Способ получения кининазы

и 971340 Союз СоветскикСоциапистическикРеспублик ОП ИКАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(5 )М. Кл. А 61 К 35/56 с присоединением заивин М Рауддрстщиай квинтет СССР ае ааам взебретениВ н ютарытий(088. 8) Дата опубликования описания 07.11,82(72) Авторы изобретения А.С.Садыков, А.Ахунов и З.ГолубенкоИнститут биоорганической химии АН Узбекской ССР(54) СПОСОБ ПОЛУцНИЯ 1 ИИИИАЗИ 1Изобретение относится к области биологии и касается методов выделения ферментов из сырья животного происхождения.Известен способ получения кининазы из,сырья животного происхождения, включающий гельфильтрацию с последующей элюцией буферным раствором и ионообменную хроматографию 11Однако известный способ не обеспечивает получение фермента с достаточно высокой Ферментативной активностью (0,07 мкг экв, на 1 мг белка в 1 мин),Целью изобретения является повышение ферментативной активности.Поставленная цель достигается тем, что в способе получения кикиназы из сырья животного происхождения, включающем гельфильтрацию с последующей элюцией буферным раствором и ионообменную хроматографию, в .качестве источника сырья используют. ряд паука 1.айгодесйцз йгедеспдцййа 2тцз, который подвергают гельфитрации на сефадексе 6-50 с элюцией 0,005 М аммонийацетатиым буферным раствором, затем полученную первую Фракцию разделяют ионообменной хроматографией на колонке с диэтиламиноэтилцеллюлозой и элюируют фермент аммонийацетатным буферным раствором,П р и м е р. Выделенный яд паукакаракурта в количестве 1 г разделя,ют на сефадексе Св 0,005 М аммонийацетатном буфере рН 7,8, размер колонки (2,560 см), скорость вытекающей жидкости 30 мл/ч, Б результате разделения яда получают три фракции. Высокая кининазная активность обнаружена только в первой Фракции, ее объем составляет 45 мп, содержание белка 660 мг, вторую фрак го цию получают в количестве 35 мл итретью фракцию в количестве 35 мл, но не используютДля дальнейаей очистки первую1340 Формула изобретения 3 97ке с диэтиламинозтилцеллюлозой размером (2,4 х 15 см) в градиенте аммонийацетатного буфера рН 7,8, скорость 18 мл/ч, обьем 3 мл Всегополучено шесть фракций. Первая, вторая и третья фракции десорбируют изколонки при ступенчатом методе элюции 0,05 М (250 мл), 0,1 М (250 мл),0,2 М (250 мл), аммонийацетатнымбуфером рН 7-8,Использование в дальнейшем градиентного метода элюции, начиная от0,2 М (300 мл) " 0,5 М (200 мл), буФерного раствора рй 7,8 позволяетполучить еще три Фракции, Высокуюкининазную активность удалось обнаружить только в третьей фракции изшести выделенных, Ее удельная активность превысила активность цельногоядя в 10 раз,Электролиз в полиакриламидном гелепоказал, что третья Фракция дает одно пятно, мигрирующее к аноду, цтосвидетельствует о чистоте выделенного фермента, В результате разделенияяда методом гель-Фильтрации и ионообменной хроматографии получили гомогенную кининазу с удельной активностью 760в количествемкг эквиг. белка мин.200 мг.Таким образом, полуцили Фермент кининазы, превосходящий по своей удельной активности известные до сих пор полученные кининазы,По своим свойствам этот Фермент также отличается от известных.На основании экспериментальных данных фермент отнесен к кпассу тиоло вых соединений. Оптимальная рН этого фермента 7,8 и она устойчива при рН 65-9. 4Предлагаемый способ позволяет получить фермент с высокой активностью,что дает возможность использоватьего в модельных опытах по выяснению5 свойств и фунКций отдельных компонентов кининовой системы, помогающихскрывать интимные механизмы процесса,происходящих в живом организме, атакже правильно понять роль кининаз10 в патоголических изменениях организмапри уксусах пауков. Это даст возможность изыскивать новые лекарственные средства при укусах ядовитых пауков,5 Способ получения кининазы из сы 20 рья животного происхождения, включающий гельфильтрацию с последующей злю цией буферным раствором и ионообменную хроматографию, о т л и ч а ю "щ и й с я тем, что, с целью повыше 25 ния Ферментативной активности, в качестве источника сырья используютяд паука 1 айгодесйць Сгедес 1 пуц сйагоз, который подвергают гельфитрации на сефадексе 6-50 с элюциейзо 0,005 И аммонийацетатным буфернымраствором, затем полученную первуюФракцию разделяют ионообменной хроматографией на колонке с диэтиламиноэтилцеллюлозой и элюируют Ферментаммоний-ацетатным буферным раствором,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Магпо 111 зз,1. Вцсе 5, йе 1 еазеоГ Ьгас 11 11 п 1 п - 111 е зоЬзСапсе40 (ВК 1 Б) 1 и зЬеер у гепора оГ СгоТа 1 цз а С гох, Аоз Сга 1, 1. Ех апдМес 1. Б 1 е ч. 43, 3, 19.65.Корректор Н,Король Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035 Москва, Ж,Рвушская наб., д, 4/5