Способ определения жизнеспособности гельминтов и их личинок

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик и 967471(61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 0708.80 (21) 2972561/30-15с присоединением заявки Йо(23) Приоритет-Опубликовано 23.1082, Бюллетень Мо 39 РМ К з А 61 В 10/00 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытийДата опубликования описания 23.10.82БИнститут экспериментальной ветеринарии Сибирии Дальнего Востока(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ГЕЛЬИИНТОВ И ИХ ЛИЧИНОКИзобретение относится к гельмин тологии, а конкретно к способам,позволяющим дифференцировать живых гель. минтов и их личинок от мертвых, и может быть использовано при проведении ряда гельминтологических исследований в ветеринарии и биологии.Известен способ определения жизнеспособности личинок трематод (адолескарий, парамфистоматид) по способности личинок эксцистироваться под воздействием химических веществ 1).Недостатком такого способа является то, что он пригоден только для работы с личинками, находящимися в цистах, которые,главным образом,формируются у трематод, и Не может быть использован при работах о гельминтами, относящимися к другим классам.Известен также способ определения жизнеспособности гельмннтов и их личинок, заключающийся в стимуляции движения живых объектов нагреванием исследуемого материала до 37-38 С и подсчета под микроскопом неподвижных 25 (мертвых) и двигающихся (живых) гельминтов илн их зародышейНедостатком известного способа является невысокая его точность, которая за,висит от многих причин: не все живйе30 гельминты и личинки при нагревании начинают одновременно двигаться,поэто. му для установления их жизнеспособности приходится вести наблюдение длительное время, при длительном; или повторном нагревании, равно так и при температуре выше оптимальной ( 38 С ), возможна. быстрая гибель гельминтов и их зародышей, на точность влияют характер источника тепла, скорость испарения влаги иэ пробы, температура воздуха, скорость нагревания, вид гельминта и др.Целью изобретения является повышение точности определения жизнеспособности гельминтов и их личинок.Поставленная цель достигается тем, что стимуляцию подвижности гельминтов и их личинок осуществляют воздействием на них 40-60-ного водного раствора диметилсульфоксица или диметилформамида в течение 30 40 с.Способ осуществляется следующим образом.Готовят 40-60-ный водный раствор диметилсульфоксида или диметилформамида. Каплю раствора наносят на предметное стекло. Затем с помощью пипетки или препаровальной иглы гель967471 Тираж 714 Подписное ВНИИПИ Заказ 7941/10 филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул.Проектная,4 минты, например оллуланй и их личинки, помещают в.раствор и через 30-40 с ведут подсчет подвижных (живых/ и неподвижных (мертвых) объектов известными методами, например с помощью микроскопа или лупы. 5П р и м е р 1. Для установления сроков начала движения всех живых оллулан и их личинок под воздействием предлагаемых веществ готовят 40 и 0-ные водные растворы диметилсуль" О фоксида или диметилформамида. На предметное стекло наносят каплю одного 1 нз растворов, куда помещают до 10 экземпляров гельминтов.,Наблюдение за объектами ведут под микроскопом. 15 В опыте используют 500 экземпляроввзрослых оллулани 273 - личинок ол- лулан, Установлено,что все живые оллулаиы и их личинки начинают двигаться в 40-ном растворе диметил-. сульфоксида через 35-37 с, в 60 ном растворе диметилсульфоксида через 32-36 с и в 60-ном растворе диметилформамида - через 30 - 40 с.П р и м е р 2. Свиноматкам, инвазированным оллуланами., задают пиперазин в лечебной дозе, т,е. 15 Гна животное утрбм и столькЬ же вечером. Подопытных и контрольных животных убивают через 10 сут. Прижизненных методов определения эффектив- ЗОности препаратов при этом заболева-.нии нет. Для определения эффективности пиперазина берут пробы слизистой оболочки желудка, из которых выделяют оллулан в их личинки. Часть 35 их.помещают в каплю 50-ного раствора диметилсульфоксида, других - в раствор такой же концентрации диметилформамида, а третьих оставляют длясравнения предложенного способа с 4известным.От воздействия растворов диметилсульфоксида и диметилформамида оллула ны и их личинки как от подопытных1так и от контрольных животных начина .ют активно двигаться через 30-40 с .т.е, остаются .живыми. Следовательно,пиперазин не оказывает на одлулангубительного действия.При определении жизнеспособностиэтих же оллулан методом подогрева- Яния у 21 гельминта из 96 просмотренных подвижность .не отмечена,чтосоставляет 21,8. Причем количествонеподвижных гельминтов одинаково как в пробах, взятых от контрольных,танк и от подопытных животныхИз этого примера видно, что предлагаемый метод точнее, чем метод определения жизнеспособности нагреванием.П р и м е р 3. Используют живыеоллуланы и их личинки. В исходнуюпробу заранее добавляют 6 убитых соляной кислотой оллулан. Проводят по 5,опытов с 50-ным раствором диметилсульфоксида и 50-ным раствором диметилформамида, а также способомнагревания. В каждом опыте учитывается по 100 гельминтов.Опыт с диметилсульфоксидом: живыхгельминтов обнаружено 191, 93, 93,93 и 94 экземпляров) 92,8 + 0,98 эк-земпляров.Опыт с диметилформамидом: живыхгельминтов обнаружено (91, 92, 92,94 и 94 экземпляров) 92,6 ф 1,2 экземпляров.Опыт с нагреванием: живых гельминтов обнаружено. 74, 81, 87, 90 и 93экземпляров) 95 + 6,8 экземпляров.Следовательно, ошибка предлагаемого метода определения жизнеспособности гельминтов минимальна. В то жевремя метод нагреваиия дает ошибкунамного выше,Предлагаемый способ определения1 жизнеспособности гельминтов,. например, оллулан их личинок, обладает высокой точностью, а также отличаетсяпростотой в исполнении, Диметилсульфоксид, диметилформамид выпускаютсяпромышленностью, а: расход .этих веществ минимальнйй - с помощью однойкапли раствора можно определитьжизнеспособность у 100 и более эк"земпляров оллулаи и их личинок.Спбсоб не требует специального оборудования. Формула изобретения Способ определения жизнеспособности гельминтов и их личинок, вклю мучающий стимуляцию подвижности гельминтов и их личинок и последующийподсчет подвижных и неподвижных объектов, о т л и ч а ю щ и.й с я тем,что, с целью повышения точности способа, стимуляцию подвижности гельминтов и их личинок осуществляют воздействием на них 40-60-ного водногораствора диметилсульфоксида или диметилформамида в течение 30-40 с.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССР9 550156, кл. А 61 В 10/00, 1977.2. Котельников ГА. Диагностикагельминтозов животных. М.,"Колос",1974, с. 188-200,