Способ исследования жизнедеятельности -клеток

(54) (57) СПОСОБЖИЗНЕДЕ ЯТЕЛЬНпутем культивированрования их лизосомвом с последующимскопированием, о ттем, что, с целью ищения маркированныние проводят добавлсреду 2,5-3,5 мл сяиц магнитита с диконцентрацией 10мывают нем агнитноствуют на культурумагнитным полем смонослоя 1,0-2,0 Т узма,кене,(56) 1.1.У 5 О 50% Асадев 1 1973 (и СУДАРСТВЕННЫЙ ИОМИТЕ О ДЕЛАМ ИЗОБРЕГЕНИЙ И Н АВТОРСКОМУ(71) Вильнюсский государственныйордена Трудового Красного Знамени,ордена Дружбы народов университет(53) 616.07 (088.8) С.Нега апО Г, чап Ноо апд яеогаде д 1 ьеаьеь. гель, Кеи ЗогМ, р, 17 отип) . ИССЛЕДОВАНИЯ ОСТИ ( -КЛЕТОК ия ,-клеток, маркивнеклеточным ввцест.электронным микроличаюшийся збирательного раэрух клеток, маркироваением в питательную успенэии твердых час аметром 8-10 нм, с -10 "0 асиц/мл, прой средой далее воэдей клеток неоднородным индукцией в области10355 ится к биологии и е в цитологии, ге- избирательное рвэх клеток.стигается тем что 25следования жиэнедеяутем культивироваования их лизосомвом с последующимопированием маркиро- З 0ением в питат.епьсуспензии твердыхиаметром 8-10 нм,10частиц/млой средой, далее возу клеток неоднород 35с индукпией в об .2,0 Т .спольэуют клетки лирлом в результатеных фибробластов40антреном в культуре.ьтуру мышиных 1- ри 37 С на покровоТ -199, дополненсывороткой, добавля 45твердых частиц магдкости в воде и састиц/мл. После 80 четок два раза промыедой без магниточув. После адгезии клеараты префиксируютн 2,5%-ным растворомв 0,1 М фосфвтномывают в течение 55тным буфером рН 7,4,ение 1 ч 1%-ным,1 М веронал-ацетатИзобретение отноможет найти примене нетике и медиане.Известен способдеятельности 1 -клет вания 1-клеток мвр внеклеточным вещест электронным микроскОднако прнменениНЕДОСТВТКОВ, ТВК КВК ют постоянного хими электронным микроск их молекулы как так мер ферментативно и ввриввются самим ли третьи проявляют ка Все эти вещества о состояние зависит от ствием лиэосомной сКроме того, извепечивает избиратель кироввнных клеток.Бель изобретениярушение маркированнУказанная цель дсогласно способу ис тельности , -клеток ния. 1-клеток мар внеклеточным веще электронным микрос ванне проводят доба ную среду 2,5 -3,5 частиц мвгнитита с с концентрацией 10 промывают немагнит действуют на культ ным магнитным пол ласти моноспоя 1,0Пример 1.нии 1., полученной трансформации норм мьпней 20 -метилхПересеввемую кклеток вырвдппьвют ных стеклах в среде ной 10%-ной бычьей ют 2,5 мл суспенэт ниточувствительной концентрацией 10роста монослой 1- вают питательной с ствительной жидкос ток к субстрату пре в течение 45-50 глутврового альдеги буфере рН 7,4, про30 мин 0,1 М фосф постфиксируют в те раствором 05 0, в сследования жизнек путем культивироования их лизосом ом с последующим пированием 1. маркеров имеет ряд одни из них не име еского состава и под пом нельзя выявить вые, Другие (напри тивные белки) переосомным аппаратом, ерогенное действие вются в клетке и их превращений пол дейтстемы.й способ не обес ого разрушения мар 19 Ъном буфере рН 7,2; Обезвоживание осуществляют в серии спиртов возрастающейконцентрации от 50 до 100%. После выдерживания в смеси абсолютного спиртас ацетоном (1:1) объекты переносят вабсолютный ацетон, а затем в смесь вбсолютного ацетона с аральдитом (1;3), всмесь абсолютного ацетона с аральди -том (3;1). После полимериэации смолымонослой 1.-клеток отделяют от стеклав жидком азоте. Срезы для электроджоймикроскопии приготавливают на ультрамикротоме, контрастируют 3%-ным раствором урвнил-ацетата в этиловом спирте ипросматривают под электронным микроскопом, после чего префиксвцию и все после.дующие операции проводят согласно примера 1,Твердые ферромагнитные частицы, со держащиеся в магниточувствительной жидкости, являкгся однодоменными со средб-.ним магнитным моментом т,4 10 1 с/см=3,410 "А м 2электронно-оптическиплотными. Сочетание этих свойств позволяет не только ускорять их в магнитномполе, но и наблюдать места их сосредоточения в живой материи.Электронно-микроскопическое исследование препаратов показывает, что твердые ферромагнитные частицы после культивирования сосредоточены в лизосомах клеток.П р и м е р 2, Монослой Ь -клеток ствердыми ферромагнитными частицами влиэосомах, полученный согласно примеру 1после префиксации, помещают в.неоднородное магнитное поле (тип магнита ФЛ)индукцией 1,5 Т в области монослоя ивыдерживают в,течение 6 с, после чегопрефиксацию и все последующие операциипроводят согласно примеру 1.Под воздействием магнитного поля фер-ромагнитные частицы, находящиеся в лизосомах 1 -клеток, ускоряются до такойстепени, что разрывают лизосомные мембраны и тем самым разрушают клетки,лизосомы которых маркированы магнитными, частицами.Просмотрпод электронным микроскопом показывает, что лиэосомные мембра 1ны разрушены, т,е, жизнеспособность клеток нарушена, они практически погибают.Аналогичные результаты получены приобъеме магнитной суспенэии 3,0 и 3,5 мли концентрации магнитных частиц 100 чвстиц/мл облучении магнитным полем с индукцией 2 Т,При объеме ниже 2,5 мл и концентрации ниже 10 частиц/мл способ неосушест.Заказ 5824/45 Тираж 873 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Г, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП "Патент", г. Ужгород ул. Проектная, 4 3 10355194вим из-за недостаточности количества фер дыми ферроматчщтными частицами, разруромагнитных частиц для эдоцитоза их в шаются как индукцией в 2 Т, так и инлизосомы 1-клеток. Увеличение объема дукцией 3,0-4,0 Т одинаково, Поэтому выше 3,5 мл и концентрации выше 10 час- увеличение индукций не целесообразно иэтиц/мл приводит к значительному сниже-за расходов энергии.нию роста 1. -клеток из-за перенасьпцения Использование предлагаемого способа питательной среды твердыми ферромагнит- сокрашает расходы, снижает токсичность ными частицами. маркеров, используемых для щдентифнкаИнтенсивность индукции магнитного по- ции и выделения лизосом, способствует ля ниже 1 Т не способствует разрушению о избирательному разрушению клеток, лизоклеток, а выше 2 Т неэффективна, т.е. сомы которых предварительно загружены клетки, лизосомы которых загружены твер ферромагнитными частицами.