и раствори- тель, о т л и ча ю щ и й с ятем, что, с целью повышения выхода изолированных клеток, в качестве ра створителя он содержит моноэтиловый эфир этиленгликоля при следующем количественном соотношении ингредие тов, мас,ч.фЭтиловый спирт (9 бф) 9"11 Ледяная уксуснаякислота 1-2 Моноэтиловыйэфир этиленгликоля 4-640 Известный состав . Показатели Предложенныйсостав . Значительно изменены за счетсморщивания Размеры и форма изолированных клетокОтйошение полностью разрушенных клетокк общему числу изо- лированныхМало изменены 4-5 20-25 Изобретение относится к вирусологии и может быть использовано дляполучения суспензии изолированныхклеток тканей.Известен состав для дезагрегациитканей, представляющий собой 0,25- 50,5-ный раствор трипсина 1) .Известен также состав для получения изолированных клеток кожичеловека, содержащий этиловый спирт96 О), ледяную уксусную кислоту и 10хлороформ 2Однако известные составы не обеспечивают высокого выхода изолированных клеток.Целью изобретения является повышение выхода изолированных клеток.Поставленнаяцель достигаетсятем, что в составе для полученияизолированных клеток кожи человека,содержащем этиловый спирт (96 ), ледяную уксусную кислоту и растворитель, в качестве растворителя онсодержит моноэтиловый эфир этиленгликоля при .следующем количественномсоотношении компонентов,мас.ч,:Этиловый спирт 96) 9-11Ледяная уксуснаякислота 1-2. В склянку с притертой пробкойобъемом 200 см наливают 100 смэтилового спирта (96 О), 50 сммоноэтилового эфира этиленгликоля и 15 см 35ледяной уксусной кислоты. Полученную жидкость тщательно перемешиваютпутем равномерного встряхивания втечение 2-3 мин. Смесь хранят вхолодильнике при 3 С.П р и м е р 1, Берут следующеевесовое соотношение: этиловый спирт9 ч., моноэтиловый эфир этиленгликоля 4 ч.,ледяная уксусная кислота 1 чВ склянку с притертой пробкойобъемом 200 см наливают 90 см 45з96-градусного этилового спирта,40 см моноэтилового эфира этилен- .гликоля и 10 см ледяной уксуснойкислоты. Полученную жидкость тщательно перемешивают путем равно-,. 50мерного встряхивания в течение2-3 мин, Смесь хранят в холодиль=нике при 3 С.От участка кожи человека, взято-го при биопсии берут. навеску массой40-50 мг, Навеску помещают в склянку, заливают 1 см полученной смеси и закупоривают резиновой пробкойВ таком состоянии материал хранятв течение 1 ч при комнатной температуре (около 20 С) . После этоготкань переносятс помощью пинцета вступку, заливают таким же количеством свежей порции смеси и,растираютпестиком до образования однороднойсуспензии, Стеклянную палочку диа метром 3 мм обмакивают в полученнуюсуспензию и образовавшуюся каплюпереносят на обезжиренное предметное стекло. Всего на одном стеклеразмещают 8-10 капель суспензии. Затем предметное стекло подсушиваютпри комнатной температуре. 18-25 С)в течение суток. Для наблюдения подмикроскопом препарат окрашивают поРомановскому-Гимзе. Наблюдение ведется под световым микроскопом безпокровного стекла или с таковым1,для, этого препарат заливаетсясмесью-канадский бальзам-ксилол) .Может использоваться сухая и иммерсионная система микроскопа (под иммерсионной преимущественно с покровным .стеклом). Неокрашенный препаратможетхраниться неопределенно долгое время. Количество разрушенныхклеток составляет 4-5 от числа всехклеток навески.П р и м е р 2. Берут следующее зесовое соотношение: этиловый спирт10 ч., моноэтиловый эфир этиленгликоля 5 ч., ледяная уксусная кислота1,5-ч. Смесь готовят согласно примеру 1.От участка кожи человека, взятогопри биопсииберут навеску массой40-50 мг. Навеску помещают в склянку, заливают 1 см полученной смесии закупоривают резиновой пробкой.В таком состоянии подсушивают прйкомнатной температуре в течениесуток. Для исследования под микроскопом полученный препарат окрашивают по Романовскому-Гимзе. Количество разрушенных клеток составляет 4-5 от числа всех клеток навески.П р и м е р 3. Для приготовлениясостава компоненты берут в соотноше- ,нии:этиловый спирт 11 ч., моноэтиловый эфир этиленгликоля б ч., ледяная уксусная кислота 2 ч.Состав используют аналогично примеру 1. Количество разрушенных клетоксоставляет 5-7 от числа всех кле"ток навескиДанные, подтверждающие повышениевыхода изолированных клеток (снижение количества разрушенных клеток),приведены в таблице.1043166 Составитель А. ИаныкинРедактор Г. Волкова Техред А.Бабинец Корректор А. Повх Заказ 7264/28 Тираж 523ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/6 Подписное Филиал ППП "Патент", г. ужгород, ул. Проектная, 4 Использование предложенного состава позволяет повысить выход,изолированных клеток на 15-16 Ъ за счет снижейия количества разрушенных клеток, а также удешевить проводимыеисследования.